您的位置： 专家智库 > >

刘明珠

作品数：7 被引量：16H指数：2
供职机构：蚌埠医学院更多>>
发文基金：国家自然科学基金安徽省自然科学基金安徽省高校省级自然科学研究项目更多>>
相关领域：医药卫生生物学更多>>

合作作者

文献类型

  • 7篇中文期刊文章

领域

  • 6篇医药卫生
  • 1篇生物学

主题

  • 3篇蛋白
  • 3篇细胞
  • 2篇单链
  • 2篇单链抗体
  • 2篇荧光
  • 2篇荧光素
  • 2篇荧光素酶
  • 2篇肿瘤
  • 2篇裸鼠
  • 2篇抗体
  • 2篇活体
  • 2篇活体成像
  • 2篇成像
  • 1篇蛋白纯化
  • 1篇蛋白制备
  • 1篇调节激酶
  • 1篇心肌
  • 1篇心肌保护
  • 1篇心肌保护作用
  • 1篇心肌缺血

机构

  • 7篇蚌埠医学院
  • 4篇蚌埠医学院第...
  • 1篇蚌埠医学院第...

作者

  • 7篇刘明珠
  • 6篇李正红
  • 5篇李永海
  • 5篇李红俊
  • 2篇谈燚
  • 2篇秦中强
  • 1篇刘传苗
  • 1篇陈勇
  • 1篇高琴
  • 1篇杨小淮
  • 1篇张蔚屏
  • 1篇许文青
  • 1篇王娅

传媒

  • 2篇细胞与分子免...
  • 1篇中国免疫学杂...
  • 1篇中华肿瘤杂志
  • 1篇蚌埠医学院学...
  • 1篇南方医科大学...
  • 1篇基因组学与应...

