李荣华
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：陕西师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 人白介素24单克隆抗体的制备与鉴定
- 2011年
- 目的:制备抗白细胞介素24(Interleukin 24,IL-24)的单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。方法:应用分子生物学技术,构建含人IL-24编码序列的原核表达载体,表达并纯化了人IL-24融合蛋白。用纯化人IL-24融合蛋白免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,用间接ELISA方法筛选杂交瘤细胞,有限稀释法进行亚克隆,采用免疫印迹及免疫组化染色对抗体的特异性进行了鉴定。结果:获得3株能稳定分泌抗IL-24单抗的杂交瘤细胞,分别命名为1G2,3F4,4A6。通过免疫印迹及免疫组化染色检测显示,这3株单抗均能够与IL-24特异性结合。结论:成功制备抗IL-24单克隆抗体,为进一步探索IL-24在抗肿瘤中的作用机制奠定了基础。
- 刘世海李荣华王东阳王丽娴夏海滨
- 关键词：白细胞介素24原核表达杂交瘤单克隆抗体
- 人endostatin、K5及endostatin-K5重组腺病毒载体的构建及其表达被引量：3
- 2009年
- 目的:人endostatin、K5及endostatin-K5基因克隆,重组腺病毒载体的构建及其表达产物体外活性检测。方法:采用PCR方法扩增基因,通过酶切连接方法将3种基因片段克隆到腺病毒shuttle载体pAd5-CMV-H1H2-MCS-6His中;用磷酸钙沉淀法分别将经PacI酶切的表达人endostatin、K5及endostatin-K5的腺病毒shuttle载体与PacI酶切的腺病毒骨架共转染HEK293细胞;用CsCl密度梯度离心法纯化制备病毒;用重组腺病毒感染HeLa细胞并在不同时间点收获蛋白,Western blot检测24h、48h和72h的蛋白表达量;通过MTT方法检测蛋白对ECV-304生长抑制作用。结果:成功制备表达人endostatin、K5及endostatin-K5重组腺病毒载体;Westernblot可以检测到蛋白表达,蛋白表达量随病毒感染HeLa细胞的时间延长而逐渐增高;由重组腺病毒所表达的3种蛋白对ECV304细胞均有明显的生长抑制作用。结论:由含有人en-dostatin、K5及endostatin-K5基因的重组腺病毒载体所表达的蛋白对ECV-304生长具有明显的抑制作用。
- 李慧瑾张伟锋王东阳李荣华齐宗利赵俊丽夏海滨
- 关键词：ENDOSTATINK5腺病毒载体MTT检测肿瘤
