梁宸
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：吉林医药学院更多>>
- 发文基金：吉林省科技厅国际合作项目国家自然科学基金吉林省杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- α1-Giardin的原核表达与多克隆抗体制备被引量：1
- 2016年
- 目的原核表达α1-Giardin并制备兔抗rα1-Giardin多克隆抗体。方法以蓝氏贾第鞭毛虫DNA为模板,PCR扩增α1-giardin编码基因片段,经双酶切后连入原核表达载体pET-41a(+),构建重组表达载体pET-41a(+)-α1-giardin,热激法转化大肠埃希菌E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导后收集菌体并裂解,采用SDS-PAGE检测目的蛋白的表达,采用His-tag亲和层析柱纯化融合蛋白。将α1-Giardin蛋白与等体积弗氏完全佐剂乳化后免疫新西兰白兔,隔周以同样剂量蛋白加等体积弗氏不完全佐剂加强免疫2次。末次免疫后一周颈动脉取血,制备多抗血清,采用间接ELISA法测定抗体效价。结果成功构建原核表达载体pET-41a(+)-α1-giardin,转化大肠埃希菌后经IPTG诱导表达分子质量单位为34.8ku的可溶性蛋白;经His-tag亲和层析柱纯化获得高纯度的重组α1-giardin蛋白,制备的免疫兔抗血清ELISA滴度为1∶51 200。结论成功克隆、表达并纯化了贾第虫α1-giardin蛋白,制备了高滴度的抗α1-giardin多克隆兔血清,为以α1-Giardin为抗原的疫苗研究奠定了基础。
- 李瑶张宏梅时文艳梁宸李垚艳冯宪敏
- 关键词：蓝氏贾第鞭毛虫原核表达多克隆抗体
- 棘阿米巴原虫actin1基因原核表达载体构建与鉴定被引量：1
- 2018年
- 棘阿米巴角膜炎的临床诊断比较困难,以角膜刮片的病原学诊断为主,样本采集困难,临床诊断率低。本研究构建了棘阿米巴原虫actin1基因进行原核表达载体,并进行鉴定。以棘阿米巴滋养体cDNA为模板,通过特异性引物,经聚合酶链反应,获得actin1基因开放阅读框（ORF）片段,进行克隆及序列分析,经双酶切,连接,构建重组表达载体pET22b（＋）-actin1。将重组载体转化入大肠杆菌（E.coli）DH5α,筛选出阳性菌落,经PCR扩增和酶切鉴定后,阳性质粒送样测序;提取阳性质粒,转化入E.coli BL21（DE＋）,1mol/L IPTG诱导重组蛋白r-actin1的表达。自棘阿米巴滋养体cDNA扩增得到约774bp的actin1基因片段;经PCR和酶切鉴定表明,重组表达载体pET22b（＋）-actin1构建成功;重组菌株BL21（DE＋）/pET22b（＋）-actin1,经培养、诱导、SDS-PAGE电泳,出现1条相对分子质量约为30 000重组蛋白条带,r-actin1表达诱导表达成功。成功构建重组表达载体pET22b（＋）-actin1,并诱导表达。
- 李垚艳梁宸杨春梅王双露李金旺冯宪敏
- 关键词：棘阿米巴原核表达
