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猪小肠上皮细胞酵母双杂交cDNA文库的构建被引量：5: 2019年; 猪小肠上皮细胞(intestinal epithelial cell,IECs)是猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)在宿主体内感染的靶细胞,为了研究PEDV在体内与宿主细胞蛋白之间的互作关系以便于揭示其致病机理,本研究以IECs为研究对象,提取了IECs的总RNA,利用SMART技术经过反转录、扩增和纯化获得双链cDNAs后,将其与pGADT7-Rec和carrier DNA共同转化至酵母Y187菌株,进行选择性培养基(SD/-Leu)筛选以及文库容量及质量的鉴定。结果显示,本研究构建的IECs-cDNA文库其库容量为1.3×10~8 pfu/mL,插入cDNA片段长度为250～2500 bp,文库阳性率达100%。本研究结果表明构建的IECs-cDNA文库具有较好的多态性,为后续研究PEDV与宿主细胞蛋白之间的互作关系提供了有力支持。; 李慧春陈鹏飞李先斌丁思嘉王康张文超杨德强李林徐晶晶虞凌雪姜一峰高飞于海童光志周艳君; 关键词：猪流行性腹泻病毒

PRRSV在感染早期通过活化CREB竞争抑制p65与CBP结合被引量：2: 2019年; 为研究细胞内cAMP反应元件结合蛋白(CREB)的结合蛋白(CBP)在高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)感染后的结合动态对Ⅰ型干扰素(IFN-Ⅰ)表达的影响,本研究利用HP-PRRSV强毒Hu N4株感染宿主细胞,采用CO-IP方法分析CREB的磷酸化情况及其结合动态。结果显示Hu N4株感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs)能够引起CREB明显磷酸化,Hu N4株感染PAMs和Marc-145细胞使p38磷酸化水平显著上调,PKA通路抑制剂可以明显抑制Marc-145细胞中CREB的磷酸化水平,但不影响PAMs中CREB的磷酸化水平。并且Hu N4株感染Marc-145细胞1 h后磷酸化的CREB能够与CBP结合,并抑制了p65与CBP的结合。当抑制剂H-89和SB203580抑制Marc-145细胞中CREB的磷酸化后,CREB与CBP的结合同时受到抑制。本研究表明HP-PRRSV Hu N4株感染细胞后,可以通过激活p38 MAPK通路而活化CREB,活化的CREB与p65竞争结合CBP,而抑制p65与CBP的结合,使得HP-PRRSV在感染早期抑制了IFN-β的表达。本研究为深入研究HP-PRRSV的免疫抑制机理提供了实验依据。; 李先斌王鑫谭祥梅陈鹏飞赵雄伟吴瑕虞凌雪高飞姜一峰于海童光志周艳君; 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 CREB P65 CBP IFN-Β

猪Delta冠状病毒N蛋白单克隆抗体及其抗原表位和应用: 本发明公开了一种由保藏号为CCTCC NO：C2017257的杂交瘤细胞株分泌的猪Delta冠状病毒N蛋白单克隆抗体。本发明还公开了包含该单克隆抗体的检测猪Delta冠状病毒的试剂盒。本发明还公开了猪Delta冠状病毒N...; 童光志周艳君李慧春张文超陈鹏飞李先斌虞凌雪姜一峰高飞李丽薇; 文献传递

