杨浩
- 作品数：7 被引量：18H指数：2
- 供职机构：上海交通大学微纳米科学技术研究院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划上海市科学技术委员会资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 新基因NBEAL1的克隆、表达、纯化及其与胶质瘤病理分级的相关性
- 2010年
- 目的:构建新基因neurobeachin like1(NBEAL1)的表达载体,研究NBEAL1的表达与胶质瘤病理分级的相关性。方法:提取人脑胶质瘤细胞U251的总RNA,构建pGEX-KG/NBEAL1表达载体,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导NBEAL1重组蛋白的表达,GST亲和纯化,Western blotting鉴定重组蛋白的纯度;以免疫组化法用纯化蛋白制备的单克隆抗体分析NBEAL1表达与胶质瘤病理分级的相关性。结果:NBEAL1基因片段被成功地克隆入pGEX-KG表达载体,测序证实克隆片段序列正确。NBEAL1融合蛋白在大肠杆菌BL21包涵体中表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上,纯化的重组蛋白纯度95%以上。Western blotting证明所纯化的蛋白含有GST标签与NBEAL1肽段。免疫组化法检测显示NBEAL1蛋白的表达在正常脑组织中较低,而在低级别的脑胶质瘤组织中表达明显上调,但随着恶性程度增加NBEAL1的表达程度降低,两者呈负相关。结论:成功地克隆、表达及纯化NBEAL1蛋白,NBEAL1蛋白在人脑胶质瘤组织中的表达与其恶性程度呈负相关。
- 鲍晨晨杨浩李娜刘彬宋华盛平胡国汉崔大祥
- 关键词：基因克隆脑胶质瘤
- 巨磁阻效应的微流控传感器在肿瘤诊断中的应用研究
- 这里我们报道我们课题组近3 年来，在磁性纳米团簇的制备、巨磁阻效应传感器的研制以及结合PCR 技术与微流控芯片技术，成功地研制出巨磁阻效应的微流控传感器件，并进行了传感器件在捕获血液样本中癌细胞、肿瘤相关病毒的基因分型检...
- 崔大祥郅晓杨浩张昕张雪青王侃
- 关键词：GMRBIOSENSORVIRUSGENOTYPE
- 沉默BRCAA1基因对胃癌MGC-803细胞的抑制作用及其可能的机制
- 2008年
- 目的:研究沉默乳腺癌相关抗原1(breast cancer-associated antigen 1,BRCAA1)基因对胃癌细胞株MGC-803的抑制作用及其可能的机制。方法:构建BRCAA1基因shRNA载体,将构建的shRNA-BRCAA1质粒与阴性对照质粒shRNA-N转染胃癌MGC-803细胞,24 h后用荧光显微镜观察转染效率,实时定量PCR检测BRCAA1和GAPDH基因mRNA表达水平MTT法检测转染后24、48与72 h的细胞增殖水平,Annxin-V PE/7AAD检测转染24 h后的细胞凋亡水平,Western blotting检测转染48 h后细胞的凋亡相关蛋白表达水平。结果:BRCAA1 siRNA表达质粒转染MGC-803细胞24 h的转染效率为(81.2±2.6)%。转染后48 h MGC-803细胞的BRCAA1 mRNA水平下降了61.4%,MGC-803细胞增殖的抑制率达45.0%,转染siRNA细胞的凋亡率明显高于未转染细胞和对照质粒转染细胞[(14.4±1.6)%vs(5.4±2.0)%,(4.4±2.5)5,P<0.05]。转染siRNA细胞的凋亡相关蛋白Rb与Bax的表达量显著增加(P<0.05),Bcl-2的表达量显著减少(P<0.05)。结论: BRCAA1基因的沉默可有效抑制人胃癌MGC-803细胞的增殖和诱导细胞凋亡,其机制与其促进Rb和Bax蛋白表达、抑制Bcl- 2蛋白表达有关。
- 刘彬崔大祥杜彤李智铭宋华杨浩鲍晨晨甘慧
- 关键词：SHRNA胃癌细胞增殖
- HIV-1 env蛋白的制备活性鉴定与快速检测方法的建立
- 2009年
- 目的制备具有生物活性的HIV-1 env蛋白,利用量子点的特殊光学性能结合免疫分析技术,建立快速、简便的免疫凝集分析检测HIV-1gp41抗体方法。方法以HIV-1 env基因质粒为模板,采用体外快速翻译系统(RTS)线性模板试剂盒制备线性模板,用RTS100试剂盒合成env蛋白,用磁珠法纯化蛋白,用Western Blot方法鉴定蛋白活性。纯化后的HIV-1 env蛋白采用量子点标记,与样品液中的抗HIV-1gp41抗体进行免疫反应,根据量子点的荧光信号的变化,定量检测样品液中抗gp41抗体的浓度。结果体外快速翻译系统表达出相对分子量约为97KD的env蛋白;Western blotting证实纯化后的蛋白具有生物活性,量子点标记的env蛋白与山羊抗HIV-1gp41抗体发生了免疫凝集反应,使量子点发生荧光淬灭,荧光信号强度与抗体浓度呈负相关。结论HIV-1 env蛋白可采用RTS系统进行大量表达,分离纯化后的env蛋白具有生物学活性,建立的量子点标记的免疫凝集反应方法检测HIV gp41结果准确,方法简便。
