李欢
- 作品数：8 被引量：18H指数：3
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- 生长分化因子11对2型糖尿病小鼠胰岛β细胞保护作用的研究被引量：1
- 2017年
- 目的探讨生长分化因子11(GDF11)对T2DM小鼠胰岛β细胞的作用。方法选取C57BL/6J野生型小鼠,通过高脂饮食及STZ制备T2DM模型并随机均分为糖尿病rGDF11干预组(DM+rGDF11)和糖尿病对照组(DM),同时将普通饲料喂养的C57BL/6J小鼠随机分为正常rGDF11干预组(Con+rGDF11,n=10)和正常对照组(Con,n=10),观察GDF11对小鼠生理生化指标、胰岛β细胞功能及含量指标的影响。结果干预6周后,Con组与Con+rGDF11组各糖脂代谢指标比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与DM组比较,DM+rGDF11组FBG、HbA1c、胰升血糖素及血脂水平降低(P<0.05),且rGDF11干预后上调胰岛β细胞重要基因表达,促进胰岛素分泌,改善胰岛形态及β细胞含量(均P<0.05)。结论 GDF11可改善胰岛β细胞功能及维持β细胞含量,进而延缓糖尿病的发生发展。
- 李欢向光大梅稳张佳佳朱彪刘敏向林董靖
- 关键词：糖尿病胰岛Β细胞
- 生长分化因子11对高糖诱导MIN6细胞损伤的保护作用及机制研究被引量：2
- 2017年
- 目的 探讨生长分化因子11（GDF-11）对高糖诱导的小鼠胰岛素瘤细胞系MIN6细胞凋亡的影响及可能机制.方法 在体外不同葡萄糖浓度下培养MIN6细胞,分别加入重组GDF-11蛋白（rGDF-11）、转化生长因子β（TGF-β）受体Ⅰ抑制剂SB431542及磷脂酰肌醇？3？激酶（PI3K）抑制剂LY294002等干预因素.根据实验目的及干预因素不同将细胞随机分组为：正常对照组、正常对照组＋GDF-11组、高糖组、高糖＋GDF-11组、高糖＋GDF-11＋LY492002组、高糖＋GDF-11＋SB431542组.采用膜联蛋白V？异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染法检测细胞凋亡率,Western blotting法检测细胞内B淋巴细胞瘤2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、活性半胱天冬酶3（Cleaved-caspase3）等凋亡相关蛋白以及蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、叉头转录因子1（FoxO1）、磷酸化FoxO1（p-FoxO1）、核糖体S6蛋白激酶1（S6k1）、磷酸化S6k1（p-S6k1）水平.免疫荧光染色法检测MIN6细胞磷酸化Smad2（p-Smad2）、磷酸化Smad3（p-Smad3）表达水平.多组间比较选用单因素方差分析,组间多重比较用最小显著差异t检验.结果 高糖可明显降低Bcl-2/Bax比例,升高凋亡关键酶Cleaved-caspase3表达,细胞凋亡率增加（分别为0.39±0.03比3.82±0.26、0.83±0.04比0.17±0.02、26.1%±3.0%比7.9%±0.8%,t=23.12、-27.60、-10.11,均P〈0.01）.而重组GDF-11蛋白干预可上调Bcl-2/Bax比例,减少Cleaved-caspase3表达,抑制细胞凋亡（t=-44.110、19.530、6.535,P〈0.01）.SB431542或LY294002与MIN6细胞共培养后rGDF-11的抗凋亡作用均明显减弱（均P〈0.05）.高糖显著降低p-Smad2水平（荧光强度表示）,升高p-Smad3水平（t=4.830、5.760,均P〈0.01）.rGDF-11预处理可恢复细胞内p-Smad2水平,而SB431542明显抑制rGDF-11诱导的MIN6细胞p-Smad2蛋白表达的增加（t=5.55、3.04,均P〈0.05）.高糖可明显减少p-Akt、p-S6k1、p-FoxO1水平,而rGDF-11预处理后p-Akt、p-FoxO1水
- 李欢向光大梅稳张佳佳朱彪刘敏向林董靖
