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汉坦病毒包膜糖蛋白G2重组腺病毒的构建及其在Hela细胞中的表达: 2009年; 本研究旨在构建可表达汉坦病毒(HTNV)糖蛋白G2的重组腺病毒。应用PCR方法扩增G2编码基因,经T/A克隆、测序鉴定后再亚克隆到腺病毒shuttle载体pAd5-CMV中并用磷酸钙沉淀法分别将携带G2编码基因的重组腺病毒shuttle载体与携带报告基因eGFP的腺病毒骨架质粒共转染HEK293细胞,包装、扩增、纯化后得到携带HTNV糖蛋白G2编码基因的重组腺病毒;用重组腺病毒感染Hela细胞并收获蛋白,间接免疫荧光、Western blotting检测蛋白表达。经酶切鉴定表明已成功构建了携带G2基因的重组腺病毒载体;RT-PCR鉴定表明目的基因能够在感染重组腺病毒的Hela细胞中转录;荧光显微镜观察重组腺病毒感染的Hela细胞,可见报告基因eGFP的表达;间接免疫荧光法和Western blotting均证实表达产物可被抗G2单克隆抗体所识别,表明糖蛋白G2在感染细胞中得到了表达。本研究成功构建了可表达HTNV包膜糖蛋白G2的重组腺病毒,转染宿主细胞可稳定表达目的蛋白,为HTNV糖蛋白G2的结晶、结构解析研究以及新型汉坦病毒疫苗的研制奠定了基础。; 呼延霆薛小平宋凯汪桦杨慧王伟; 关键词：汉坦病毒重组腺病毒

人类天冬胺酰基β-羟化酶的表达及其单克隆抗体的制备: 2011年; 旨在深入研究人类天冬胺酰基β-羟化酶(HAAH)在肿瘤早期诊断中的作用机制。应用RT-PCR方法从肝癌组织中获得人类天冬胺酰基β-羟化酶HAAH编码基因,并在原核表达载体pBV-IL1中进行融合表达,将Ni柱纯化的融合蛋白免疫Balb/c小鼠,获得了3株稳定的阳性单克隆细胞株(H3/E10、E4/F12、G4/D8),间接ELISA和Western blotting鉴定单抗的特异性和灵敏度,以单抗H3/E10介导的间接免疫荧光检测HAAH在各种肿瘤细胞系中的表达,可见特异的荧光。试验中成功构建了可表达HAAH基因的原核表达载体pBV-IL1-HAAH,并制备了3株抗HAAH的单克隆抗体,为HAAH的结构和功能的研究奠定了基础,同时也为进一步将该抗体应用于肿瘤的早期诊断以及研究HAAH在肿瘤发生转移中的机理提供了重要工具。; 呼延霆尹大川王伟宋凯王燕卢慧甍杨慧薛小平; 关键词：原核表达单克隆抗体

模拟微重力环境对大肠杆菌形态与表面超微结构的影响研究被引量：4: 2011年; 采用模拟微重力生物效应回转器处理大肠杆菌ATCC 25922,利用扫描电镜和原子力显微镜研究了模拟微重力环境对大肠杆菌的形态及表面超微结构的影响。结果发现,模拟微重力条件下,处理菌株与对照菌株相比在形态、长宽度、表面超微结构等方面有明显改变。表明微生物的形态和表面超微结构与微重力的变化有关。; 王伟薛小平杨慧谢琼; 关键词：微重力回转器原子力显微镜扫描电镜

ASPH在肿瘤细胞和肿瘤组织中的分布及检测被引量：13: 2010年; 目的:检测肿瘤细胞系和我国肿瘤患者癌组织中天冬氨酰-(天冬酰胺酰)β-羟化酶(ASPH)的分布及表达谱。方法:采用RT-PCR法检测肿瘤细胞系中ASPH基因的转录水平;细胞免疫荧光和Western blot方法检测肿瘤细胞系中ASPH蛋白的表达水平;免疫组织化学方法检测人癌组织和正常组织中ASPH的分布与表达。结果:在肿瘤细胞系中AS-PH在转录和翻译水平均有不同程度表达,ASPH蛋白分布于细胞膜和胞质区域;在肿瘤患者组织中有ASPH的高表达,而人正常组织中不表达或表达量极低。结论:ASPH是一种有潜力的广谱性肿瘤标记分子,有可能用于肿瘤的早期检测。; 宋凯薛小平王伟呼延霆汪桦杨慧谢琼; 关键词：肿瘤细胞系

