刘勇
- 作品数：14 被引量：79H指数：6
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所更多>>
- 发文基金：云南省应用基础研究基金云南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 戊型肝炎病毒DNA免疫的研究被引量：5
- 2001年
- 利用PCR方法获得 116 3bp的戊型肝炎 (HepatitisEVirus,HEV)开放读码框架 (OpenReadingFrame ,ORF)ORF2之 3’大片段和 36 9bpORF3的完整片段 ,分别克隆到真核表达载体 pcDNA3中 ,构建两种含有HEV主要抗原表位的质粒DNA :pcE2和pcE3 ,分别或混合免疫Swiss小鼠三次 (0时 ,第 2周 ,第 4周 ) ,观察其在小鼠体内诱发的体液免疫应答。ELISA检测结果表明 ,pcE2和 pcE3在小鼠体内均可诱导出一定水平的HEVIgG抗体 ,且在第三次免疫接种两周后 ,10 0 %的小鼠抗体阳转。与两种质粒单独免疫相比 ,两者同时注射的抗体水平较高。本研究为HEVDNA疫苗的研究打下一定基础。
- 吕冬梅陈尔佳谢天宏庄俊英刘勇李春宏孙茂盛戴长柏
- 关键词：DNA免疫戊型肝炎病毒体液免疫
- 戊型肝炎病毒抗原基因片段及其组合表达质粒的构建被引量：1
- 2000年
- 目的选择及组合戊肝病毒 (HEV)抗原基因片段 ,进行表达与免疫学特性研究。方法根据已公布的 HEV序列 ,选择三段优势抗原表位 ,经 RT- PCR扩增基因片段 ,产物以单独或经甘氨酸连接肽串联组合的方式克隆到载体 pThioHis C中 ,经 DNA序列分析后 ,将构建的重组质粒转入大肠杆菌中进行表达 ,并以 Western印迹分析初步考察其免疫学特性。结果构建的六个重组质粒在大肠杆菌中获得了不同程度的表达 ,表达的目的蛋白具有与戊型肝炎患者阳性血清特异性结合的能力。结论 HEV抗原片段及其组合在大肠杆菌中得到了高效表达 ,并为优良诊断试剂及基因工程疫苗的研究提供了基础。
- 唐浩马雁冰李春宏杜瑞娟乐耕耘庄俊英刘勇孙茂盛戴长柏
- 关键词：基因克隆大肠杆菌基因表达戊型肝炎病毒
- 分泌型乙型肝炎病毒包膜M蛋白在毕赤酵母中的表达被引量：9
- 2002年
- 将乙肝病毒包膜中蛋白M基因插入酵母整合型表达质粒pAO818的醇氧化酶 (AOX1)启动子下游 ,构建携带 8拷贝M表达盒的重组载体 ,经电穿孔转化SMD116 8菌株和G4 18筛选 ,得到了高效分泌表达M蛋白的毕赤酵母菌株 ,表达量超过 5 0mg L .经初步纯化 ,对表达产物的性质鉴定表明 ,重组蛋白具有preS2和S抗原性 ,可以形成颗粒 ,并具有一定程度的糖基化 .所构建的稳定重组菌株和所得到的重组蛋白颗粒 ,为进一步研究新一代的疫苗提供了必要的材料 .
- 丁云菲刘勇刘红岩马雁冰孙强明孙茂盛戴长柏
- 关键词：分泌表达基因工程疫苗
- 人血纤维蛋白溶酶原K5环的基因合成、表达、纯化与活性鉴定被引量：6
- 2001年
- 根据大肠杆菌遗传密码的偏爱性 ,人工合成人血纤维蛋白溶酶原 K5全基因 ,并在原核系统中以硫氧还蛋白融合蛋白的形式实现了高效表达 .重组蛋白通过 Ni2 +金属螯合层析得到初步纯化 ,通过肠激酶切割去除了融合标签 .应用鸡胚尿囊膜实验检测切割后的 rh K5的生物学活性 ,发现与对照组相比 ,rh K5能明显地降低血管管径、血管总面积以及血管总面积与视野面积的比值 ,表明切割后的产物具有显著抑制新生血管生成的生物学活性 .为进一步研究和开发抗血管生成药物奠定了基础 .
