李自立
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：国家工程研究中心更多>>
- 发文基金：湖南省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 两种不同密度分离液分离的脐血CD34^+、CD34^-细胞造血活性比较
- 2016年
- 目的:比较两种不同密度的ficoll-泛影葡胺分离造血干细胞群的效果,找出更适合分离脐血造血干、祖细胞的分离密度,为脐血造血干细胞的医学研究及临床应用提供一定依据。方法:采集脐血6份,根据密度梯度离心法,用质量分数为(1.068±0.001)g/m L、(1.077±0.001)g/m L ficoll-泛影葡胺分离液等量分离同一份脐血,分别计数这两种分离液的单个核细胞获得率及细胞存活率,得到的单个核细胞再分别经免疫磁珠分选法获得高纯度的CD34^+细胞及除去了CD34^+的单个核细胞(CD34^(-depleted) MNCs),统计分析这两种不同密度分离液获得的CD34^+细胞、CD34^(-depleted)MNCs在甲基纤维素中形成CFU-GM集落数。结果:1(1.068±0.001)g/m L、(1.077±0.001)g/m L两种分离液分离的单个核细胞平均密度分别为(1.52±1.0)×10~6个/m L、(2.84±0.98)×10~6个/m L,(P>0.05);经免疫磁珠纯化后的CD34^+细胞占单个核细胞(MNCs)的比率分别是(1.26±0.47)%、(1.07±0.15)%,(P>0.05);2(1.068±0.001)g/m L分离的单个核细胞经免疫磁珠纯化后1.5×10~3个CD34^+细胞形成CFU-GM的集落(140.5±14.5)显著多于(1.077±0.001)g/m L的集落数(118.3±13.8)(P<0.05);(1.068±0.001)g/m L分离的5×10~4个CD34^(-depleted) MNCs形成的CFU-GM集落数(132.0±5.1)也显著多于(1.077±0.001)g/m L的集落数(101.3±9.4),(P<0.05)。结论:与1.077 g/m L Ficoll相比,1.068g/m L Ficoll-泛影葡胺分离液分离的单个核细胞中的CD34^+、CD34^-细胞造血活性更强,更适合用来分离脐血中造血干细胞群。
- 董玲凤余瑾赵艳李自立窦丹丹胡亮
- 关键词：密度梯度离心
- HistoGel预包埋法在微小组织石蜡切片中的应用被引量：1
- 2015年
- 目的:探讨微小组织Histo Gel预包埋的石蜡切片制作方法和优势。方法:选择拟胚体(embryoid body,EB)为微小组织,将人类胚胎干细胞(human Embryonic Stem Cell,h ESC)切割成小块,用拟胚体培养基在低贴附培养皿中悬浮培养形成拟胚体。收集拟胚体,4%的多聚甲醛固定。将Histo Gel加热到60℃熔解,离心去除拟胚体中的固定液,把液态的Histo Gel加到拟胚体上,调整拟胚体的相对位置使其相对集中,待胶冷却凝固,将含有拟胚体的胶块取出,进行常规的石蜡切片操作,包括脱水、透明、浸蜡、包埋、切片和苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色。显微镜下观察拟胚体的形态,并用拟胚体的形态完好度来评判这种方法。结果:Histo Gel仅在60℃便可熔解,室温可以冷却凝固,含有拟胚体的胶块在整个操作过程中很方便。展片过程中,石蜡和Histo Gel能够保持平整。HE染色的结果可以看出,拟胚体内部结构完好,细胞核和细胞质清晰可辨。结论:Histo Gel可以作为一种微量细胞组织的预包埋胶制作石蜡切片,而且相比琼脂预包埋,Histo Gel因其操作更加方便和特有的物理特性显示出更多的优点。
- 窦丹丹董玲凤文华李自立胡亮
- 关键词：石蜡切片
