刘道然
- 作品数：7 被引量：1H指数：1
- 供职机构：汕头大学医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学文化科学农业科学医药卫生更多>>
- 兔抗人ERK8多克隆抗体的制备方法
- 本发明公开了一种兔抗人ERK8多克隆抗体的制备方法。本发明将ERK8蛋白第446‑473位的28个氨基酸作为ERK8多克隆抗体表位。在大肠杆菌中诱导表达GST融合蛋白，用Glutathione Sepharose 4B ...
- 许彦鸣刘道然蔡娜丽
- 文献传递
- 研究型细胞生物学实验模式在临床医学基础教学中的应用探索被引量：1
- 2017年
- 本文针对我院临床医学全英班的优势及原有细胞生物学实验教学模式存在的弊端,结合教学工作中的体会,从实验教学内容及方式两方面对研究型细胞生物学实验教学模式进行探索与改革。问卷调查结果发现学生对教学改革的反馈很好,实验教学改革取得良好效果。
- 蔡娜丽刘道然黄东阳陈海滨梁斌常晓兰许彦鸣
- 关键词：教学模式探索
- 兔抗人ERK8多克隆抗体的制备方法
- 本发明公开了一种兔抗人ERK8多克隆抗体的制备方法。本发明将ERK8蛋白第446‑473位的28个氨基酸作为ERK8多克隆抗体表位。在大肠杆菌中诱导表达GST融合蛋白，用Glutathione Sepharose 4B ...
- 许彦鸣刘道然蔡娜丽
- 重组人源MAPK15基因稳定表达细胞系的构建及其对肺癌细胞迁移的影响
- 2016年
- 目的:研究MAPK15基因对人肺癌H1299细胞迁移作用的影响。方法:将人源MAPK15克隆到真核表达系统中并通过脂质体法转染H1299;用含有Zeocin抗性的培养基进行筛选,挑取抗性细胞克隆扩大培养;Western blot检测MAPK15蛋白表达;通过划痕和Transwell实验研究MAPK15在H1299中细胞迁移率变化。结果:Western blot表明,挑取的抗性细胞克隆稳定表达MAPK15;划痕和Transwell实验结果显示,有MAPK15高表达的H1299中细胞迁移明显快于对照组。结论:在人肺癌H1299中,MAPK15高表达能促进细胞迁移,这为进一步阐明MAPK15在肺癌发生过程中所起的作用提供了一定的参考依据。
- 朱七五蔡娜丽巫丹丹刘道然许彦鸣
- 关键词：H1299细胞细胞迁移
- 核转录因子及其突变基因的克隆与GST融合蛋白的表达纯化及磷酸化活性的检测
- 2017年
- 目的:原核表达IκBα及IκBα(S32,36A)基因,纯化获得GST-IκBα及GST-IκBα(S32,36A)融合蛋白。方法:利用PCR扩增含有酶切位点EcoRⅠ及NotⅠ的IκBα基因,将其装入pGEX-5X-1原核表达载体中。通过点突变获得pGEX-5X-1-IκBα(S32,36A)质粒。将正确的重组载体转入大肠杆菌BL21(DE3),用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达蛋白,再用Glutathione Sepharose 4B beads纯化GST融合蛋白,最后通过Western Blot鉴定纯化后的融合蛋白。结果:成功构建了pGEX-5X-1-IκBα及pGEX-5X-1-IκBα(S32,36A)原核表达载体。在37℃条件下,0.1mmol/L的IPTG能够诱导表达大量可溶性GST-IκBα与GST-IκBα(S32,36A)蛋白;纯化的融合蛋白可被抗IκBα的单克隆抗体特异性识别。最后通过体外激酶试验验证了IκBα能被HeLa细胞中存在的上游激酶所磷酸化,而第32,36位丝氨酸突变后IκBα不具有磷酸化活性。结论:纯化的GST-IκBα/IκBα(S32,36A)蛋白具有生物学活性,可用于后续的生物学研究。
- 蔡娜丽俞飞远巫丹丹臧中盛戴丽娟尧月赛留羊梁展羚刘道然许彦鸣
- 关键词：IΚBΑ原核表达蛋白纯化
- HeLa细胞中ERK8突变基因的发现
- 2017年
- 目的:检测HeLa细胞中ERK8基因的表达并对其进行序列分析。方法:Westernblot检测HeLa细胞中ERK8蛋白的表达。提取HeLa细胞中的RNA,用RT-PCR方法得到ERK8基因片段,克隆后进行序列测定和分析。结果:首次发现HeLa细胞中存在ERK8基因突变:ERK8 S192P。结论:ERK8基因在HeLa细胞中的表达及其突变的发现,为进一步研究ERK8突变体在HeLa细胞中的功能研究奠定基础。
- 蔡娜丽杜纪英俞飞远巫丹丹刘道然许彦鸣
- 关键词：HELA细胞突变
- His-细胞外调节蛋白激酶8融合蛋白的表达与纯化
- 2015年
- 目的:对细胞外调节蛋白激酶(ERK)8进行表达、纯化及活性鉴定。方法:PCR扩增目的基因ERK8,进行Bam HⅠ和HindⅢ双酶切,与经Bam HⅠ和HindⅢ表达载体p ET-28a进行连接,转化大肠杆菌BL21,以不同浓度(0.2、0.4、0.8、1.0mmol/L)异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)和不同温度(15、20、25、37℃)对重组质粒进行诱导表达,并用Western blot技术鉴定表达的融合蛋白;用Ni2+金属螯合亲和层析柱法对融合蛋白进行纯化。结果:成功构建p ET-28a-ERK8重组质粒,并获得纯化的有活性的His-ERK8融合蛋白,且IPTG终浓度为0.2 mmol/L,温度37℃,时间5 h下,该融合蛋白的表达量最大。结论:通过对p ET-28a-ERK8的构建和ERK8蛋白表达与纯化,为进一步研究ERK8蛋白的结构和功能奠定实验基础。
- 巫丹丹蔡娜丽刘道然许彦鸣
