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3-硝基-5-(6-溴己酰胺)苯甲酸的合成及其作为头孢菌素酰化酶产生菌筛选指示剂的研究被引量：3: 1999年; 为筛选头孢菌素Ｃ酰化酶产生菌，由环己酮和３－硝基－５－乙酰胺基苯甲酸出发，合成了一种新的生色物质３－硝基－５－（６－溴己酰胺）苯甲酸（３－Ｎｉｔｒｏ－５－（６－ｂｒｏｍｏｈｅｘａｎｏｙｌａｍｉｎｏ）ｂｅｎｚｏｉｃａｃｉｄ，ＮＢＨＡＢ）。通过红外光谱法、核磁共振法、质谱法鉴定了其结构。ＧＬ－７ＡＣＡ酰化酶和青霉素Ｇ酰化酶（ｐｅｎｉｃｉｌｉｎＧＡｃｙｌａｓｅ，ＰＧＡ）及其产生菌对该化合物的作用表明，该物质能够检测头孢菌素酰化酶活力，用来筛选头孢菌素Ｃ酰化酶产生菌，其灵敏性有待进一步提高。; 朱颂成温业淳温业淳金志坤赵国屏; 关键词：头孢菌素C

大肠杆菌膦酸酯代谢途径中phnF基因的研究: 1998年; 大肠杆菌的ｐｈｎ操纵子与膦酸酯（Ｐｎ）的利用密切相关。实验利用ＰＣＲ扩增、ＴＡ克隆等方法，获得了大肠杆菌ｐｈｎ操纵子中ｐｈｎＥ、ｐｈｎＦ和ｐｈｎＧ基因的亚克隆，并进行了序列测定。通过Ｐ１噬菌体转导，构建了ｐｈｎＦ的ＴｎｐｈｏＡ’９转座子插入突变体ＪＷ１９，该突变仅对大肠杆菌的ＡＥＰｎ同化有微弱的影响，而利用ｐｈｎＥ和ｐｈｎＧ序列与染色体重组构建的ｐｈｎＦ全缺失突变株ＪＷ６７，则几乎不能在ＡＥＰｎ培养基上生长。通过ｐｈｎＦ基因的诱导高表达，用亲和柱层析分离纯化了ＰｈｎＦ蛋白，达到电泳纯。并且用凝胶延滞的方法观察到，ＰｈｎＦ蛋白与ｐｈｎ操纵子ＤＮＡ片段相互作用后，可使凝胶图谱类型发生改变。; 夏琪姜卫红刘扬赵国屏; 关键词：大肠杆菌

三角酵母D-氨基酸氧化酶基因的克隆、测序及表达被引量：3: 1999年; 利用跨越内含子的ＰＣＲ技术，从三角酵母（Ｔｒｉｇｏｎｏｐｓｉｓｖａｒｉａｂｉｌｉｓ）变种ＦＡ１１０中扩增得到Ｄ氨基酸氧化酶基因（ｄａａｏ），并通过ＴＡ克隆的方法将其克隆至ｐＧＥＭＴ载体。序列测定结果表明，所得ｄａａｏ基因的５′端内含子已被删除，基因总长度为１０７１ｂｐ，它与Ｔｒｉｇｏｎｏｐｓｉｓｖａｒｉａｂｉｌｉｓ的Ｄ氨基酸氧化酶同源性达９８３％，与Ｆｕｓａｒｉｕｍｓｏｌａｎｉ和Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａｇｒａｃｉｌｉｓ的同源性分别是３８９％和３０８％。为提高表达水平，又将此基因转移至高表达载体ｐＥＴ２８ｂ上，在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中进行诱导表达。经ＩＰＴＧ诱导，目的蛋白的产生量可占菌体总蛋白量的４６％，分子量约为３８ｋＤ。Ｄ氨基酸氧化酶的活力可达８０２ｕ／Ｌ。; 刘洪波姜卫红杨蕴刘赵国屏焦瑞身; 关键词：三角酵母 PCR 基因克隆

地中海拟无枝菌酸菌U-32的3-氨基5-羟基苯甲酸合成酶(AHBAS)基因的克隆与序列分析被引量：2: 1999年; 地中海拟无枝菌酸菌（Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓｍｅｄｉｔｅｒｒａｎｅｉ）Ｕ３２是一种临床上重要的抗生素———力复霉素ＳＶ的产生菌。研究表明，在地中海拟无枝菌酸菌的力复霉素生物合成过程中，３氨基５羟基苯甲酸合成酶（ＡＨＢＡＳ）是合成中间体Ｃ７Ｎ母核（又称ＡＨＢＡ）的关键酶。通过筛选以广宿主粘粒（Ｃｏｓｍｉｄ）ｐＬＡＦＲ３为载体构建的地中海拟无枝菌酸菌Ｕ３２的基因文库，获得６个阳性克隆子。将含有ＡＨＢＡＳ基因的约２５ｋｂ的片段克隆到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＳＫ和ＫＳ上，进行酶谱分析得到其在染色体上的初步定位。序列测定表明地中海拟无枝菌酸菌Ｕ３２中的ＡＨＢＡ合成酶基因，由１１６７ｂｐ组成，起始密码子为ＡＴＧ，终止密码子为ＴＧＡ，共编码３８８个氨基酸，所克隆到的ＡＨＢＡ合成酶基因在大肠杆菌的启动子控制下获得诱导表达，蛋白分子量约为４３ｋＤ。; 黄健强姜卫红赵国屏杨蕴刘焦瑞身; 关键词：羟基苯甲酸合成酶基因克隆

地中海拟无枝菌酸菌专一的噬菌体φMMR1的研究被引量：6: 1999年; 从生产力复霉素ＳＶ的地中海拟无枝菌酸菌（Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓｍｅｄｉｔｅｒｒａｎｅｉ）Ｕ１１９的工业发酵罐裂解液中，分离到一株新的噬菌体φＭＭＲ。该噬菌体经多次单斑分离、纯化，得到的噬斑多数为清亮的（约占９０％），其它噬斑为浑浊斑，但未能从中分离到溶源菌。在被测试的可能的宿主菌中，φＭＭＲ１不能感染除地中海拟无枝菌酸菌以外的菌株，说明寄主范围很窄。对φＭＭＲ１的增殖和储存条件，诸如ｐＨ值、温度、二价金属离子、有机溶剂等对φＭＭＲ１的影响进行了较详细的研究。电子显微镜观察揭示，φＭＭＲ１为长尾无收缩尾鞘，头为正多面体，属长尾噬菌体科Ｂ１亚群。制备了φＭＭＲ１的兔抗血清，并测定了φＭＭＲ１以地中海拟无枝菌酸菌Ｕ－３２为宿主菌的一步生长曲线。使用２４种限制性内切酶对φＭＭＲ１ＤＮＡ进行了单酶切分析。结果表明，φＭＭＲ１基因组ＤＮＡ为线状双链，未找到粘性末端，大小约为５９６ｋｂ。φＭＭＲ１ＤＮＡ的Ｇ＋Ｃ含量为６７％。利用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析了噬菌体的外壳蛋白多肽的组成。纯化的裸露噬菌体ＤＮＡ可利用电穿孔技术成功地转染地中海拟无枝菌酸菌Ｕ－３２。; 李维泉姚鹤鸣沈美娟沈美娟赵国屏金玫蕾; 关键词：放线菌噬菌体转染

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赵国屏

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