猪流行性腹泻病毒S1基因在昆虫细胞中的表达与鉴定被引量：8: 2017年; 本文以猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)流行毒株FJzz1/2011株的S1蛋白的切割位点设计合成特异性引物,通过RT-PCR扩增获得S1基因,将其克隆至转移载体p Fast Bac HTA中,获得了重组质粒p Fast Bac HTA-S1,将该重组质粒转化E.coli DH10Bac感受态细胞,得到重组穿梭质粒r Bacmid-S1,再将重组穿梭质粒r Bacmid-S1转染Sf9细胞,48 h后即可观察到明显的细胞病变。将收获的r Bac-S1-P1代病毒在Sf9细胞上连续传3代后,收获细胞培养物,分别用间接免疫荧光鉴定(indirect immunofluorescence assay,IFA)、SDS-PAGE电泳和Western blot分析。结果显示,P3代重组病毒r Bac-S1感染的细胞均呈现亮绿色荧光,证实表达产物可以被PEDV阳性血清和抗S1蛋白的单抗特异性识别;SDS-PAGE电泳结果显示在大约120 k Da左右可观察到特异性条带;Western blot结果证实该蛋白可以被抗S1蛋白的特异性单抗识别。综上研究结果,证明利用杆状病毒表达系统在Sf9细胞中成功表达了PEDV的S1蛋白,为进一步研究PEDV S蛋白的抗原性奠定了基础。; 杨德强李慧春陈鹏飞王康李先斌张文超虞凌雪姜一峰高飞黄勤峰于海童光志周艳君; 关键词：猪流行性腹泻病毒 S1蛋白杆状病毒 SF9细胞

猪δ-冠状病毒N蛋白单克隆抗体的制备及抗原表位鉴定: 引言猪δ-冠状病毒(Porcine Delta Coronavirus,PDCoV)是能够引起哺乳仔猪的腹泻、呕吐等临床表现的主要病原之一。PDCoV的核衣壳蛋白N蛋白是相对保守且免疫原性较好的蛋白,在PDCoV的诊断上...; 李慧春张文超陈鹏飞谭祥梅赵雄伟李先斌虞凌雪姜一峰高飞童光志周艳君

猪Delta冠状病毒N蛋白的表达及单克隆抗体的制备: 猪Delta冠状病毒(Porcine Delta Coronavirus,PDCoV)是一种能够引起仔猪腹泻的新型冠状病毒,2014年该病毒在美国的猪群中爆发并造成普遍流行,给健康养猪带来了严重的威胁.由于PDCoV是近...; 张文超虞凌雪李慧春陈鹏飞杨德强李先斌刘欢姜一峰杨莘高飞黄勤峰童光志周艳君; 关键词：N蛋白单克隆抗体

猪流行性腹泻病毒S蛋白在杆状病毒中的表达与鉴定: <正>猪流行性腹泻是一种由猪流行性腹泻病毒(Porcineepidemic diarrhea virus,PEDV)引起的新生仔猪严重腹泻的高度接触性传染病,近年来我国新流行的PEDV毒株对新生仔猪的发病率和死亡率均较高...; 杨德强虞凌雪李慧春陈鹏飞李先斌张文超姜一峰杨莘高飞黄勤峰于海童光志周艳君; 关键词：猪流行性腹泻病毒 S蛋白杆状病毒蛋白表达; 文献传递

猪Delta冠状病毒N蛋白的表达及单克隆抗体的制备: 猪Delta冠状病毒(Porcine Delta Coronavirus,PDCoV)是一种能够引起仔猪腹泻的新型冠状病毒,2014年该病毒在美国的猪群中爆发并造成普遍流行,给健康养猪带来了严重的威胁。由于PDCoV是近...; 张文超虞凌雪李慧春陈鹏飞杨德强李先斌刘欢姜一峰杨莘高飞黄勤峰童光志周艳君; 关键词：N蛋白单克隆抗体

猪Delta冠状病毒N蛋白单克隆抗体及其抗原表位和应用: 本发明公开了一种由保藏号为CCTCC NO：C2017257的杂交瘤细胞株分泌的猪Delta冠状病毒N蛋白单克隆抗体。本发明还公开了包含该单克隆抗体的检测猪Delta冠状病毒的试剂盒。本发明还公开了猪Delta冠状病毒N...; 童光志周艳君李慧春张文超陈鹏飞李先斌虞凌雪姜一峰高飞李丽薇; 文献传递

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李先斌