张杰
- 作品数：111 被引量：421H指数：9
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国际科技合作与交流专项项目甘肃省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生自动化与计算机技术更多>>
- 污水中致病微生物对公共卫生安全的影响及控制策略被引量：2
- 2009年
- 从病原微生物的角度,阐述了生活污水及畜禽场排放物对公共卫生安全的影响,综述了污水中病原微生物的检测方法及影响病原扩散和分布的因素、水处理质量评价指标的改进等国内外研究进展。
- 刘永生张杰
- 关键词：水环境致病微生物人畜共患病生物安全
- 脂筏标记蛋白flotillin-2生理功能的研究进展被引量：3
- 2012年
- 为了给进一步研究flotillin-2与某些神经退行性疾病(如海绵状脑病等)的关系提供参考,对脂筏标记蛋白flotillin-2的结构及其主要的生理功能进行了综述,提出,进一步研究flotillin-2与某些神经组织退化疾病及肿瘤的关系,对疯牛疯、克雅病、阿尔兹罕默氏病以及肿瘤病的发病机制及治疗研究具有重要意义。
- 赵峰张杰李丽
- 关键词：脂筏朊蛋白
- 猪圆环病毒2型Cap蛋白多克隆抗体的制备及鉴定被引量：3
- 2019年
- 旨在制备猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白的多克隆抗体。以PCV2毒株(CAU0673)DNA为模板进行PCR,扩增目的片段大小约为702bp,构建pET30a-PCV2-Cap重组质粒,转入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达;对目的蛋白进行Ni-NTA树脂亲和层析纯化、复性,并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定;将纯化后的重组Cap蛋白与弗氏佐剂混匀乳化,经背部皮下多点注射4次,免疫新西兰大耳白兔,制备成兔抗Cap蛋白多克隆抗体,采用Western blot和间接免疫荧光试验(IFA)验证兔抗血清特异性,并用间接ELISA测定抗血清抗体效价。PCR、双酶切和测序鉴定结果表明,重组质粒pET30a-PCV2-Cap构建正确;重组Cap蛋白以包涵体的形式表达,大小约为34kD,复性后重组Cap蛋白可与PCV2阳性猪血清发生特异性反应;制备的多克隆抗体与PCV2重组Cap蛋白和全病毒抗原均可发生反应,ELISA抗体效价>1∶12800,显著高于商品化疫苗组。
- 欧云文代军飞马炳张杰邓辉祥李潇张欣明
- 关键词：猪圆环病毒2型CAP蛋白多克隆抗体
- 牛浮舰蛋白-2在真核细胞中的表达与鉴定被引量：1
- 2014年
- 采用基因重组法将牛浮舰蛋白-2(Flotillin-2)基因的整个开放阅读框(ORF)克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-)/Myc-His(B),通过脂质体法将重组质粒转入中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,利用Western-blot分析目的基因的表达情况。为确定35ku的小蛋白来源,采用融合PCR法构建突变体,分别利用标签抗体和针对浮舰蛋白-2的抗体鉴定突变体表达蛋白的特性。测序结果表明,成功构建了Flotillin-2基因的全长ORF及其突变体mFlotillin-2的重组质粒。Western-blot结果显示,Flotillin-2基因的全长ORF在CHO细胞中表达时除出现与预期大小相一致的48ku目的蛋白带外,还有1个35ku的条带。基因序列分析发现,在第430~438位核苷酸存在1个似Kozak序列(CGCATGGGC)。将ATG突变成GCT(丙氨酸)后,Western-blot结果显示,突变前后35ku的小蛋白始终存在。本研究以pcDNA3.1(-)/Myc-His(B)为载体,实现了牛Flotillin-2基因的全长ORF的真核表达,证明了35ku小蛋白并不是由于重新起始翻译导致的,而可能是浮舰蛋白-2在翻译过程中的裂解产物。
- 孙东杰赵峰张杰
- 关键词：中国仓鼠卵巢细胞突变体真核表达融合PCR
- 绵羊成熟叠朊在大肠杆菌中的表达
- 以含有绵羊叠朊编码基因Prnd的ORF的质粒OvPrnd-T为模板,PCR扩增出成熟叠朊编码基因片段,并将其插入原核表达载体pET-30a(+)的EcoRⅠ和XhoⅠ位点之间,构建出重组表达质粒pET-OvmDpl。将p...
