陈桂华 作品数:5 被引量:49 H指数:3 供职机构: 华南农业大学动物科学学院 更多>> 发文基金: 广东省科技攻关计划 国家现代农业产业技术体系建设项目 广东省自然科学基金 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 更多>>
广东地区2016-2017年规模化猪场腹泻病原调查分析 被引量:11 2017年 为了解广东地区导致猪群腹泻病原的流行状况,对广东省部分地区的猪场进行猪群腹泻的流行病学调查,共采集腹泻样品273份,采用PCR和RT-PCR的方法检测能够造成猪群腹泻的病原,包括猪流行性腹泻病毒(PEDV),猪轮状病毒(PoRV),猪传染性胃肠炎病毒(TGEV),以及近年开始流行的猪德尔塔冠状病毒(Porcine Deltacoronavirus,PDCoV),猪库布病毒(Porcine Kobuvirus,PKoV),猪博卡病毒(Porcine Bocavirus,PBoV),猪萨佩罗病毒(Porcine Sapelovirus,PSV)。检测结果显示,PEDV仍然是导致猪群腹泻的主要病原,而TGEV没有检测到。尤为突出的是PKV仅次于PEDV的高阳性率,因此其在猪群腹泻中的作用值得进一步探索。 周玲 陈桂华 伍子娴 麦凯杰 李迪 王胜阳 马静云 张祥斌关键词:PCR 国内首株猪塞内加谷病毒(Seneca Valley virus)的分离鉴定 被引量:23 2016年 猪塞内加谷病毒(Seneca Valley virus,SVV)是一种新出现的可感染仔猪及母猪并导致仔猪死亡的病毒。2015年3月份至今年在我国、巴西及美国出现了几起塞内加谷病毒感染猪群并伴随严重的临床症状及发病死亡的疫情,造成严重的经济损失。为分离鉴定SVV,本研究将RT-PCR检测为SVV阳性的猪临床样品无菌处理后接种PK-15细胞,连续传代培养。通过细胞病变、RT-PCR扩增、电镜观察和基因序列测定对细胞培养物进行鉴定。结果表明我们成功分离到国内首株SVV,并将其命名为SVV CH-01-2015。全基因组的系统发育分析表明SVV CH-01-2015位于Senecavirus病毒属,与Senecavirus病毒属中的病毒成员同源性最高,由此可以确定本研究所分离到的SVV属于Senecavirus病毒属。本研究为进一步研究SVV的致病性和致病机制奠定了基础。 赵晓亚 伍绮文 伍子娴 陈桂华 白杨 马静云关键词:细胞培养 猪圆环病毒3型Cap蛋白的表达纯化及单克隆抗体的制备 被引量:10 2019年 猪圆环病毒3型(porcine circovirus 3,PCV3)是新近被发现的病原,与之相关的疾病包括母猪繁殖障碍、猪皮炎与肾病综合征、猪呼吸道疾病综合征、仔猪先天性震颤等。本研究采用PCR方法从PCV3/CN/GDLC1/2016株中扩增出衣壳蛋白(Cap)基因,对Cap基因进行序列分析并预测其二级结构,将去除信号肽序列的PCV3 Cap基因片段克隆到表达载体pET-32a(+)中,测序验证后转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行原核表达,经镍柱纯化表达蛋白,通过免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体(MAb)。结果表明,重组PCV3 Cap蛋白为包涵体,大小约38 ku,最佳诱导时间为4 h。通过镍柱成功纯化PCV3 Cap蛋白,筛选获得A8F、C6D、C7E、C6E、C9C、C9E、B7D和C11C等8株能稳定分泌抗PCV3 Cap蛋白抗体的杂交瘤细胞株。ELISA结果表明,A8F、C6D、C9E和B7D MAb均属于IgG2b亚类,C7E、C6E和C9C均属于IgM亚类,C11C属于IgG1亚类;A8F、B7D和C11C MAb效价均大于1∶64 000,C9E效价为1∶32 000,C6E效价为1∶8 000,C6D、C7E和C9C效价均为1∶1 000。经Western-blot分析,重组PCV3 Cap蛋白能与抗His标签抗体和抗PCV3 Cap蛋白MAb进行特异性免疫印迹反应,证实表达蛋白具有良好的反应原性。本研究为今后PCV3的防控提供了技术支持和实验基础,具有重要的生产实践意义。 陈桂华 孙媛 周玲 李迪 白杨 麦凯杰 高金铭 马静云关键词:CAP蛋白 原核表达 纯化 单克隆抗体 杜洛克猪全基因组连锁不平衡分析 被引量:3 2016年 利用猪Illumina Porcine SNP60K芯片对福建某核心种猪场杜洛克猪216个个体进行基因型检测,基于该高密度SNP芯片数据,运用Haploview软件计算全基因组连锁不平衡并构建杜洛克猪连锁不平衡图谱。结果表明,该杜洛克猪群体不同染色体上相邻标记间r2存在波动,波动范围为0.46~0.59,相邻标记间的平均连锁不平衡程度r^2为0.52,SSCl0的r。最低(平均为0.46),SSC6的r^2最高(平均为O.59),连锁不平衡水平随着标记间距的增加而衰减、变异程度随之减小。该研究结果可为杜洛克猪遗传分析及全基因组选择研究提供参考。 刁淑琪 罗元宇 蔡迪 陈桂华 陈赞谋 张豪 李加琪 张哲关键词:杜洛克 SNP 塞内加谷病毒VP1蛋白的表达纯化及鉴定 被引量:3 2017年 为表达并纯化塞内加谷病毒(Senecavirus A,SVA)的VP1蛋白,克隆SVA的VP1基因,测定其序列并构建遗传进化树,分析VP1蛋白氨基酸突变位点并预测其二级结构。然后将VP1基因克隆至载体pET-32a(+)中,IPTG诱导表达VP1重组蛋白,用Ni-NTA亲和层析柱纯化并用W estern-blot进行验证。结果显示,表达的VP1重组蛋白的大小为48 ku,主要以包涵体形式存在,能与抗His标签的单克隆抗体发生特异性免疫反应。结果表明成功表达并纯化出VP1重组蛋白。 白杨 伍绮文 陈桂华 周玲 李怡昀 周雯馨 马若瑶 马静云关键词:VP1蛋白 纯化