刘永胜
- 作品数：87 被引量：303H指数：10
- 供职机构：四川大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家杰出青年科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生一般工业技术更多>>
- 低温和常温下萌发的青霉菌孢子比较转录组研究
- 2023年
- 扩展青霉菌是一种自然界中分布广泛的常见植物病原真菌,其侵染采后果实,造成腐烂和霉变.为了发掘低温和常温下孢子萌发过程中差异的分子机制和参与孢子萌发的重要基因,分别对4℃和25℃下培养的扩展青霉菌孢子进行转录组测序;利用比较转录组分析方法进行基因表达数据的挖掘和比较分析.形态学观察表明,25℃培养8 h后,孢子呈现凸起,开始萌发;12 h后,大部分孢子萌发形成细长菌丝,完成萌发过程.而4℃培养12 h后,孢子的萌发仍然被抑制.对4℃和25℃下分别培养8、12 h的孢子取样,进行转录组测序.差异表达基因的分析表明:4℃和25℃下,不同的细胞生长和分裂相关基因在孢子萌发过程中差异表达;同时挖掘得到608个温度调控孢子萌发的核心基因.此外,萌发过程中,与扩展青霉菌毒力相关的部分过氧化物酶编码基因、效应因子基因和棒曲霉素合成途径基因的表达水平明显响应了温度的变化;参与了不同温度下孢子萌发的调控.效应因子基因PeHsp70_1被鉴定为是一个参与低温调控孢子萌发且涉及多个通路的重要基因;其在4℃下培养的孢子中明显被下调表达,与其他效应因子的蛋白互作网络分析表明其处于网络的核心中央节点.本研究结果可为扩展青霉菌的防治研究提供优良的候选基因.(图9表3参39)
- 杨宇若蒋礼玲陈诗佳张真真陈思宇刘洋王琳超王明雪贾举庆刘永胜黄胜雄
- 关键词：孢子萌发
- 根癌农杆菌介导的籼稻蜀恢527遗传转化方法的探究被引量：3
- 2012年
- 籼稻(Indica rice)组织培养过程中愈伤组织转化率较低,尤其是对优良品种成熟胚愈伤高频再生体系的建立和影响转化的主要因素还缺乏研究。在一定程度上制约着籼稻基因工程的进展。以籼稻品种重穗型恢复系蜀恢527成熟种子为材料,研究了不同温度和光照条件对其成熟胚愈伤诱导及生理状态的影响;并在分化培养基中添加不同的激素和调整激素间浓度配比从而筛选出蜀恢527最佳分化培养基。结果表明:在32℃光照条件下,蜀恢527成熟种子在N6D诱导培养基上诱导愈伤组织效果最佳,继代2次后胚性愈伤质量状态最好。以基本培养基NBS中添加0.02 mg/L NAA+2 mg/L KT+3 mg/L 6-BA+50 mg/L VC+0.5 mg/LIAA为蜀恢527成熟胚遗传转化的最佳分化培养基,分化频率较高,分化率达到36.42%。利用优化的籼稻遗传转化体系,通过根癌农杆菌介导法将水稻转录因子OsbZIP39转入籼稻基因组中,经PCR分子初步检测得到了抗性植株。
- 刘亮亮唐维喻旭刘永胜
- 关键词：根癌农杆菌籼稻愈伤组织
- 番茄bZIP转录因子家族的生物信息学分析被引量：18
- 2014年
- bZIP转录因子广泛参与了植物生长发育以及抗逆应答的调控,属于重要的转录因子家族.为了系统地阐明番茄bZIP转录因子家族成员特征和基因表达模式,利用生物信息学软件和方法,对番茄基因组中的bZIP转录因子进行了系统的分析研究.结果表明:番茄基因组共编码70个bZIP转录因子基因,划分为14个亚族,即A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、K、L、S和X.番茄、拟南芥和水稻bZIP基因的系统进化树揭示了进化过程中Group 3和Group 4的成员数目大大增加,进化过程较激烈.氨基酸保守域DOG1和MFMR分别特定存在于12个和6个bZIP成员蛋白序列中.在番茄各器官组织中,干旱、盐、细菌和病毒侵染胁迫条件下,43个番茄bZIP基因不同程度地被诱导表达.以基因表达值上调或下调1.5倍为阈值,部分bZIP基因的表达水平被显著地诱导上调或下调表达.这些基因很可能参与了调控番茄的果实等组织的生长发育,以及逆境胁迫条件下的防御应答反应.通过荧光实时定量PCR,其中7个代表性番茄bZIP基因,被进一步验证了在叶片和果实中的表达水平.本研究鉴定得到的番茄bZIP转录因子基因,可用于今后番茄育种及改良的基因工程研究.