- 杜彤崔大祥刘彬杨浩鲍晨晨高峰
- 关键词：HIV-1ENV基因抗HIV-1艾滋病毒BLOT分析
- 碳纳米管-树形分子载体递送Survivin反义寡核苷酸对肝癌细胞增殖的作用被引量：11
- 2006年
- 目的:探讨碳纳米管(CNT)-树形分子递送Survivin反义寡核苷酸(ASOND)进入肝癌细胞HepG2的效率及其对肝癌细胞增殖的影响。方法:制备碳纳米管与PAMAM树形分子复合物,与Survivin反义寡核苷酸组装后,用原子力显微镜(AFM)与凝胶电泳观察碳纳米管-树形分子-反义核苷酸复合物的形态结构;然后将复合物与人肝癌HepG2细胞共培养,同时设立对照,采用透射电镜观察碳纳米管-树形分子-反义核苷酸复合物在细胞中的定位,采用MTT法检测复合物对癌细胞生长的抑制作用。结果:AFM与凝胶电泳分析证实碳纳米管-树形分子-反义核苷酸复合物被成功制备。透射电镜观察证实碳纳米管-树形分子-反义核苷酸复合物位于细胞质。MTT法检测表明,CNT-PAMAM-ASODN浓度为1.0μmol/L时,即可抑制(45.97±4.28)%的HepG2细胞增殖,而ASODN组和CNT-PAMAM组在此浓度条件下对HepG2细胞的抑制率则分别为(9.33±0.85)%和(6.37±0.69)%;当CNT-PAMAM-ASODN达到1.50μmol/L时,细胞抑制率为(70.22±7.25)%,而且抑制作用随培养时间的延长与浓度的增加而增强,实验组与对照组之间细胞抑制率存在显著性差异(P<0.01)。结论:碳纳米管-树形分子复合物是一种高效的基因递送载体,能够携带Survivin反义寡核苷酸进入肝癌细胞,并高效抑制HepG2细胞的增殖,显著增强反义寡核苷酸的作用效果。
- 潘碧峰崔大祥徐萍高峰贺蓉尤晓刚邵君杨浩
- 关键词：碳纳米管树形分子SURVIVIN基因反义寡核苷酸肝癌
- siRNA封闭BRCAA1基因对乳腺癌细胞MCF-7增殖和Rb基因表达的影响被引量：8
- 2006年
- 目的:研究siRNA封闭乳腺癌抗原相关基因1(BRCAA1)对乳腺癌细胞MCF-7增殖和Rb基因表达的影响。方法:采用RNAi技术对乳腺癌细胞MCF-7细胞BRCAA1基因进行特异性抑制,用阳离子脂质体与化学合成的Pre-designedan-ti-BRCAA1 siRNA构建转染复合体,反转染MCF-7细胞株48h后提取总RNA,分为未处理(NT)组、阴性对照组、阳性对照组和BRCAA1组,经反转录荧光实时PCR检测BRCAA1和Rb基因mRNA表达情况;检测细胞增殖抑制率。结果:与阴性对照组相比,siRNA转染MCF-7细胞后实验组BRCAA1基因mRNA水平降低了42.3%;Rb基因表达较之阴性对照组上升了11.1%;实验组MCF-7细胞增殖抑制率为(81.9±6.1)%,抑制作用明显强于对照组(P<0.05)。结论:BRCAA1基因的封闭明显抑制了MCF-7细胞的增殖,BRCAA1基因与Rb基因可能存在有某种相互拮抗的作用。
- 杨浩崔大祥李清黄拓高峰贺蓉潘碧峰邵君尤晓钢刘风涛
- 关键词：SIRNA乳腺癌RB基因
- 树形分子修饰的碳纳米管颗粒转染胰腺癌细胞BxPC3安全性的研究
- 2011年
- 目的观察单壁碳纳米管一聚酰胺树形分子复合物（CNT—PAMAM—D）进人胰腺癌细胞的过程，评价其作为载体的安全性。方法通过超声、搅拌及洗涤等方法制备CNT—PAMAM—D，用原子力显微镜和透射电镜观察其形态。将CNT-PAMAM—D与人胰腺癌细胞BxPC3共同培养12、48、72h，收集细胞，在透射电镜下观察细胞内CNT—PAMAM-D的分布及细胞超微结构的改变。结果PAMAM—D与CNT结合之后，树形分子包裹在CNT的表面，形成了20nm左右大小的纳米复合物颗粒。CNT—PAMAM—D通过细胞吞饮方式被吞入BxPC3细胞，12h后即大量进人细胞质内，随着时间延长，CNT—PAMAM—D还可进入溶酶体及细胞核中，但胰腺癌细胞的形态及超微结构无显著变化。结论CNT-PAMAM—D是一种高效、安全的纳米载体。
- 程东峰吴旭波王加祥韩宝三张雪清杨浩袁恒光朱萍彭承宏
- 关键词：碳纳米管树形分子