年份

  • 2篇2019
  • 3篇2018
  • 2篇2017
共 7 条 记 录，以下是 1-7
全选 清除 导出
排序方式：
内吗啡肽-1后处理的心肌保护作用及其对Erk1/2信号通路的影响被引量：9
2017年
目的探讨在大鼠心肌缺血再灌注过程中,内吗啡肽-1后处理的心肌保护作用对细胞外信号调节激酶1/2(Erk1/2)信号转导通路的影响。方法构建在体大鼠心肌缺血再灌注模型,分假手术组、缺血再灌注组、内吗啡肽-1后处理组(EM50组)、PD98059后处理组(PD组)、内吗啡肽-1+PD98059后处理组(EM50+PD组)。实时记录各组大鼠血流动力学指标,采集复灌结束后大鼠血清,检测超氧化物歧化酶、丙二醛、白介素-6、肿瘤坏死因子-α乳酸脱氢酶、肌酸激酶、心肌肌钙蛋白等心肌酶学及生化指标,大鼠心肌组织HE病理染色,TTC双染色法测定心肌梗死面积,Western-blot检测各组心肌组织中P-Erk1/2及凋亡相关蛋白Cleaved caspase-3的变化。结果与假手术组比较,缺血再灌注组心率和血压降低(P<0.05);与缺血再灌注组比较,EM50组心率和血压有所增高(P<0.05),血浆中乳酸脱氢酶、肌酸激酶、心肌肌钙蛋白、丙二醛、白介素-6、肿瘤坏死因子-α活性或含量下降;超氧化物歧化酶活性增加(P<0.05);心肌梗死面积减少(P<0.05);P-Erk1/2表达增加(P<0.05);Cleaved Caspase-3表达降低(P<0.05)。与EM50组比较,EM50+PD组心率和血压降低(P<0.05),血浆中乳酸脱氢酶、肌酸激酶、心肌肌钙蛋白、丙二醛、白介素-6、肿瘤坏死因子-α活性或含量增加,超氧化物歧化酶活性降低(P<0.05);心肌梗死面积增加(P<0.05);P-Erk1/2表达降低(P<0.05);Cleaved Caspase-3表达增加。结论内吗啡肽-1后处理可能通过改善心功能、抑制炎症反应、抑制氧化应激发挥保护作用;内吗啡肽-1改善大鼠心肌缺血再灌注损伤的过程中,存在Erk1/2信号通路的激活。
王娅刘明珠李红俊张蔚屏高琴李正红
关键词：细胞外信号调节激酶1/2心肌缺血后处理心肌保护内吗啡肽
快速大容量尾静脉注射法建立肝细胞癌小鼠模型
2018年
目的:通过快速大容量尾静脉注射法建立肝细胞癌小鼠模型。方法:采用快速大容量尾静脉注射法,将插入NRAS基因的NRASV12转座子质粒、表达myr-Akt基因转座子质粒以及转座酶SB100的混合盐溶液通过小鼠尾静脉大容量(2 m L)、短时间(7 s)进行注射,作为观察组;同时设置对照组,同样方法注射等量0. 9%氯化钠注射液。注射3～4周后,处死观察组及对照组小鼠,通过病理学检查小鼠成瘤情况。结果:观察组小鼠成瘤率100%(24/24),经病理学检测为肝细胞癌;对照组小鼠无成瘤。结论:快速大容量尾静脉注射方法构建肝细胞癌小鼠模型方法简单,诱癌时间短,成功率高,重复性好。
秦中强周万飞李红俊刘明珠谈燚
关键词：肝细胞癌小鼠模型
修饰的pfu酶与T7ssb蛋白在聚合酶链式反应中的应用
2018年
表达、纯化pfu-sso7d及T7ssb蛋白,并优化PCR反应体系。分别将pfu、pfu-sso7d及T7ssb基因构建于p ET28载体上,转化至原核细胞中,诱导表达出pfu、pfu-sso7d及T7ssb蛋白,并通过His-Nickle亲和层析纯化柱纯化蛋白。从A549细胞中提取人的基因组DNA,以该基因组DNA为模板,利用pfu酶扩增c-met基因;同时从A549中提取总RNA,经过逆转录反应后,以逆转录产物c DNA为模板,分别利用pfu酶和pfu-sso7d酶扩增PD-L1基因,对比两种酶的DNA扩增效率;从MC38细胞中提取鼠的基因组DNA,以此基因组DNA为模板,分别用pfu-sso7d和pfu-sso7d联合T7ssb蛋白扩增Trp53基因,对比两种PCR反应体系的扩增效率。我们成功的将pfu、pfu-sso7d及T7ssb基因构建于p ET28载体上,并成功的诱导表达并纯化了这三种蛋白;用pfu酶成功的扩增出c-met基因;对比pfu酶,pfu-sso7d表现出较高的DNA扩增效率;在扩增Trp53基因的PCR反应体系中,同单独使用pfu-sso7d酶相比,pfu-sso7d联合T7ssb蛋白在PCR反应体系中可以提高PCR产物的量,约1.7倍。本次研究表明,利用纯化的pfu-sso7d蛋白和T7ssb蛋白,我们构建了优化的PCR反应体系。
刘明珠秦中强杨天华陈勇李永海李正红
关键词：PFUDNA聚合酶蛋白纯化
双荧光标记的肺癌皮下移植裸鼠模型的建立被引量：2
2019年
