王怡霖
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
- 供职机构：山东农业大学植物保护学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 徂徕山病死松树中线虫的分离及鉴定被引量：3
- 2019年
- 徂徕山林场地处鲁中山区的中心位置,具有重要的生态价值。近年徂徕山林场出现了松树的枯死现象,影响了徂徕山松林生态系统的健康和景观。为探究徂徕山松树死亡的原因,分析松树死亡是否与松材线虫病有关系,本研究调查了徂徕山10个林区,采集了969个样品,从线虫形态学、分子序列测定方面进行了鉴定和分析。研究显示,在徂徕山衰弱、病死木中未发现松材线虫,但是发现了大量的拟松材线虫(Bursaphelenchusmucronatus)。
- 高锋赵涛陈海燕王怡霖刘会香
- 关键词：拟松材线虫分子鉴定
- 苹果树腐烂病菌VmSom1基因克隆与序列分析
- 2020年
- 苹果树腐烂病(Valsa canker of apple)是由苹果黑腐皮壳菌(Valsa mali)引起的重要枝干病害,危害严重,明确病菌致病机制对有效防控病害十分重要和必要。在众多研究方法中,分离和克隆致病相关基因进而研究基因功能是揭示病菌致病机制的基础。本论文在已建立的苹果树腐烂病菌农杆菌介导的遗传转化体系(Agrobacterium tumefaciens mediated transformation ATMT)基础上,经过表型筛选,发现了V23菌株。该菌株生长速率明显减慢,菌落表面较为湿润,菌丝生长弱,致病性完全丧失且不产生子实体。通过侧翼序列扩增和Blast及基因序列分析,确定了T-DNA插入突变基因位于苹果树腐烂病菌第12号染色体69537和69547之间;系统进化分析显示,该基因的氨基酸序列与Som1基因编码的camp-dependent protein kinase pathway protein聚为一类,因此将该基因命名为VmSom1。它是一个转录调控因子,其基因大小为2723 bp,含有5个外显子和4个内含子,为单拷贝,编码824 aa的氨基酸,包含LisH结构域和NLS结构域,理论蛋白分子量约87.82 k Da,等电点pI为6.39,亲水性较强。本研究为下一步该基因功能研究奠定基础。
- 王怡霖赵涛孙庚午刁雨菲冯军利于涛何邦令刘会香
- 关键词：苹果树腐烂病菌生长发育
- 苹果腐烂病菌VmHMG基因敲除突变体获得及表型分析被引量：6
- 2018年
- 苹果腐烂病菌是引起我国苹果腐烂病的主要病原真菌,对苹果产业造成了严重的经济损失。为有效控制病害的发生,本试验研究了VmHMG对苹果腐烂病菌的生长发育及致病性的影响。本研究通过融合PCR技术将苹果腐烂病菌HMG-box基因上下游片段与及潮霉素筛选标记基因Hpt片段,构建敲除载体,利用聚乙二醇(PEG)介导的原生质体转化,再经潮霉素初筛、PCR扩增和Southern杂交验证,最终从95个转化子中得到2株敲除突变体Δ1-5、Δ2-22,敲除效率为2.1%。与野生菌株相比,Δ1-5、Δ2-22在菌落颜色、子实体产生等方面没有发生明显变化;突变株平均生长速率分别下降了10.8%和19.8%,但致病性分别增加了48.5%和56.2%。由此可知,VmHMG基因缺失抑制了苹果腐烂病菌的生长,增强了其致病性,对其他性状影响不明显。本研究通过获得VmHMG基因敲除突变体,初步分析了该基因的功能,为明确病菌的生长发育及致病作用机制奠定了理论基础。
- 贾晓曼王怡霖孙庚午何邦令葛顺峰王玉涛刘会香
- 关键词：苹果腐烂病菌同源重组融合PCR
- Botryosphaeria dothidea突变体库的构建及分析
- 2017年
- Botryosphaeria dothidea是重要的林果溃疡病害病原,分布广,危害重。本研究应用ATMT(Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation)介导的B.dothidea遗传转化体系成功构建了1053个转化子的突变体库,并且通过继代培养、PCR验证和Southern blot证明潮霉素B抗性基因整合到B.dothidea基因组中且可稳定遗传。以B.dothidea sdau11-126为对照,对526株转化子的菌落形态、生长速率和致病性进行分析,筛选获得了8个变异明显且稳定的突变体,以期为B.dothidea致病基因的分离、克隆和功能鉴定奠定基础。
- 郑伟贾晓曼王玉珂王怡霖孙庚午何邦令刘会香
- 关键词：突变体
