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利用293细胞拯救和扩增重组人41型腺病毒: 2015年; 人41型腺病毒(Human adenovirus type 41,HAdV-41)为难养腺病毒,E1区缺失的HAdV-41无法在293细胞中拯救并扩增,本研究试图通过反向遗传学操作获得能够在293细胞中拯救并扩增的重组HAdV-41。首先,对原有的骨架质粒pAdbone41进行改造:通过重叠延伸PCR方法将HAdV-41的E3区基因替换为HAdV-5E4orf6编码区;将HAdV-5E1A增强子克隆至HAdV-41E4区启动子上游,获得新的骨架质粒pAdbone41E4EE。该骨架质粒与线性化的穿梭质粒pSh41-GFP在E.coli BJ5183菌株同源重组得到腺病毒质粒pAd41E4EE-GFP。pAd41E4EE-GFP经Pme I酶切线性化后转染293细胞,拯救出重组病毒HAdV-41-E4EE-GFP。经过7轮扩增,超速离心纯化后获得1.0ml浓度为8.0×10^(10) vp/mL的重组腺病毒,其感染滴度为1.7×10~9 IU/mL,电子显微镜下观察可见形态完整的病毒颗粒,限制性内切酶酶切分析及PCR鉴定结果均表明携带HAdV-5E4orf6基因与E1A增强子基因的重组腺病毒载体构建正确。本研究利用反向遗传学技术对病毒载体进行改造,实现了在293细胞中培养E1区缺失的HAdV-41的目的。; 邹小辉郭小娟肖蓉王敏鲁茁壮洪涛; 关键词：病毒载体

调节T细胞迁移在疫苗增效中的作用: 背景:1-磷酸鞘氨醇(S1P)可通过结合1-磷酸鞘氨醇受体1(S1PR1)介导T细胞迁移,在T细胞成熟、归巢和活化过程中均发挥重要作用。初始性T细胞在淋巴结内与提呈同源性抗原的DC相互作用过程中,S1PR1下调可抑制T细...; 庄新品蒋涛肖蓉高长醒竺青; 关键词：FTY720 T细胞疫苗设计; 文献传递

一种经miniSOG标记的人腺病毒的制备被引量：4: 2016年; 为了探索腺病毒感染细胞后病毒核心在胞内运输的过程,本研究构建了一株经miniSOG标记IX蛋白的人腺病毒。首先,我们通过重叠延伸PCR的方法合成了miniSOG基因,将其克隆至pcDNA3表达载体后转染293细胞,荧光显微镜下可观察到miniSOG蛋白的表达,经固定,封闭,DAB-H2O2染色,OsO4固定染色后,可见表达miniSOG蛋白的细胞呈深褐色。之后将miniSOG构建至腺病毒穿梭载体pShuttle的IX基因3’端,并通过与骨架质粒pAdeasy-1在E.coli BJ5183细菌内同源重组获得了重组腺病毒质粒pAd5-IXSOG。pAd5-IXSOG质粒经PacI酶切线性化后转染293细胞,拯救出重组腺病毒HAdV-5-IXSOG。经过8轮扩增,超速离心纯化后获得2.0ml浓度为6.0×1011vp/mL的重组腺病毒,电子显微镜下可见完整病毒颗粒。本研究经反向遗传学技术对腺病毒载体进行改造,成功制备了经miniSOG标记的重组腺病毒HAdV-5-IXSOG,该病毒可用于腺病毒感染细胞的实时追踪。; 邹小辉肖蓉郭小娟屈建国鲁茁壮洪涛; 关键词：腺病毒病毒拯救

调节T细胞迁移在疫苗增效中的作用: 背景：1-磷酸鞘氨醇(S1P)可通过结合1-磷酸鞘氨醇受体1(S1PRl)介导T细胞迁移,在T细胞成熟、归巢和活化过程中均发挥重要作用。初始性T细胞在淋巴结内与提呈同源性抗原的DC相互作用过程中,S1PR1下调可抑制T细...; 庄新品蒋涛肖蓉高长醒竺青; 关键词：FTY720 T细胞疫苗设计

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肖蓉