目的 建立荧光素酶(Luc)和近红外荧光蛋白(iRFP)双标记的肺癌皮下移植裸鼠模型.方法 采用Gateway法构建表达Luc和iRFP的慢病毒载体,经酶切测序验证后,制备慢病毒,感染肺癌A549细胞.嘌呤霉素筛选阳性A549细胞(即mA549细胞)并进行扩增,荧光显微镜下观察Luc和iRFP的表达,免疫荧光检测细胞表面c-Met蛋白的表达.将A549和mA549细胞分别接种至裸鼠皮下,每组6只,采用活体成像技术观察瘤体生长和荧光表达情况,HE染色和免疫组化染色评估成瘤状况.结果 成功构建了稳定表达Luc和iRFP的mA549细胞系.荧光显微镜下观察到mA549细胞中iRFP与Luc成功表达.免疫荧光检测显示,A549细胞和mA549细胞均可表达c-Met蛋白.mA549细胞接种裸鼠后,模型生长周期适中,成瘤率为100%;mA549细胞移植瘤的生长趋势与A549细胞移植瘤无明显差异(P>0.05).HE染色显示,mA549与A549细胞移植瘤的细胞形态和组织结构相同.免疫组化染色显示,A549和mA549细胞移植瘤均表达c-Met蛋白.结论 成功构建了稳定的、可实时监测的iRFP-Luc-A549肺癌细胞裸鼠模型.
樊红莲刘明珠闵静婷李红俊杨小淮李永海李正红
关键词：肺肿瘤荧光素酶活体成像
近红外荧光蛋白和荧光素酶双标记肝细胞癌移植裸鼠模型的建立被引量：1
2017年
目的建立一种基因稳定表达,可实时监测肿瘤生长的肝癌移植瘤裸鼠模型。方法构建带有荧光素酶(Luc)和近红外荧光蛋白(iRFP)和嘌呤霉素抗性基因的慢病毒,并感染HepG2肝癌细胞系,筛选得到稳定表达Luc和iRFP基因的细胞系;将细胞接种到裸鼠皮下,建立肝癌HepG2细胞移植瘤模型。利用小鼠活体成像系统检测肿瘤的生长情况,并通过HE染色及免疫组织化学染色评估肿瘤组织病理特征及成瘤能力。结果成功构建稳定表达iRFP和Luc的HepG2肝癌细胞系并建立移植瘤动物模型;模型生长周期适中,成瘤率较高;HE染色及免疫组织化学染色表现出典型的肿瘤组织病理特征。结论成功建立了稳定、可实时监测的HepG2-iRFP-Luc肝癌细胞裸鼠模型。
李红俊杨天华黄艳平刘明珠秦中强储菲李正红李永海
关键词：荧光活体成像
整合PD-L1单链抗体的融合蛋白制备及其抗肿瘤活性的验证被引量：1
2019年
目的:利用酵母表面递呈技术,分泌表达抗PD-L1单链抗体(sc Fv),纯化后得到能特异性结合PD-L1抗原的小分子抗体片段(sc Fv)。根据单链抗体基因序列,合成sc Fv抗体基因序列。选用sc Fv-mFc融合蛋白的方式,并采用p Fuse真核表达载体来表达此sc Fv-mFc融合蛋白,研究其对肺腺癌细胞(A549)的亲和力和体内外抑制作用。方法:采用基因工程的方法构建重组质粒p Fuse-scFv,通过真核转染至293F(人胚肾细胞),使用无血清Pro 293a-CDM培养72 h,收集培养液中分泌的融合蛋白,运用免疫组化检测sc Fv-mFc融合蛋白与肿瘤细胞的结合;流式细胞术分析融合蛋白和肿瘤细胞的亲和力; ADCC(抗体介导的细胞毒实验)测定融合蛋白对肿瘤细胞体外杀伤作用;利用接种肺腺癌细胞的荷瘤小鼠对融合蛋白的体内抗肿瘤效应进行研究。结果:通过重组质粒转染至293F细胞的方法,sc Fv-mFc融合蛋白被分泌到无血清的培养液中;免疫组化和流式结果显示,融合蛋白与表面高表达PD-L1蛋白的肿瘤细胞有较强的结合能力; ADCC实验结果示融合蛋白在体外对肿瘤细胞的杀伤作用;荷瘤小鼠实验结果示融合蛋白对肿瘤的生长起到抑制作用,在5 mg/kg的药物剂量下,荷瘤小鼠瘤体体积平均增长率从14. 90%降低至3. 72%,两独立样本t检验P<0. 05,差异具有统计学意义。结论:成功制备了含单链抗体的融合蛋白,其对A549细胞具有良好的结合能力,在体内外均对肿瘤细胞的增殖产生抑制作用,为研制靶向抗肿瘤药物提供实验室基础依据。
谈燚秦中强周万飞李红俊刘明珠许文青李正红李永海
关键词：重组质粒PD-L1单链抗体融合蛋白免疫抑制
靶向人c-Met蛋白单链抗体的制备及其对肺腺癌A549细胞的杀伤作用被引量：3
2018年
目的制备并纯化出靶向细胞间质上皮转化因子(c-Met)蛋白的人源单链抗体(scFv),鉴定其靶向c-Met蛋白的特性及其对肺腺癌细胞的作用。方法将scFv基因插入至p Fuse载体构建真核表达载体,表达融合鼠源Fc段的融合蛋白Met-scFv,经AKTA蛋白纯化系统纯化;将纯化的Met-scFv进行功能性检测:ELISA检测Met-scFv亲和力;流式细胞术和免疫荧光细胞化学染色检测Met-scFv识别并结合肺腺癌细胞的特性;CCK-8法检测Met-scFv对细胞增殖的影响;通过补体依赖的细胞毒性(CDC)、抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(ADCC),用乳酸脱氢酶(LDH)释放试剂盒检测Met-scFv对靶细胞A549细胞的毒性影响。结果 ELISA结果提示,Met-scFv与c-Met呈量效关系;流式细胞术和免疫荧光细胞化学染色实验结果提示,与对照组相比,Met-scFv组信号呈阳性,提示Met-scFv与A549细胞特异性结合;Met-scFv抑制A549细胞增殖并产生细胞毒性,且毒性大小与Met-scFv剂量呈正相关。结论制备出靶向c-Met蛋白的Met-scFv,并可在体外识别并介导杀伤A549细胞。
刘传苗刘明珠黄艳平储菲李永海李正红
全选 清除 导出
共1页<1>
聚类工具0