石元元
- 作品数：14 被引量：39H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生化学工程更多>>
- 上海副猪嗜血杆菌分离鉴定及其耐药性分析被引量：19
- 2015年
- 本研究旨在调查我国上海副猪嗜血杆菌对临床常用抗菌药的耐药情况,为该病的临床用药与防治提供数据支持。2013-2014年从上海市多个屠宰场采集样品以及送检病料共计484份,采用细菌分离培养及PCR的方法,分离鉴定出62株副猪嗜血杆菌。采用微量琼脂稀释法测定21种临床常用抗菌药的最小抑菌浓度。药物敏感性测定结果表明,所有菌株都对阿奇霉素、替米考星、泰妙菌素、阿米卡星、头孢噻呋和左氧氟沙星敏感,超过90%的菌株对红霉素（60,96.8%）、氟苯尼考（59,95.3%）、氯霉素（60,96.8%）、庆大霉素（60,96.8%）、壮观霉素（61,98.4%）、青霉素（57,91.9%）、氨苄青霉素（57,91.9%）和环丙沙星（61,98.4%）敏感,但对四环素和恩诺沙星耐药率较高,分别为75.8%（47）和30.6%（19）。耐药谱分析显示,37.1%的菌株对两种以上的抗菌药耐受。本研究结果显示上海市副猪嗜血杆菌对临床常用抗菌药物耐药总体状况尚不严重,但针对多个临床常用药物的耐药菌株已经出现,应对其耐药性进行长期监测。
- 张悦李蓓蓓魏建超邵东华刘珂石元元邱亚峰马志永
- 关键词：副猪嗜血杆菌抗菌药耐药
- 一例猪肺三毛滴虫病的鉴定
- 三毛滴虫,尤其是猪三毛滴虫,作为一种常在的寄生虫寄生于猪的鼻腔、胃以及肠道中。该寄生虫在世界范围内广泛分布,但因地区不同而存在差异。早在上个世纪60年代,Hilbler等报道猪三毛滴虫鼻腔的分离率超过50％。最近我国学者...
- 相笑刘浩蒋蔚石元元黎倩倩魏建超李蓓蓓刘珂邵东华王权马志永邱亚峰
- 关键词：肺灌洗液显微镜观察
- 中华按蚊源日本脑炎病毒的分离鉴定及其分子特征的分析被引量：4
- 2017年
- 为了解上海市蚊源日本脑炎病毒(JEV)的分子特征,2014年从上海市嘉定区猪场采集蚊媒样品1万余份,采用BHK21和C6/36细胞培养法进行病毒分离,通过RT-PCR和IFA技术对分离株进行鉴定。结果表明,分离到1株JEV,命名为JD-15,源自中华按蚊。用JD-15株分别感染BHK21和C6/36细胞,72 h后所有细胞均发生明显病变(CPE),其细胞半数感染量(TCID50)为1.96×106PFU。用分离株JD-15脑内接种3周龄乳鼠,结果测得半数致死量(LD50)为4.2×101PFU,表明该毒株具有较强的神经毒力。对JD-15株的E基因进行克隆测序及进化分析,结果显示,该株JEV属于基因Ⅲ型,与减毒活疫苗株SA-14-14-2的E基因核苷酸序列的同源性为98.1%,氨基酸序列的同源性为97.5%。本研究为乙型脑炎的流行病学调查提供了科学依据,对上海市蚊虫及蚊媒病的防治具有重要意义。
- 刘茜倩魏建超钟登科吴亚玲石坤张克龙陆美林肖长广李蓓蓓刘珂邵东华邱亚峰石元元马志永范红结
- 关键词：日本脑炎病毒进化分析
- 猪谷氧还蛋白Ⅰ(GLRX1)分子实时荧光定量PCR检测方法的建立
- 本实验利用SYBR GreenⅠ荧光定量技术建立一种相对定量检测猪谷氧还蛋白1(GLRX1)的方法。针对猪GLRX1设计对特异性引物,将PCR扩增的片段分别连接到T-easy载体上构建重组质粒,经筛选、鉴定纯化后,倍比稀...
- 马改妮刘珂郇贝丽魏建超邵东华李蓓蓓邱亚峰石元元马志永
- 关键词：实时荧光定量PCR
- 文献传递
- PRRSV感染对猪肺泡巨噬细胞IFITM3基因转录的影响
- 2018年
- 干扰素诱导跨膜蛋白3(interferon inducible transmembrane proteins 3,IFITM3)作为抗病毒蛋白可以抑制多种病毒的感染,本研究针对猪IFITM3基因设计特异性引物,构建重组质粒并作为阳性标准品,建立了检测IFITM3基因的SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR方法。结果显示,该方法最低检出下限为10~2 copies/μL,且线性关系好(R^2≥0.997),敏感性高,特异性强,重复性好,批内、批间变异系数均小于3%。将猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAM)细胞,在不同感染时间对细胞中IFITM3 mRNA进行检测。结果显示,PRRSV感染早期IFITM3转录水平保持不变,在感染后转录水平逐渐升高。IFITM3 mRNA在PRRSV感染PAM过程中转录变化,可能是PRRSV宿主免疫逃逸的机制之一。
- 李玉明武专昌刘珂马改妮魏建超邵东华李蓓蓓邱亚峰石元元马志永
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒SYBR猪肺泡巨噬细胞
- 猪血清淀粉样蛋白3(SAA3)分子SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用
- <正>本实验利用SYBR GreenⅠ荧光定量技术建立一种绝对定量检测猪血清淀粉样蛋白3（SAA3）的方法。根据GenBank中登录号为NM001044552.1的猪血清淀粉样蛋白3（SAA3）的全长基因序列,设计特异性...