- 关键词：高糖MIN6细胞
- 生长分化因子11对db／db糖尿病小鼠胰岛β细胞功能的保护作用及机制研究被引量：6
- 2017年
- 目的探讨生长分化因子11（GDF11）对db／db糖尿病小鼠胰岛功能的影响及机制。方法将20只8周龄雄性db／db小鼠随机分为2组（n=10），分别给予6周GDFll重组蛋白（0．3mg·kg～·day^-1）或等量磷酸盐缓冲液（PBS）腹腔注射，选取10只8周龄db／m小鼠作为正常对照组，用等量PBS干预6周，定期检测各组血糖、体重及摄食量。实验前后行经腹腔葡萄糖耐量试验（IPGTT）并测定胰岛素释放水平，干预6周后，检测血清中HbA1C及三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、游离脂肪酸（FFA）水平；检测血清及胰腺内胰岛素、胰升糖素水平；RT—PCR分析胰岛Pdx-1、MafA、Nkx6．1、Insulin2基因转录水平；Western印迹法检测胰岛Smad2、P—Smad2表达水平。结果与DM组相比，GDF11组空腹血糖、HbA1C及血脂水平显著降低。而且，GDF11干预后显著改善小鼠糖耐量水平，增加糖负荷前后的胰岛素释放，升高血清及胰腺内胰岛素含量，降低血清中胰升糖素水平。实时荧光定量PCR发现GDFll组胰岛Pdx-1、MafA、Nkx6-1、Insulin2基因表达上调。免疫印迹法发现GDF11干预后胰岛P-Smad2水平升高。结论GDF11可能通过改善脂代谢，减少胰升糖素的释放，上调β细胞重要转录因子的表达，来保护β细胞功能，促进胰岛素的合成及分泌，延缓糖尿病进展。这种保护作用可能与激活胰岛Smad2信号通路有关。
- 李欢向光大梅稳刘敏向林董靖
- 关键词：糖尿病Β细胞功能
- GDF11对高脂喂养ApoE-/-小鼠主动脉保护作用的研究被引量：5
- 2016年
- 目的：探讨生长分化因子11（GDF11）对载脂蛋白E基因敲除（ApoE-/-）小鼠主动脉的作用及可能机制。方法4周龄健康雄性ApoE-/-小鼠适应性喂养1周后分为阳性对照组（Vehicle组,n=10）、GDF11干预组（ GDF11组, n=10）、腺相关病毒-绿色荧光蛋白组（ AAV-GFP 组, n=10）和腺相关病毒-GDF11组（AAV-GDF11组,n=10）。分别给予腹腔注射磷酸盐缓冲液、GDF11蛋白、尾静脉注射AAV-GFP和AAV-GDF11,干预4周后,测定血清GDF11/8浓度和血管内皮依赖性舒张功能。干预12周后,检测血清GDF11/8、白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、氧化型低密度脂蛋白（ ox-LDL）及游离脂肪酸（ FFA）水平；油红O及苏木素伊红（ HE）染色分析主动脉粥样斑块表面积及横断面积；抗CD68和抗CD90免疫组化染色测定斑块巨噬细胞及T淋巴细胞浸润；实时定量PCR分析主动脉壁IL-6、TNF-α及IL-10等炎性因子mRNA水平。结果与对照组相比,GDF11和AAV-GDF11显著改善小鼠内皮依赖性舒张功能,降低血中炎性因子、血脂水平,减少动脉粥样斑块表面积[ Vehicle组：GDF11组：（31.23±3.12）%对（17.18±2.17）%；AAV-GFP组： AAV-GDF11组：（38.01±4.43）%对（14.54±2.86）%,P＆lt;0.05]及横断面积[Vehicle组： GDF11组：（19.87±2.11）%对（10.32±1.47）%；AAV-GFP组： AAV-GDF11组：（23.02±2.76）%对（9.06±1.63）%,P＆lt;0.05],减轻斑块内巨噬细胞及T淋巴细胞的浸润,降低主动脉壁炎性因子mRNA转录水平（均P＆lt;0.05）。结论 GDF11可减轻ApoE-/-小鼠主动脉粥样硬化病变,其机制可能与保护内皮、减轻炎症及改变斑块中细胞组成有关。
- 梅稳向光大卢俊颜李欢刘敏向林董靖
- 关键词：内皮依赖性舒张功能炎症动脉粥样硬化
- 生长分化因子-11对高糖诱导的内皮祖细胞损伤的保护作用及机制被引量：2
- 2019年
