- 土壤宏基因组文库中3个新β-葡萄糖苷酶基因的克隆及其酶学特性被引量：4
- 2013年
- 为从喀斯特土壤宏基因组DNA中筛选获得新型β-葡萄糖苷酶基因,采用β-葡萄糖苷酶活性筛选策略,从宏基因组文库中筛选β-葡萄糖苷酶基因,并对其进行初步酶学性质分析。结果表明:构建宏基因组文库中外源DNA总量约为5.4×107bp,平均插入片段约为2.7kb。筛选获得3个编号为pGLU-001、pGLU-002和pGLU-003的表达β-葡萄糖苷酶活性的克隆。其外源片段分别包含有1 383bp、1 437bp和1 227bp的ORF,分别编码460、478和408氨基酸组成的蛋白质,PI分别为5.12、4.78和8.78,蛋白质分子量分别为52.3KD、52.6KD和47.7KD。BLAST软件分析结果,pGLU-001和pGLU-002分别与来自Di-ctyoglomus thermophilum和Bacillus subtilis TU-B-10的β-葡萄糖苷酶的氨基酸组成上有78.3%和66.7%的相似性,而pGLU-003经BLAST比对后未发现与目前报道的β-葡萄糖苷酶基因的核酸及氨基酸水平上有相似性,从而推测pGLU-003蛋白是来源于未培养微生物的新型β-葡萄糖苷酶。进一步酶学性质研究表明,3个β-葡萄糖苷酶最适温度分别约为30℃、40℃及50℃,最适pH分别约为6.0、9.0及10.0。Mg2+对3个酶有较强的促进作用,同时Zn2+对pGLU-001也有较强的促进作用,而EDTA和Fe3+对于3个酶都有不同程度的抑制作用。
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- 关键词：纤维素酶
