陈明伟
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 供职机构：中山大学附属第三医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 壳聚糖酶基因在软骨细胞中的表达及对壳聚糖介导基因转染的影响
- 2014年
- [目的]探讨携带壳聚糖酶(CSN)基因的重组慢病毒感染软骨细胞后影响CSN活性的因素,及CSN在壳聚糖(CS)/DNA纳米粒介导基因转染软骨细胞中的作用。[方法]构建携带CSN和红色荧光带白(RFP)基因的重组慢病毒(LV-CSN)并感染兔关节软骨细胞,流式细胞仪及荧光显微镜检测其感染率;二硝基水杨酸比色法(DNS)检测对CSN活性的影响因素;以CS/DNA纳米粒介导体外基因转染软骨细胞,检测CSN对CS/DNA纳米粒介导基因转染软骨细胞的作用。[结果]带RFP基因的LV-CSN感染软骨细胞后48 h和第7 d,RFP表达率分别为(91.40±0.98)%和(91.67±1.00)%,二者差异无统计学意义(P=0.583)。p H值、温度及铜离子浓度对CSN的活性有明显影响。LV-CSN感染软骨细胞后CS/DNA组的基因转染效率显著高于裸p DNA组和CS/DNA组(P<0.05),但铜离子可以拮抗这种作用。[结论]在一定时间内LV-CSN感染软骨细胞后可稳定表达CSN,CSN的活性受p H值、温度及铜离子浓度的影响;CSN可提高CS/DNA对软骨细胞的基因转染效率,铜离子则可拮抗这种作用。
- 连礼熠卢华定陈明伟
- 关键词：壳聚糖酶壳聚糖非病毒基因载体基因转染软骨细胞
- 曲霉菌内切型壳聚糖酶基因克隆及在大肠杆菌中的表达被引量：3
- 2014年
- 背景:壳聚糖酶是高效、特异降解壳聚糖的酶,因此高效稳定地表达具有较高活性的壳聚糖酶可有效提高壳聚糖介导的基因治疗效果。目的:构建一种可高效降解壳聚糖的壳聚糖酶基因,探讨其在大肠杆菌中的表达及影响其活性的主要因素。方法:根据GenBank公布的曲霉菌CJ22-326内切型壳聚糖酶基因序列信息(EU302818),设计并合成23条重叠引物,PCR法扩增壳聚糖酶基因片段,构建原核表达质粒pET28a-His6-CSN,将其转化大肠杆菌,收集融合蛋白His6-CSN,检测融合蛋白的表达及酶活性,同时检测不同pH值及温度对壳聚糖酶活性的影响。结果与结论:Western-blot证实融合蛋白His6-CSN成功表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测显示表达的融合蛋白相对分子质量约为29 000,二硝基水杨酸比色法测定壳聚糖酶对壳聚糖的降解活性显著高于溶菌酶(P<0.05),但低于灰色链霉菌壳聚糖酶(P<0.05)。壳聚糖酶的最适pH值和最适温度分别为6.0和50℃,当pH值在4.0-7.0、温度在30-50℃范围内具有较高的酶活性。
- 卢华定连礼熠陈明伟戴驭虎
- 关键词：生物材料国家自然科学基金
- 新型透明质酸改性的CS-g-PEI/pDNA的构建及介导转染软骨细胞的体外研究被引量：1
- 2017年
- 目的探讨新型透明质酸改性的聚乙烯亚胺-壳聚糖/DNA(CS-g-PEI/pDNA)纳米粒作为治疗骨关节炎(OA)的可行性。方法通过复凝聚法制备成CP/pDNA纳米粒,然后通过巯基的原位交联与巯基化的透明质酸(HASH)形成交联网络,从而合成HA-CP/pDNA纳米粒;透射电镜观察纳米粒形貌,马尔文粒度分析仪分析其不同构成比(HA-SH∶CP)时的粒径、表面电位等;凝胶电泳阻滞实验检测CP/pDNA的结合力;CCK-8细胞毒性实验检测该基因载体的细胞毒性;以HA-CP/pDNA纳米粒、裸pDNA、CS/pDNA、CP/pDNA纳米粒、LipofectamineTM2000转染软骨细胞,荧光显微镜、流式细胞仪检测基因转染效率。结果 (1)HA-CP/pDNA纳米粒呈较均一的球形,并随HA-SH∶CP质量比的增加,粒径先减小后增大,表面电位电荷逐渐降低。(2)HA-CP/pDNA纳米粒对软骨细胞毒性远低于LipofectamineTM2000(P<0.05)。(3)HA-CP/pDNA纳米粒对软骨细胞转染率较CP/pDNA、CS/pDNA纳米粒大大提高(P<0.05)。(4)大量游离HA导致HA-CP/pDNA纳米粒对软骨细胞的转染效率下降。结论 HA-CP/pDNA纳米粒具有更强的DNA保护能力,对软骨细胞毒性小,转染效率高,并且对软骨细胞具有一定的靶向性。
- 陈明伟范彬彬卢华定
- 关键词：透明质酸软骨细胞
