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人外周血基因组DNA提取的影响因素及方案选择被引量：2: 2016年; 目的人外周血是基因组DNA样品的主要来源之一,了解外周血基因组DNA提取的研究进展,有助于法医检案中选择并优化DNA提取方案。方法回顾外周血基因组DNA提取的主要环节和影响因素,综述文献进行比较研究。结果白细胞裂解是决定DNA提取产量和质量的关键环节,去污剂是各种白细胞裂解液的核心组分。裂解后DNA分离纯化是影响DNA提取的另一重要环节,目前固相介质分离纯化法应用较广。实验室手工方案在一般实验室处理小批量样品时仍具有独特优势,试剂盒方案目前应用较为广泛,自动化提取系统尤其适用于大批量样品处理。然而,任何方案均不能同时满足DNA产量与质量、操作时间、安全性、费用等指标的同时最优化的要求。结论人外周血基因组DNA提取方案众多,需综合考虑DNA提取效能、操作时间、安全性、费用、设备和试剂易得性等多种因素,选择适宜的DNA提取方案。; 张振杨文涛陈炯冯巍; 关键词：外周血基因组DNA DNA提取

LATE-PCR非标探针法检测食管癌易感基因ALDH2 rs671位点3种基因型被引量：1: 2020年; 目的建立食管癌易感基因乙醛脱氢酶2(ALDH2)编码区SNP rs671的LATE(Linear-After-The-Exponential)-PCR非标探针分型技术。方法用Chelex法提取口腔拭子DNA,LATE-PCR技术制备单链,等位基因特异性探针与单链杂交后,在荧光定量PCR仪上通过链融解曲线分析,根据融链峰进行SNP分型。用经PCR-RFLP法分型的已知样本验证本方法的有效性。结果LATE-PCR产物直接链融解曲线分析可以区分GG型和A基因携带者。PCR后加入非封闭探针分析可以鉴别3种基因型。15 bp 3’末端C6氨基修饰的封闭探针,可以在PCR前加入体系,A型、G型任一探针即可准确地鉴别3种基因型。结论LATE-PCR结合非标探针技术,可以实现SNP rs671的简便、快速、闭管分型,可用于食管癌高危个体筛查、法医嫌疑人排查等。; 杨斌杨瑞周路敏张振辉冯巍赵贵森; 关键词：乙醛脱氢酶2 食管癌单核苷酸多态性 DNA探针

微小RNA加工剪切酶Dicer 1 rs1057035多态性与乳腺癌相关性研究被引量：1: 2021年; 目的探讨微小RNA加工剪切酶Dicer 1 rs1057035多态性与中国汉族人群乳腺癌的相关性。方法收集176例女性乳腺癌患者和216例健康体检女性的外周静脉血,运用二代测序技术分析Dicer 1 rs1057035多态性在乳腺癌患者和健康体检者中的分布频率。结果Dicer 1 rs1057035基因型分布在女性乳腺癌患者和女性健康体检者中差异无统计学意义(P>0.05)。Dicer 1 rs1057035基因型分布与乳腺癌雌激素受体、孕激素受体、临床分期、肿瘤大小、淋巴结转移无关(P均>0.05)。结论Dicer 1 rs1057035可能不是中国汉族人群乳腺癌发病的易感位点。; 贾文远芦延峰冯巍刘彩媛秦豪杰潘新民; 关键词：乳腺癌微小RNA 单核苷酸多态性