- 目的探讨生长分化因子-11(GDF-11)对高糖诱导的大鼠骨髓来源内皮祖细胞(BM-EPC)增殖与凋亡的影响及可能机制。方法在体外不同葡萄糖浓度下培养BM-EPC,分别加入重组GDF-11蛋白(rGDF-11)、转化生长因子β(TGF-β)受体Ⅰ抑制剂SB431542等干预因素。根据实验目的及干预因素不同将细胞随机分组为:正常对照组、高糖组、高糖+rGDF-11组、高糖+rGDF-11+SB431542组。采用MTT测定增殖功能;膜联蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin Ⅴ-FITC/PI)双标记检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞内Bcl-2、Bax,以及活性半胱天冬酶(Cleaved-caspase)3等凋亡蛋白表达水平。免疫荧光染色法检测各组细胞p-Smad2/3表达水平。多组间比较采用单因素方差分析,组间多重比较选用最小显著差异t检验。结果高糖可明显减弱增殖功能(吸光度值0.23±0.03比0.12±0.01,t=12.98,P<0.01),降低Bcl-2/Bax比例,升高凋亡关键酶Cleaved-caspase 3,细胞凋亡率增加[分别为0.45±0.09比1.21±0.23、0.28±0.02比0.07±0.00、(18.63±3.02)%比(2.82±0.46)%,t=3.04、-68.06、-7.60,均P<0.05]。而rGDF-11干预可上调Bcl-2/Bax比例,减少Cleaved-caspase 3表达,抑制细胞凋亡。SB431542与细胞共培养后GDF-11的抗凋亡作用均明显减弱(0.56±0.11比1.14±0.07,t=4.33,P<0.05)。高糖显著降低p-Smad2/3水平(荧光强度表示),GDF-11预处理可恢复细胞内p-Smad2/3水平,而SB431542明显抑制GDF-11诱导的细胞p-Smad2/3表达增加(0.89±0.12比1.21±0.12,t=-3.20,P<0.05)。结论 GDF-11可能通过激活TGF-β/Smad2/3通路减少高糖诱导的β细胞凋亡。
- 张佳佳向光大李欢朱彪王力郭孛董靖刘敏向林
- 关键词：生长分化因子细胞增殖高糖内皮祖细胞
- 生长分化因子11对软脂酸诱导小鼠主动脉内皮细胞损伤的保护作用被引量：4
- 2017年
- 目的探索生长分化因子11 （GDF-11）对软脂酸（PA）诱导的小鼠主动脉内皮细胞（MAECs）的作用及其相关机制。
方法通过加或不加内皮型一氧化氮合酶（eNOS）抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯（L-NAME）或Smad3抑制剂SIS3研究eNOS和Smad通路在GDF-11保护软脂酸诱导的MAECs中的作用，将MAECs分为：（1）对照组；（2）PA组；（3）PA＋GDF-11组；（4）PA＋GDF-11＋L-NAME组；（5）PA＋GDF-11＋SIS3组，培养24 h后，活性氧试剂盒及实时-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测各组细胞氧化应激水平；流式细胞术检测各组细胞凋亡率；Western blotting法检测各组抗凋亡蛋白Bcl-2、凋亡蛋白Bax及Cleaved-caspase3蛋白表达水平。研究GDF-11对MAECs Smad信号通路的影响，MAECs分为：（1）对照组；（2）GDF-11组；（3）GDF-11＋转化生长因子β（TGF-β）受体Ⅰ抑制剂组（GDF-11＋ SB431542组），培养30 min后，免疫荧光染色法检测各组MAECs细胞磷酸化Smad2/3 （P-Smad2/3）表达水平；研究GDF-11对MAECs AMPK/eNOS信号通路的影响，MAECs分为：（1）对照组；（2）GDF-11组；（3） GDF-11＋AMPK抑制剂Compound C组；（4）GDF-11＋L-NAME组；（5）GDF-11＋Compound C＋L-NAME组，培养30 min后，Western blotting法检测各组细胞AMPK、磷酸化AMPK （P-AMPK）、eNOS、磷酸化eNOS （P-eNOS）、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt （P-Akt）、蛋白激酶A （PKA）、磷酸化PKA （P-PKA）水平。多组之间比较采用单因素方差分析，组间多重比较用最小显著性差异t检验。