- 袁力勇马雁冰刘勇庄俊英李春宏冮宏映孙茂盛戴长柏
- 关键词：基因合成基因表达肿瘤治疗
- 人乳头瘤病毒分子生物学的研究进展
- 1998年
- 人乳头瘤病毒(HPV)与人类多种肿瘤的发生有密切关系。由于病毒至今尚不能在体外培养,因此限制了对其致病机制和疫苗研究的进程。近年来利用基因工程技术表达了HPV与致病和疫苗研制相关的基因,这些研究为探索HPV在引发肿瘤过程中的作用,确定其抗原表位,诱导机体产生抗病毒攻击免疫反应方面提供了重要的科学依据。
- 刘勇
- 关键词：人乳头瘤病毒分子生物学
- 重组杆状病毒表达HEV ORF2抗原片段被引量：7
- 2001年
- 目的 用重组杆状病毒表达戊型肝炎病毒 (hepatitisEvirus,HEV)ORF2基因片段 ,并对其免疫学特性进行研究。方法 与中间转染载体pVL1 3 93相连构建重组质粒 ,在Lipofectin介导下将其与杆状病毒线性DNA(BaculoGoldTM)共转染Sf9昆虫细胞得到重组病毒 ,用免疫荧光 ,Westernblot等方法对表达产物进行免疫学特性初步研究 ,并进行动物免疫试验。结果 含ORF2结构基因片段的重组杆状病毒在Sf9昆虫细胞中获得了高效表达 ,经免疫荧光 ,Westernblot,动物免疫试验证实该重组蛋白为HEV特异性蛋白 ,可刺激机体产生相应抗体。结论 重组杆状病毒能有效表达HEV抗原基因 ,所表达的ORF2重组蛋白具有HEV抗体识别的抗原表位 ,具有较好的抗原性和免疫原性。
- 杜瑞娟马雁冰唐浩庄俊英乐耕耘刘勇戴长柏孙茂盛
- 关键词：杆状病毒HEVORF2基因
- 巴斯德毕赤酵母研究进展被引量：22
- 2003年
- 巴斯德毕赤酵母以其独特的生物学和遗传学特征成为当今一种诱人的外源基因表达系统,已成功地表达了各种类型的外源蛋白。本文综述了巴斯德毕赤酵母的一些特征及其作为外源基因表达系统,实现高表达的策略。
- 丁云菲刘勇戴长柏
- 关键词：巴斯德毕赤酵母基因表达系统
- 恒河猴与人GDNF基因的直接全血PCR克隆及序列分析被引量：1
- 1998年
- 利用微量全血直接进行ＰＣＲ扩增，克隆到了猴与人的ＧＤＮＦ基因，经全序列分析证实人ＧＤＮＦ （ｈＧＤＮＦ）基因全部正确，猴 ＧＤＮＦ（ＲｈＧＤＮＦ ＧｅｎＢａｎｋ ＡＦ１０６６７８）基因与人 ＧＤＮＦ基因高度同源，在 ＤＮＡ的 成熟蛋白编码区中二者有７个核苷酸不同，而蛋白中仅有两个氨基酸差异．该研究为ＧＤＮＦ的重组表达及进 一步研究ＧＤＮＦ蛋白的结构与生物学功能打下基础．简要探讨了全血量对ＰＣＲ扩增结果的影响，并对脊椎动 物进化中ＧＤＮＦ的保守性作了比较．
- 陈尔佳杜秋江刘勇谭德勇孙茂盛戴长柏
- 关键词：GDNFPCR恒河猴
- 轮状病毒VP7基因在大肠杆菌中的表达及其免疫原性被引量：17
- 2001年
- 轮状病毒是世界范围内引起婴幼儿病毒性腹泻的主要病原体。VP7是轮状病毒的主要外壳蛋白和中和抗原 ,是发展基因工程疫苗的首选。把包含全部 3个主要抗原性区域的轮状病毒SA11VP7基因片段以谷胱甘肽S 转移酶融合蛋白的形式在大肠杆菌中进行表达 ,表达产物占菌体总蛋白的 30 %左右。经一步GlutathioneSepharose4B亲和纯化 ,重组蛋白纯度超过 90 %。Westernblot实验表明 ,重组蛋白可被抗SA11的多抗特异地识别。动物实验表明 ,重组抗原可在小鼠和家兔体内诱导VP7特异的抗体和一定水平的SA11中和抗体。
- 袁力勇刘勇李春宏孙茂盛戴长柏
- 关键词：轮状病毒VP7大肠杆菌免疫原性
- 轮状病毒VP7基因修饰载体的构建及其在Hela细胞中的表达被引量：3
- 2000年
- 目的 :对轮状病毒 SA1 1株 VP7基因进行修饰 ,使其表达后锚定于宿主细胞膜表面 ,同时构建一个可使目的蛋白分泌或跨膜表达的载体。方法 :用 PCR的方法把 VP7天然信号肽替换为流感病毒血凝素信号肽。然后 ,在基因下游添加流感病毒血凝素跨膜区编码序列 ,从而构建在宿主细胞表面表达的轮状病毒 SA1 1 VP7基因。利用遗传密码简并性在信号肽序列 3′端和跨膜区 5′端分别引入 Sty 和 Eco RV限制性内切酶识别位点 ,从而实现分泌 /跨膜基因修饰载体的构建。把野生型和跨膜型 VP7基因分别克隆入 pc DNA3哺乳动物细胞表达载体 ,转染 Hela细胞 ,得到稳定表达两种 VP7基因的细胞系。对外源基因在细胞染色体上的整合情况以及基因表达情况进行检测。结果 :酶切鉴定和 DNA序列分析表明膜锚定型 VP7基因和分泌 /跨膜基因修饰载体的构建正确。PCR和免疫荧光实验证明 ,VP7基因已经整合进入宿主细胞染色体 ,野生型和膜锚定型 VP7基因表达后分别定位于宿主细胞质和细胞膜。结论 :成功地构建了可在细胞膜表面锚定表达的 VP7基因 ,为进一步研究轮状病毒基因工程疫苗奠定了基础。新型分泌 /跨膜基因修饰载体为研究蛋白合成后加工和提高其免疫原性提供了有力的工具。
- 刘勇崔丽庄俊英马雁冰袁力勇戴长柏孙茂盛
- 关键词：轮状病毒VP7基因基因修饰HELA细胞