hLCN6单克隆抗体偶联免疫磁珠用于混合细胞中精子的分离与法医学鉴定被引量：6: 2019年; hLCN6 (Human lipocalin 6)是附睾特异性分泌蛋白,它能与精子结合,对精子的成熟发挥着重要作用。为了探究应用抗hLCN6单克隆抗体偶联免疫磁珠技术分离混合细胞中精子的可行性,建立混合斑中精子细胞分离的新方法,制备了不同比例的精子-上皮细胞混合悬液及混合斑样本,以生物素标记的hLCN6单克隆抗体孵育样品,再用亲和素包被的免疫磁珠捕获分离精子细胞,提取精子DNA进行PCR-STR (Short tandem repeat)分型,同时以差异裂解法提取精子,比较两者的差异。经ELISA检测,hLCN6单克隆抗体与抗原的亲和力解离常数(Kd)为3.47×10~–9 mol/L。免疫印迹和免疫荧光结果显示,hLCN6在精子中可检测到,主要定位于精子头部的顶体后区域,但不能在上皮细胞中检测到。hLCN6抗体偶联的免疫磁珠复合物能够实现精子细胞的捕获和分离,显微镜观察显示免疫磁珠能够与精子头部特异性结合。对精子个数为10~3/mL的混合悬液,STR分型成功率(正确分型13个以上,RFU>200)为90%。当精子数量≥10~4/mL时,分型成功率达10~0%;对精子数分别为10~3/mL、10~4/mL、10~5/mL的混合斑STR分型成功率分别为40%、90%和10~0%。综上,hLCN6抗体偶联免疫磁珠法可以有效分离混合细胞中的精子,分型成功率高于传统的差异裂解法。该方法简单高效,可作为性侵案件中法医混合斑检验的有效补充手段。; 陈炯冯巍詹飞; 关键词：免疫磁珠混合斑 PCR-STR

常备试剂法提取人外周血DNA被引量：1: 2016年; 目的探讨使用一种常备试剂提取外周血DNA,而无需PK、毒性有机溶剂或特殊缓冲液。方法分别使用常备试剂法、试剂型kit法和柱式型kit法提取外周血DNA,进而比较3种方法的DNA产量和质量。结果使用常备试剂法,提取200μL人外周血的DNA量为（5.77±3.49）μg,低于试剂型kit法（P〈0.05）,但与柱式型kit法（P=0.10）差异无统计学意义。常备试剂法提取的DNA样品,A230/A260为0.49±0.05,A260/A280为1.98±0.10,片段大于15 kb,Alu I、Bam HI-HF酶切完全,PCR扩增稳定、高效,DNA质量与两种kit法差异无统计学意义。常备试剂法的每样品耗费低,操作时间约30-40 min。结论常备试剂法能够保证外周血DNA产量和质量,试剂方便易得,操作快速、安全,且费用低廉,可作为一般实验室备选方案。; 刘青青孙丹丹冯巍陈炯; 关键词：外周血基因组DNA DNA提取

HRM技术在非人源性法医物证检测中的应用: 2022年; 高分辨率熔解曲线(High Resolution Melting,HRM)是为检测核酸序列中的遗传变异而发展起来的一种后PCR方法,因简单高效、准确可靠,受到越来越多的法医科研人员关注。本文概述了HRM技术的原理、优势,综述了其在法医非人源性物证鉴定中的应用进展,并对其前景进行展望。; 张卫萍阿地来·吐尔逊冯巍秦豪杰莫耀南翟仙敦; 关键词：法医学高分辨率熔解曲线

抗人载脂蛋白6单链抗体的筛选、制备及活性鉴定被引量：2: 2020年; 目的:筛选特异性抗人载脂蛋白6单链抗体(anti-hLCN6 scFv),并进行表达纯化和活性鉴定。方法:采用RT-PCR技术,用抗体可变区简并引物,从hLCN6免疫小鼠的淋巴细胞中扩增全套V_H和V_L基因,装配成scFv基因后将其克隆到噬菌体载体pFAB5C中,构建scFv噬菌体抗体库。对抗体库进行4轮富集,筛选抗hLCN6阳性scFv。经原核表达纯化后,用Western blot和间接ELISA对其活性进行鉴定。结果:筛选到2株亲和力较高的阳性克隆,测序表明其序列一致。获得了高纯度的scFv抗体,其对抗原具有良好的亲和力和特异性。结论:成功筛选到特异性抗hLCN6 scFv,为利用该抗体进行混合斑中的精子分离奠定了基础。; 陈炯詹飞冯巍; 关键词：噬菌体展示单链抗体

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冯巍

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