王秀玲
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 供职机构：江西农业大学生物科学与工程学院江西省农业微生物资源开发与利用工程实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- Delftia sp.T3-6酰胺水解酶DamH晶体制备及X-射线衍射分析被引量：1
- 2016年
- Dam H是菌株Delftia sp.T3-6产生的具有酯键水解活性的酰胺酶,对其原核表达、纯化、结晶条件及蛋白晶体X-射线衍射条件进行了研究。经过原核表达,采用Ni-NTA亲和层析法和透析法纯化蛋白,成功获得了适合晶体生长的蛋白Dam H。289 K下采用座滴气相扩散法进行晶体筛选和制备,在蛋白浓度为15 mg/m L及含有0.2 mol/L乙酸铵,pH 7.1,21%(W/V)聚乙二醇3350的缓冲液中获得了理想的蛋白晶体。在低温100 K下通过X-射线衍射仪(Rigaku Micro Max-007 HF)收集了晶体衍射数据。晶体衍射分辨率为3.4,空间群为三斜晶系P1,晶胞参数为a=14.1,b=23.9,c=85.7,α=112.6°,β=77.2°,γ=89.1°。结晶条件的优化和晶体制备为Delftia sp.T3-6 Dam H高分辨率晶体制备提供了参考,晶体衍射数据的收集为Dam H三维结构的解析奠定了前期基础,将有助于阐明Dam H的催化机制。
- 王飞张碧滢赵晓艳王秀玲吴晓玉崔中利
- 关键词：酰胺水解酶纯化X-射线衍射