结果与对照组相比，PA组细胞氧化应激和凋亡率显著增加（28.9%±2.2％比7.9%±1.5%），PA＋GDF-11组细胞氧化应激和凋亡率明显低于PA组（12.6%±1.6％比28.9%±2.2%），而PA＋GDF-11＋L-NAME组和PA＋GDF-11＋SIS3组细胞氧化应激和凋亡率又明显低于PA＋GDF-11组（分别为21.8%±2.0%、20.1%±1.8%、12.6%±1.6%，F= 97.89，P〈0.05）。与对照组相比，GDF-1
- 梅稳向光大卢俊颜李欢刘敏向林董靖
- 关键词：软脂酸
- GDF11对ApoE-/-糖尿病小鼠内皮依赖性血管舒张功能的作用被引量：1
- 2016年
- 目的 研究生长分化因子11(GDF11)对载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)糖尿病小鼠胸主动脉内皮依赖性血管舒张功能的影响,探讨其可能的机制.方法 40只4周龄健康雄性ApoE-/-小鼠按随机数字法选择10只作为正常对照组(NC组),以正常饲料喂养,其余30只以高脂饲料喂养4周后,连续5d腹腔注射链脲佐菌素(50 mg/kg)制备2型糖尿病模型.将造模成功小鼠共20只按随机数字法分为GDF11组(0.1 mg·kg-1·d-1腹腔注射,n=10)和糖尿病对照组(T2DM组,等量磷酸盐缓冲液腹腔注射,n=10).干预4周后,检测各组空腹血糖、空腹胰岛素、HbA1c、GDF11浓度,并计算稳态模型评估-胰岛素敏感性指数(HOMA-ISI);测定各组小鼠离体胸主动脉条的张力反应及主动脉一氧化氮含量,Western印迹检测主动脉内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、磷酸化eNOS(P-eNOS)、Smad2/3、磷酸化Smad2/3(P-Smad2/3)水平.结果 与NC组相比,T2DM组空腹血糖、空腹胰岛素、HbA1c水平升高,GDF11浓度及HOMA-ISI降低,乙酰胆碱引起的内皮依赖性舒张反应降低;与T2DM组相比,GDF11组上述指标均有改善(F=70.923～675.430,P均＜0.01).而硝普钠诱导的内皮非依赖性舒张反应各组间差异无统计学意义(P＞0.05).与NC组相比,T2DM组血管中一氧化氮含量、P-eNOS水平、磷酸化Smad2/3水平下降,GDF11组上述指标均有显著升高(F=40.120～148.060,P均＜0.01).结论 GDF11通过促进一氧化氮生成,激活Smad2/3信号通路,改善ApoE-/-糖尿病小鼠内皮依赖性血管舒张功能.
- 梅稳向光大卢俊颜李欢向林董靖
- 关键词：2型糖尿病内皮依赖性血管舒张一氧化氮
- 生长分化因子11对糖尿病大鼠内皮祖细胞数量和功能的影响被引量：1
- 2018年
- 目的探讨生长分化因子11（GDF11）对糖尿病大鼠内皮祖细胞（EPC）数量及功能的影响。方法雄性Sprague-Dawley大鼠40只按随机数字法随机分为正常对照组（n=10）和糖尿病组（n=30）。糖尿病组大鼠通过腹腔注射链脲佐菌素（STZ）建立糖尿病大鼠模型。建模12周后，取20只糖尿病大鼠按照随机数字法分为模型对照组与实验组（每组10只），实验组腹腔注射重组人GDF11蛋白0．1mg／kg，连续干预14d，模型对照组给予等量磷酸盐缓冲液。14d后，取腹主动脉血，利用流式细胞仪检测EPC的数量，取大鼠股骨及胫骨骨髓，分离培养EPC，通过小管形成实验及迁移实验检测EPC的功能。结果与正常对照组相比，模型对照组大鼠循环EPC数量明显减少（t=4．823，P〈0．01），迁移能力及小管形成能力亦降低（t=-15．236、-7．005，P均〈0．01）。与模型对照组相比，实验组大鼠循环EPC数量明显增多（t=2．784，P〈0．05），同时迁移能力及小管形成能力提高（t=-7．066、-6．296，P均〈0．01）。结论GDF11可以动员糖尿病大鼠循环EPC，增强其EPC的迁移和小管形成能力。
- 张佳佳向光大李欢朱彪王力郭孛向林董靖刘敏
- 关键词：糖尿病内皮祖细胞
