唐泽民
- 作品数：3 被引量：0H指数：0
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- 慢病毒介导沉默PD-L1基因在乳腺癌细胞中的表达
- 2017年
- 构建含细胞程序性死亡因子配体1(PD-L1)基因的慢病毒载体三质粒体系,并检测其在乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达情况。p MAGic 7.1慢病毒表达载体与质粒△8.91和p VSVG用聚乙烯亚胺(PEI)共转293T包装病毒,感染并筛选获得MDA-MB-231稳转细胞系,检测PD-L1表达情况。(1)MDA-MB-231在3种乳腺癌细胞中PD-L1表达量最高;(2)三质粒转染293T细胞48 h后荧光强度增强,达到90%以上;用病毒感染MDA-MB-231细胞,48 h获得20%左右荧光强度;(3)经筛选的MDA-MB-231稳转细胞系在m RNA水平和蛋白水平低表达PD-L1,其中由p MAGic-sh1包装的病毒干扰能力最强;(4)分别加入病毒后,干扰组细胞增殖能力下降,p MAGic-sh1干扰组细胞在加入病毒7 d后生长速度约为阴性对照的64.77%;(5)混合淋巴实验显示,sh-1干扰组的肿瘤抑制率为35.8%,是正常组的3.06倍,且干扰组的T淋巴细胞活性显著增强。成功通过PEI转染试剂建立了三质粒慢病毒包装体系,该体系获得的慢病毒可有效干扰乳腺癌MDA-MB-231细胞中PD-L1的表达量,所得的干扰细胞株细胞增殖能力下降,可增强T细胞增殖活性及肿瘤细胞杀伤活性。
- 欧阳婧孙园园唐泽民唐政山李放军杨寅柯
- 关键词：乳腺癌慢病毒载体聚乙烯亚胺共转染
- 长非编码RNA基因Z38对人乳腺癌细胞BT549生物学特性的影响
- 2017年
- 为探讨稳定干扰长非编码RNA基因Z38对乳腺癌细胞BT549的影响,向BT549细胞转染干扰Z38表达的慢病毒,经嘌呤霉素筛选获得稳定干扰的细胞,采用RT-PCR检测Z38的表达水平、MTT法检测细胞增殖及耐药性、克隆法检测细胞集落形成能力、碘化丙啶染色方法分析细胞周期、流式细胞术分析肿瘤干细胞标志物CD44和CD24的表达.结果表明,特异性的慢病毒能显著降低Z38表达水平,使细胞增殖能力、抗化疗药物能力及细胞集落形成能力显著降低,导致G_2/M期细胞数目显著减少,细胞周期受阻,并且显著降低了CD44^+/CD24^-细胞群百分比而导致细胞的肿瘤干细胞特性降低.
- 胡诗帆邓日林唐泽民欧阳婧孙园园莫林波张健杨寅柯
- 关键词：人乳腺癌
- 干扰长链非编码RNA Z38表达对鼻咽癌细胞增殖的影响
- 2017年
- 新型的长链非编码RNA Z38已证实高表达于肿瘤组织,低表达于癌旁组织,属于癌基因,但其功能和作用机制尚需深入分析。研究目的在于探讨稳定干扰长非编码RNA Z38对鼻咽癌细胞HNE1、5-8F功能和机制的影响。采用慢病毒包埋Z38-shRNA转染进人鼻咽癌细胞HNE1与5-8F,用嘌呤霉素筛选出稳定的干扰细胞系,利用相对实时荧光定量的方法检测干扰效率;使用MTT、和平板克隆集落形成实验验证其对HNE1、5-8F细胞增殖的抑制作用;Transwell检测细胞迁移的能力;采用Western Blot检测干扰Z38表达对抑癌因子P^(53)、P^(21)表达水平的影响。结果表明,慢病毒干扰鼻咽癌细胞显著降低了Z38基因表达水平,并且干扰Z38基因表达后使细胞增殖能力、细胞集落形成能力降低,穿过Transwell小室的细胞数降低,抑癌因子P^(53)、P^(21)表达量上调。由此推测,Z38基因可能为鼻咽癌细胞的癌基因之一。
- 唐泽民孙园园欧阳靖莫林波杨寅柯
- 关键词：RNAI人鼻咽癌