- 朱芸晔薛冰王安全王文杰周昂黄胜雄刘永胜
- 关键词：番茄BZIP转录因子生物信息学分析
- 一种影响水稻根系发育和稻谷产量的基因及其应用
- 一种影响水稻根系发育和稻谷产量的基因及其应用，该基因具有序列表中SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。将SEQ ID NO：1所述基因片段正向和反向插入真核表达载体，获得本发明所述真核重组质粒。将上述真核重组质粒转化水...
- 刘永胜牛向丽张惠莹
- 文献传递
- 番茄SlWRKY23基因的克隆及其抗病性和耐盐性分析被引量：8
- 2014年
- WRKY转录因子是普遍存在于植物界中的一类转录因子,参与了植物在生物和非生物逆境胁迫中的多种应答。前期研究表明,在PstDC3000侵染及盐胁迫下番茄SlWRKY23基因的表达水平提高。为了研究番茄SlWRKY23转录因子对PstDC3000的抗病性及在盐胁迫逆境中的功能,通过农杆菌介导的遗传转化方法获得转SlWRKY23基因植株,并对3个独立的转基因株系(WRKY23-1、WRKY23-5和WRKY23-7)进行了抗逆性分析。结果表明接种PstDC3000后,转基因植株表现明显的抗病表型,抗病防御相关基因SlPR1和SlPR1a1的表达量显著高于野生型;盐胁迫处理后,转基因植株表现出明显的抗盐表型,逆性相关基因SlRD22和SlDREB2A的表达量显著高于野生型。该结果表明SlWRKY23基因在番茄抗PstDC3000和盐胁迫过程中具有正调控作用,通过上调逆性相关基因的表达量增强抗逆性。
- 孙晓春高永峰李会容杨述章杨述章
- 关键词：盐胁迫抗病性
- 提高番茄品质的番茄去泛素化酶基因AMSH3被引量：1
- 2016年
- AMSH3酶是去泛素化酶中MPN(+)/JAMM蛋白酶家族的一员,能结合泛素化蛋白上的泛素分子。文章在番茄中发现了一去泛素化酶基因SlAMSH3,与拟南芥去泛素化酶基因AtAMSH3在核酸水平和蛋白水平分别有81%和71%的相似性。拟南芥中去泛素化酶AtAMSH3会影响植物液泡的形成和液泡蛋白的运输途径。文章构建了SlAMSH3果实特异表达的过表达载体,并通过根瘤农杆菌介导转化到野生型番茄中,通过筛选获得SlAMSH3在果实中高表达阳性株系,实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)分析显示,转基因番茄果实中SlAMSH3的表达量明显高于野生型果实(p<0.05)。文章测定了阳性番茄株系绿熟期果实叶绿素质量浓度及红熟期果实的单果质量、果实糖度、果实硬度、番茄红素质量浓度和β-胡萝卜素质量浓度。结果表明,转基因番茄果实的叶绿素总质量浓度、番茄红素和β-胡萝卜素比野生型分别提高178.61%、40.53%和74.86%,其他指标无显著差异。因此,SlAMSH3果实特异过表达的方法能够改良番茄果实品质,为基因工程方法改良番茄果实品质做出了新尝试。
- 刘艳红李光伟刘永胜
- 关键词：转基因番茄
- 猕猴桃耐旱相关基因AcMYB44的克隆及功能
- 2022年
- R2R3-MYB转录因子在植物非生物胁迫应答中起重要作用.从‘红阳’猕猴桃(Actinidia chinensis cv.Hongyang)中筛选并克隆R2R3-MYB转录因子家族基因AcMYB44.经生物信息学分析和在拟南芥中转基因功能验证,结果显示:(1)通过RT-PCR克隆得到AcMYB44的全长序列.qRT-PCR分析表明,AcMYB44在猕猴桃不同组织中均有表达,但在根中表达量最高;(2)AcMYB44全长870 bp,共编码289个氨基酸,蛋白质分子量(Mr)约为31.6×103,是含有2个保守SANT/MYB结构域的亲水性蛋白,属于R2R3-MYB转录因子亚家族.