陈倩倩
- 作品数：1 被引量：5H指数：1
- 供职机构：南方医科大学检验与生物技术学院抗体工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 羊口疮病毒蛋白ORFV035的表达、纯化和多克隆抗体的制备被引量：5
- 2017年
- 克隆表达羊口疮病毒蛋白ORFV035,并制备其多克隆抗体,为后续对病毒复制、装配、形态发生和成熟过程的研究奠定基础。PCR扩增羊口疮病毒ORFV035基因,将其与质粒pET-30a(+)经Bam HⅠ和HindⅢ双酶切后连接,构建重组质粒pET30a-035。重组质粒经双酶切和测序鉴定,转化感受态大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定蛋白表达情况。表达产物进行超声破碎和Ni柱纯化,纯化后目的蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体并对其进行鉴定。成功构建了重组质粒pET30a-035,在大肠杆菌BL21中以包涵体形式高效表达。包涵体洗涤、溶解后进行Ni柱纯化,得到纯度较高的ORFV035-his融合蛋白。以纯化蛋白免疫小鼠获得多克隆抗体。Western blot检测显示该多抗可以识别天然ORFV035蛋白。成功诱导表达、纯化ORFV035蛋白并制备ORFV035多克隆抗体。
- 陈慧芹王小平罗树红王丽洁陈倩倩郝文波
- 关键词：羊口疮病毒纯化多克隆抗体
