李灵毅
- 作品数：2 被引量：8H指数：2
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- MiR-194对恶性黑色素瘤细胞增殖和凋亡的影响及机制被引量：5
- 2017年
- 目的研究mi R-194对人恶性黑色素瘤细胞的增殖和凋亡的影响及机制。方法应用实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)分别检测mi R-194在原代正常人皮肤黑色素细胞系PIG1和5种恶性黑色素瘤细胞系(A375、SK-MEL-1、SK-MEL-2、SK-MEL-5及SK-MEL-28)中的相对表达量。利用Lipofectamine TM 2000分别将A375细胞系转染mi R-194 mimics和阴性对照质粒,从而将A375细胞系分为mi R-194模拟物组和阴性对照组;应用MTT法和流式细胞术分别测定mi R-194模拟物组和阴性对照组细胞的增殖能力及凋亡率,蛋白印迹(Western blot)分别检测mi R-194模拟物组和阴性对照组的细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、裂解型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved Caspase-3)蛋白表达情况。结果 mi R-194在5种黑色素瘤细胞系A375、SKMEL-1、SK-MEL-2、SK-MEL-5及SK-MEL-28中的表达水平低于正常人皮肤黑色素细胞系PIG1,依次分别是正常细胞系的(0.18±0.03)、(0.25±0.05)、(0.37±0.03)、(0.39±0.04)及(0.45±0.03)倍(均P<0.05)。转染后第0、1、2、3、4及5天,mi R-194模拟物组vs阴性对照组的O D值分别为:(0.18±0.02)vs(0.19±0.03)(P>0.05)、(0.29±0.02)vs(0.27±0.03)(P>0.05)、(0.42±0.08)vs(0.45±0.07)(P>0.05)、(0.63±0.09)vs(1.17±0.12)(P<0.05)、(1.05±0.15)vs(2.15±0.21)(P<0.05)及(1.87±0.23)vs(3.18±0.27)(P<0.05)。mi R-194模拟物组和阴性对照组的细胞凋亡率分别为24.2%和9.3%(P<0.05)。Cyclin D1和Cleaved Caspase-3蛋白在mi R-194模拟物组中的表达量分别是阴性对照组的(0.36±0.04)和(3.2±0.28)倍(均P<0.05)。结论 mi R-194在黑色素瘤细胞中低表达,mi R-194表达上调可促进黑色素瘤细胞凋亡并抑制黑色素瘤细胞的增殖,其机制可能为下调Cyclin D1蛋白及上调Cleaved Caspase-3蛋白表达。
- 李灵毅骆曼
- 关键词：MIC黑色素瘤增殖凋亡
- Fascin-1对恶性黑色素瘤细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制被引量：3
- 2017年
- 目的探讨Fascin-1对恶性黑色素瘤细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法体外培养人恶性黑色素瘤细胞A375和人皮肤成纤维细胞CCC-HSF-1。将A375细胞随机分为CON组和Fascin-1-shRNA组,分别按照10 MOI的感染复数加入CON和Fascin-1-shRNA病毒,培养48 h。采用qRT-PCR法及Western blotting法检测常规培养的CCC-HSF-1、A375细胞以及CON组、Fascin-1-shRNA组Fascin-1 mRNA和蛋白表达。分别采用Dye67染色法、Annexin V/PI染色法检测CON组、Fascin-1-shRNA组细胞增殖指数及凋亡率,采用Western blotting法检测Bcl-2、Bax、Bad蛋白表达。结果常规培养的CCC-HSF-1、A375细胞中Fascin-1 mRNA相对表达量分别为0.21±0.015、1.00±0.01,Fascin-1蛋白相对表达量分别为0.12±0.04、0.75±0.11,二者比较P均<0.01。CON组、Fascin-1-shRNA组Fascin-1 mRNA相对表达量分别为1.00±0.01、0.19±0.04,Fascin-1蛋白相对表达量分别为1.28±0.17、0.24±0.10,两组比较P均<0.01。Fascin-1-shRNA组培养3、4天时细胞增殖指数均低于CON组同期(P均<0.05)。Fascin-1-shRNA组细胞凋亡率高于CON组(P<0.01)。Fascin-1-shRNA组Bcl-2蛋白相对表达量低于CON组,Bax、Bad蛋白相对表达量高于CON组(P均<0.01)。结论 Fascin-1表达下调可抑制恶性黑色素瘤细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与下调细胞中Bcl-2表达及上调Bax、Bad表达有关。
- 骆曼李灵毅
- 关键词：恶性黑色素瘤FASCIN-1细胞增殖细胞凋亡BCL-2家族