分子进化树显示AcMYB44与茶树、烟草和马铃薯的同源蛋白亲缘关系最近.绿色荧光蛋白(GFP)示踪结果显示AcMYB44编码蛋白定位于细胞核内.PlantCARE在线分析表明,AcMYB44启动子区域含有多个与抗逆、激素应答、光信号传递等相关的顺式作用元件;(3)构建AcMYB44植物表达载体,经农杆菌介导转化到拟南芥中,获得6个独立转基因株系.经qRT-PCR分析,AcMYB44在6个转基因株系中均有不同程度的表达.在甘露醇胁迫下,转基因株系拥有更高的萌发率和更多的根生长量.本研究表明AcMYB44能增强植物的抗旱能力,为猕猴桃抗旱品种选育提供了新的基因靶点.(图8表1参31)
- 戚钰王梨嬛张亚斌程浩刘博刘永胜
- 关键词：猕猴桃MYB转录因子基因克隆基因转化
- 猕猴桃CHS基因RNA干涉载体在果实中的瞬时表达可以有效影响花青素积累(英文)被引量：9
- 2014年
- 近来猕猴桃基因组草图已经完成,然而对猕猴桃功能基因的研究还非常有限.我们拟建立RNA干扰(RNAi)系统来研究猕猴桃的基因功能.将红阳猕猴桃中编码查耳酮合成酶的CHS基因片段插入到载体pHB和pTCK303中,构建35S::CHS-RNAi和UBI::CHS-RNAi载体.将两个重组质粒转入根癌土壤杆菌EHA105中,分别将0.7 mL农杆菌(D=0.8)从果实底部注入花后106 d(果肉颜色开始变红)的猕猴桃果实中.5 d后,与空载体相比,注射了CHS-RNAi载体的猕猴桃果肉颜色变浅,花青素含量、CHS的表达量显著降低.预测这种快捷的瞬时表达系统将为猕猴桃基因功能研究提供有效手段.
- 孙家旗唐维刘永胜
- 关键词：猕猴桃CHS花青素RNAIQRT-PCR
- 基因枪介导抗除草剂基因2mG2-epsps转化玉米的初步研究被引量：12
- 2010年
- 本研究以优良玉米自交系X2211和78599的幼胚胚性愈伤组织为受体材料,采用基因枪介导法将抗除草剂基因2mG2-epsps导入玉米胚性愈伤组织,经草甘膦(glyphosate)筛选,产生抗性愈伤组织并获得320株再生植株,通过喷施除草剂筛选,有65株表现良好的耐除草剂特性。PCR分析表明,其中的7株表现PCR阳性,初步证明2mG2-epsps基因整合到玉米基因组中,平均转化率为2.2%。同时研究了金粉用量和轰击距离对玉米基因枪转化效率的影响。转化时以金粉用量100μg/枪,发射点与靶细胞距离60mm最佳。
- 余桂容杜文平宋军陆伟徐利远刘永胜
- 关键词：玉米愈伤组织基因枪
- 番茄SlWRKY80基因共抑制表达影响转基因植株抗逆性的研究被引量：1
- 2014年
- 利用植物基因工程技术,构建了植物表达载体pBI121-35S::SlWRKY80,并利用根癌农杆菌介导法转化番茄,得到转基因阳性植株.通过生物信息学分析SlWRKY80蛋白序列与9种物种进行同源比对,发现高度保守的WRKY结构域和C2HC型锌指结构.采用Real-Time PCR分析转基因植株中SlWRKY80mRNA的表达情况,结果显示SlWRKY80的表达量显著下调,出现共抑制现象.用不同浓度的NaCl对转基因种子和野生型种子进行胁迫处理,结果显示在NaCl浓度为100mM和150mM时,转基因幼苗初生根的长度与野生型相比相对较短,显示SlWRKY80对初生根的生长有促进作用;用Pto DC3000接种转基因植株和野生型植株叶片,结果显示野生型植株叶片中细菌增殖率是转基因植株叶片中的2.5倍,显示SlWRKY80在番茄抗病信号转导中扮演负调控作用.
- 曾辉高永峰刘继恺余进德黄胜雄刘永胜
- 关键词：番茄共抑制盐胁迫PTO负调控
