高宏
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生电气工程更多>>
- 汉滩病毒糖蛋白与人溶酶体相关膜蛋白重组真核表达载体的构建表达鉴定及作为基因疫苗的免疫安全性评价
- 2017年
- 目的:利用p VAX1真核表达载体构建汉滩病毒糖蛋白Gn及Gc与人溶酶体相关膜蛋白LAMP分子的重组真核表达载体,鉴定其在人真核细胞系He La中的表达.大量抽提去内毒素质粒,皮下注射Balb/c小鼠后初步对目标载体作为基因疫苗进行安全性评价.方法:利用PCR的方法分别以汉滩病毒编码糖蛋白M片段的c DNA为模板,扩增目的基因Gn和Gc,构建重组真核表达载体p VAX-Gn、p VAX-LAMP/Gn、p VAX-Gc和p VAX-LAMP/Gc,并进行酶切鉴定和Sanger测序.同时构建带有EGFP标签的四种重组质粒,LipofectamineTM2000脂质体将重组质粒瞬时转染He La细胞,通过荧光显微镜观察结合免疫荧光检测目的蛋白的表达.抽提高纯度去内毒素的重组质粒,采用皮下注射免疫小鼠,并取重要脏器进行组织学分析.结果:双酶切鉴定和测序结果证实目的基因Gn、LAMP/Gn、Gc和LAMP/Gc成功克隆入真核载体p VAX 1,基因与原序列一致.荧光显微镜观察连有EGFP的表达载体转染的He La细胞,可见明显的绿色荧光,瞬时转染后特异性抗体免疫荧光检测到目的蛋白的表达.安全性评价结果显示Balb/c小鼠耐受性良好,多次注射后无明显组织形态学改变.结论:成功构建了重组嵌合载体p VAX-Gn、p VAX-LAMP/Gn、p VAX-Gc和p VAX-LAMP/Gc,并在真核细胞系中表达出目的蛋白,免疫小鼠显示了良好的安全性,为后期对汉滩病毒的靶向基因疫苗的研究奠定了基础.
- 张锦鹏张冠文宣国云孟强谢文宇高宏姜东伯杨琨
- 关键词：安全性评价
- 伽玛刀同步配合适形放疗80例Ⅱb~ⅢA期宫颈鳞癌的疗效
- 目的：回顾性分析伽玛刀同步配合适形放射治疗的80例Ⅱb～Ⅲa期宫颈鳞癌的放疗疗效及放疗副反应。方法：2009年1月～2009年12月本单位收治80例Ⅱb～Ⅲa期宫颈鳞癌患者，年龄24-75岁，中位年龄49岁。
- 周洁晶邵秋菊齐宇红高宏
- 关键词：宫颈癌伽玛刀
