文扬
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 供职机构：上海交通大学医学院附属第九人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 衣霉素诱导牙髓细胞内质网应激模型的建立被引量：2
- 2018年
- 目的:用衣霉素诱导人牙髓细胞(dental pulp cells,DPCs),构建人DPCs内质网应激模型,为进一步探讨内质网应激介导人DPCs相关疾病的分子机制提供实验基础。方法:改良组织块法体外培养人DPCs;MTT法检测不同浓度衣霉素对人DPCs活性的影响;PCR检测人DPCs内质网应激关键分子的表达。采用SPSS17.0软件包对数据进行统计学分析。结果:随着衣霉素浓度的增加,人DPCs存活率逐渐下降。衣霉素诱导后,人DPCs内质网应激关键分子剪切x盒结合蛋白1(splicing x-box binding protein-1,s XBP1)、活化转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)、葡萄糖调节蛋白质78(glucose-regulated protein 78,GRP78)以及C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)m RNA表达水平升高。结论:衣霉素诱导人DPCs内质网应激发生,模型成功建立。
- 李莉芬文扬江龙朱亚琴
- 关键词：衣霉素牙髓细胞内质网应激
- PERK干扰慢病毒载体的构建及其在人牙髓细胞中的表达被引量：1
- 2017年
- 目的:构建人PERK基因的shRNA慢病毒载体,检测其对人牙髓细胞(dental pulp cells,DPCs)PERK基因表达的抑制作用。方法:针对人PERK基因的cDNA序列,设计并合成针对人PERK基因的shRNA表达序列,将其连接到载体hU6-MCS-CMV-EGFP中。测序正确后,将构建的目的载体和包装质粒共转染293T细胞,72 h后收获并浓缩得到重组慢病毒颗粒。筛选最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI),将病毒感染人牙髓细胞,通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)技术检测PERK基因mRNA和蛋白的表达水平,验证干扰效果。采用SPSS24.0软件包对数据进行统计学分析。结果:成功构建LV-PERK-RNAi慢病毒载体,病毒滴度为3×10~8 TU/mL,最适MOI=30;RT-PCR和Western印迹法检测显示,与空白对照组相比,PERK基因的mRNA和蛋白质表达水平显著下降,在mRNA水平的表达抑制率约为63%。结论:成功构建PERK干扰慢病毒表达载体,为后续的研究创造了条件。
- 文扬朱亚琴
- 关键词：PERKRNAI慢病毒载体
- 内质网应激在牙周膜细胞成骨分化中的表达被引量：1
- 2017年
- 目的 :观察人牙周膜细胞(periodontal ligament cells,PDLCs)成骨分化过程中内质网应激水平的变化及其影响,以便更好地了解PDLCs成骨分化的机制。方法:原代培养人PDLCs,并体外诱导成骨,通过碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和茜素红染色鉴定其成骨特性;PCR和Western印迹检测体外成骨诱导时PDLCs内质网应激关键分子的表达。采用SPSS17.0软件包对数据进行统计学分析。结果:体外诱导成骨培养的PDLCs ALP染色及茜素红染色增强,矿盐沉积增加。同时,体外成骨诱导的PDLCs内质网应激关键分子剪切x盒结合蛋白1(splicing x-box binding protein-1,s XBP1)、活化转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)、葡萄糖调节蛋白质78(glucoseregulated protein 78,GRP78)m RNA表达水平升高。Western印迹检测显示,成骨诱导的PDLCs内质网应激关键分子磷酸化蛋白激酶样内质网激酶(phosphorylated the RNA-activated protein kinase-like ER-resident kinase,p-PERK)、磷酸化真核起始因子2α(phosphorylated eukaryotic initiation factor-2α,p-e IF2α)表达增加。结论:牙周膜细胞成骨分化时内质网应激水平明显升高。
- 李莉芬文扬江龙朱亚琴
- 关键词：牙周膜细胞成骨分化内质网应激
