- 甲型H1N1流感病毒HA1、NAe重组蛋白的表达及纯化效率研究
- 2013年
- 目的研究甲型H1N1流感病毒血凝素HA1及神经氨酸酶NAe重组蛋白的表达效率及纯化方法。方法在2009年广东省首株甲型H1N1流感病毒的HA和NA全长基因克隆的基础上,去除其信号肽(或信号锚定序列)和跨膜结构,在原核表达体系中表达HA1和NAe蛋白,采用SDS-PAGE和Western-blot法研究蛋白的表达效率、IPTG诱导作用及His Bind树脂纯化对蛋白免疫活性的影响。结果获得了具有免疫活性的高浓度和高纯度的HA1-57 290 Mr及NAe-69 280 Mr重组蛋白。结论截短优化的甲型H1N1流感病毒HA1、NAe重组基因经IPTG诱导可在原核表达体系中高效表达且纯化后具有较好的免疫活性。
- 钟剑波肖春花张玲陈伟烈肖桂娥魏绍静
- 关键词：甲型H1N1流感病毒血凝素神经氨酸酶原核表达重组蛋白
- 抗流感病毒药物神经氨酸酶抑制剂奥司他韦研究进展被引量：4
- 2011年
- 高致病性禽流感H5N1病毒在亚州的爆发和2009新型H1N1病毒的全球性传播，提示设计与研发新型的抗流感药物尤为迫切。神经氨酸酶在病毒复制和传播中发挥重要作用，且活性中心高度保守，其抑制剂成为抗流感药物研发的热点。该文回顾了临床广泛使用的奥司他韦（osehamivir）药动学、药效学及耐药性方面的研究进展，为此药今后的临床应用提出建议。
- 张玲魏绍静
- 关键词：神经氨酸酶抑制剂流感病毒奥司他韦
- 2009H1N1流感病毒神经氨酸酶基因克隆与表达被引量：2
- 2011年
- 目的制备2009H1N1流感病毒神经氨酸酶(NA)重组蛋白,为建立H1N1快速检测方法和神经氨酸酶抑制剂筛选模型奠定基础。方法采用MDCK细胞方法分离2009H1N1流感病毒,提取病毒RNA,RT-PCR生成NA基因,构建原核表达载体PET-102/D-TOPO-NA,IPTG诱导表达重组蛋白,SDS-PAGE凝胶电泳、WersternBlotting鉴定重组蛋白。结果成功分离2009H1N1流感病毒,NA蛋白119、152、275、292位氨基酸分别为Glu、Arg、His和Cys。SDS-PAGE凝胶电泳蛋白分子相对分子质量约为64000,与预期一致。WesternBlotting证实该蛋白具有神经氨酸酶抗原活性。结论 IPTG诱导原核表达神经氨酸蛋白的最适浓度为0.1mmol/L。实验得到的蛋白尚需进一步纯化。
- 张玲魏绍静肖春花钟剑波陈伟烈张复春
- 关键词：MDCK细胞神经氨酸酶原核表达