- 郇贝丽刘珂马改妮魏建超邵东华李蓓蓓邱亚峰石元元马志永
- 文献传递
- PRRSV N蛋白抗原肽的预测、合成以及针对该抗原肽抗体的制备和应用被引量：1
- 2018年
- 基于生物信息学、化学合成技术和免疫学技术,利用预测的抗原肽进行抗体的制备已被广泛地应用。本研究探讨了利用预测的抗原肽制备针对PRRSV N蛋白的特异性抗体。首先,利用生物学软件对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)N蛋白进行抗原性预测,获得一个位于蛋白N端16个氨基酸的候选抗原肽。通过BLAST比对,发现该抗原肽在不同北美型毒株中高度保守。其次,采用Fmoc固相法进行抗原肽合成,并将合成的抗原肽通过MBS法偶联到KLH载体蛋白上。随后,将偶联好的抗原肽与弗氏完全佐剂或不完全佐剂混合,免疫新西兰大白兔,制备抗血清,并利用IgG亲和层析的方法纯化抗体。最后,利用ELISA、Western blot和间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence assay,IFA)对抗体的特异性进行检测,结果显示,利用偶联好的抗原肽包被ELISA板,检测抗体的滴度,纯化抗体的滴度超过10~5;Western blot结果显示,该抗体(1∶2000)可以特异地识别PRRSV感染的Marc145细胞中的N蛋白,重要的是该抗体可以与不同毒株反应;IFA检测显示,该纯化的抗体(1∶100)可以检测PRRSV感染的细胞。因此,利用生物信息学软件预测的PRRSV N蛋白的抗原肽,能有效地应用于抗PRRSV N蛋白抗体的制备,制备的抗体不仅为研究PRRSV N蛋白奠定基础,而且为研究PRRSV与细胞相互作用提供了一个有效的工具。
- 相笑张彦兵石元元李玉明刘珂魏建超邵东华李蓓蓓童光志马志永邱亚峰
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白抗原肽抗体
- 猪血清淀粉样蛋白3分子SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用被引量：2
- 2017年
- 分别根据猪血清淀粉样蛋白3(serum amyloid A3,SAA3)基因序列以及猪三磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)基因全长序列设计特异性扩增引物,进行PCR扩增,并将PCR扩增片段连接至相应载体上构建重组质粒。两个重组质粒经测序鉴定和纯化后,倍比稀释作为标准曲线样品,用于实时荧光定量PCR中SAA3、GAPDH标准曲线的制备,并进行反应的灵敏性、特异性和重复性检测。结果显示,标准曲线线性关系R2均在0.98以上;特异性检测显示该引物可以特异性检测到猪SAA3、GAPDH扩增曲线;组内和组间变异系数均小于5%,说明本研究成功建立猪SAA3的荧光定量PCR检测方法。运用建立的荧光定量RT-PCR对正常以及感染猪繁殖与呼吸综合征病毒的肺泡巨噬细胞和猪组织进行检测,可检测到猪SAA3的表达,正常组与接毒组之间显示出明显的表达差异。本研究初步建立了检测猪SAA3基因的SYBR Green荧光定量RT-PCR的方法,为后续对猪传染性疾病与猪SAA3之间相互关系的研究提供了一种特异、灵敏的检测方法。
- 郇贝丽刘珂马改妮魏建超邵东华李蓓蓓邱亚峰石元元马志永
- 关键词：SYBR
- 猪血清淀粉样蛋白3(SAA3)分子SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用
- 本实验利用SYBR GreenⅠ荧光定量技术建立一种绝对定量检测猪血清淀粉样蛋白3(SAA3)的方法。根据GenBank中登录号为NM01044552.1的猪血清淀粉样蛋白3(SAA3)的全长基因序列,设计特异性引物,扩...
- 郇贝丽刘珂马改妮魏建超邵东华李蓓蓓邱亚峰石元元马志永
- 猪清道夫受体SRA/CD204多克隆抗体的制备以及该受体介导的细菌吞噬功能分析被引量：2
- 2015年
- 针对猪SRA/CD204胞外区对应的基因片段（614～1324 bp）进行引物设计,PCR扩增获得目的片段并克隆至原核表达载体p ET-28a中,构建重组表达质粒p ET-SRA-c。利用原核表达系统获得高效表达于包涵体中的重组蛋白r SRA-c（约32 k Da）,利用亲和层析技术获得纯化的r SRA-c。利用纯化的r SRA-c为免疫原,免疫Balb/c小鼠（100μg/小鼠）,制备多抗血清。经Western blot结果显示,该多抗血清不仅可以识别r SRA-c,而且可以识别真核表达的全长的猪SRA/CD204（约55 k Da）。免疫荧光分析表明该多抗血清可以清楚地识别表达于CHO细胞膜上的SRA/CD204。最后,利用表达猪SRA/CD204的CHO细胞,对其介导的细菌吞噬功能进行了研究,结果表明猪SRA/CD204可以有效地介导大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的吞噬。本研究为进一步研究猪SRA/CD204在病原微生物感染中的作用奠定了基础。
- 黎倩倩张彦兵相笑魏建超齐鹏飞石元元陆莹梅夏鹏刘珂邵东华李蓓蓓马志永孙延鸣邱亚峰
- 关键词：清道夫受体重组蛋白多克隆抗体细菌