鼠源性抗人HAAH mAb可变区基因克隆及单链抗体的构建和表达被引量：1: 2010年; 目的:从分泌抗人类天冬氨酰基β-羟化酶(HAAH)单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞G3/F11中,克隆出鼠源an-ti-HAAH mAb重、轻链可变区基因,构建Anti-HAAH的单链抗体(scFv),并进行scFv基因的蛋白表达。方法:提取杂交瘤细胞G3/F11的总RNA,通过RT-PCR扩增出VH和VL基因;再利用重叠延伸PCR(SOE-PCR),通过设计在引物上的linker序列,将VH和VL拼接为完整anti-HAAHscFv基因。将测序正确的scFv基因克隆入pHEN1载体,并利用E.coliHB2151进行蛋白表达;通过SDS-PAGE,Western blot分析其表达状况,ELISA鉴定其抗原结合活性。结果:测序结果显示,本实验成功地构建出鼠源anti-HAAHVH-linker-VLscFv基因,且VH、VL均具有完整正确的小鼠抗体骨架区和互补决定区结构,所得的scFv基因片段全长744bp,编码248个氨基酸。SDS-PAGE和Westernblot分析表明,pHEN1-anti-HAAH在E.coliHB2151可表达为Mr约27000的可溶性scFv蛋白,表达量为7.8%。间接ELISA检测显示,可溶性鼠源anti-HAAHscFv蛋白具有较高的抗原结合活性。结论:成功扩增出的鼠源anti-HAAHmAbVH区和VL区基因,并构建为anti-HAAHscFv基因。然后,利用pHEN1载体对anti-HAAHscFv基因进行成功表达,为进一步研究其生物活性及应用奠定了基础。; 汪桦薛小平雷迎峰宋凯呼延霆王伟杨慧; 关键词：单链抗体单克隆抗体蛋白表达

失重或模拟失重对微生物的生物学效应研究进展: 2010年; 目的综述国内外关于失重或模拟失重对微生物生物学效应方面的研究进展.资料来源与选择国内外该领域公开发表的相关论著及综述.资料引用引用文献资料38篇.资料综合空间失重环境可诱导微生物生理生化和遗传性状发生变异,一些原本对人体和环境无害的微生物种群会在毒力、致病性、抗生素敏感性等方面发生改变.结论利用微生物开展空间失重生物学效应的研究对于阐明失重环境下微生物生存和变异的机制、未来空间受控生态生保系统的建立、空间微生物安全监控及空间失重资源的合理利用等都有重要的理论和实际意义.; 杨慧薛小平谢琼王伟宋凯呼延霆汪桦; 关键词：失重失重模拟环境微生物学生物学效应

微重力环境下的细菌生物学效应被引量：8: 2011年; 本文主要根据国内外微重力环境下细菌生物学效应的研究文献,从细菌生长繁殖、抗生素敏感性、毒力变化、新陈代谢等方面进行总结,并概述了微重力环境改变细菌生物学性状的作用机制,展望了微重力环境细菌生物学技术的未来发展。; 王伟薛小平杨慧; 关键词：微重力环境细菌

海洋环境中微生物腐蚀及其防护研究进展被引量：9: 2010年; 微生物腐蚀是当前我国海洋工程设施发展亟待解决的问题。综述了近几年来海洋环境中微生物腐蚀的研究方法及其防控措施,重点对液中高压脉冲电场杀菌技术做了详细的概括和分析。; 杨慧薛小平傅增祥王伟宋凯呼延霆汪桦; 关键词：微生物膜微生物腐蚀硫酸盐还原菌

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王伟