- 张杰刘永生路伟陈豪泰卫广森谢庆阁
- 关键词：绵羊大肠杆菌二聚体
- 文献传递
- 传感器在公共卫生监测中的研究应用被引量：1
- 2009年
- 传感器作为一种高新技术的检测手段迅猛发展而引起国内外广泛关注,并被列为重点研究和发展的新技术,在多领域拓展的潜力和前景被人们所看好。因具有灵敏、专一、微量、快速、准确、经济实用的特点,在工业、农业、环境监测及生物医学等领域相继得到开发和运用。本文就传感器在公共卫生监测中的研究应用进行综述,并就其发展进行展望。
- 丁耀忠张杰魏刚刘永生
- 关键词：传感器公共卫生监测
- 牛朊蛋白在CHO/dhfr-细胞中的稳定表达被引量：4
- 2009年
- 从T载体上得到的目的基因和dhfr共扩增基因真核表达载体构建了pCI-PrP102。纯化后的重组质粒通过脂质体转染CHO/dhfr-细胞,经MTX加压筛选获得稳定表达的细胞株,间接免疫荧光试验检测到目的蛋白的表达。
- 丁耀忠张杰刘永生陈豪泰曾巧英马丽娜马艳平杨生海殷宏
- 传感器在致病菌检测上的应用被引量：5
- 2010年
- 生物传感器因其具有灵敏、专一、微量、快速、准确、经济实用的特点,在工业、农业、环境监测及生物医学等领域的生物传感器相继得到开发。它是利用抗原或抗体检测相应的抗体或抗原的一种传感器技术。此文就生物传感器在细菌的应用进行综述性报道,并就其发展进行展望。
- 张杰刘永生
- 关键词：免疫传感器细菌微生物
- 三种哺乳动物朊蛋白基因的克隆与分析被引量：5
- 2006年
- 以外周血液的总DNA为模板,运用PCR方法克隆了汉族人、秦川黄牛和甘肃土种绵羊的Prnp基因,运用分子生物学软件对这些序列进行了分析比较。结果表明,获得的3种哺乳动物的Prnp基因均位于1个单一的外显子内,与GenBank中登录的相应序列具有高度同源性,达99.0%。牛与绵羊Prnp基因同源性为97.3%,推导氨基酸序列同源性为96.5%。人Prnp基因与黄牛和绵羊Prnp基因的同源性分别为86.7%和87.1%,其氨基酸序列的同源性均为90.0%。3种Prnp基因均有富含G-C的重复区,编码的PrP蛋白均由氨基端的信号肽、中间的成熟蛋白和羧基端的GPⅠ锚结合位点组成。基因型分析表明,秦川黄牛和甘肃土种绵羊可能存在感染海绵状脑病的风险。
- 张杰刘永生陈豪泰姜海霞路伟朱小玲谢庆阁
- 关键词：海绵状脑病朊蛋白基因朊病毒绵羊
- 美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备
- 2017年
- 目的原核表达美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(North American genotype porcine reproductive and respiratory syndrome virus,NA-PRRSV)N蛋白,并制备多克隆抗体。方法以NA-PRRSV QH-08毒株的RNA为模板,扩增N蛋白编码片段,克隆入原核表达载体p ET30a(+),构建重组表达质粒pET30a-NA-PRRSV-N,转入大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达6 h。采用Ni-NTA树脂亲和层析纯化表达的重组蛋白,复性后的重组N蛋白与弗氏佐剂混合乳化,经背部多点免疫新西兰大耳白兔,制备兔抗NA-PRRSV-N蛋白多克隆抗体,采用Western blot和间接免疫荧光试验检测多克隆抗体的特异性,间接ELISA法检测血清抗体效价。结果经PCR、双酶切和测序鉴定,重组表达质粒p ET30a-NA-PRRSV-N构建正确;重组N蛋白以包涵体形式表达,相对分子质量约为24 000,纯度可达95%以上,可与NA-PRRSV阳性猪血清发生特异性反应;制备的多克隆抗体能够识别重组N蛋白和全病毒抗原,抗体效价>1∶25 600,显著高于商品化疫苗组。结论成功在大肠埃希菌中表达了NA-PRRSV N蛋白,并制备了其多克隆抗体,为NA-PRRSV检测方法的建立奠定了基础。
- 欧云文王勤马炳马小元代军飞贾宁丁耀忠张永光张杰
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白原核细胞基因表达多克隆抗体
