张磊
- 作品数：6 被引量：25H指数：1
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所实验血液学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划天津市科技发展战略研究计划项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 原核表达载体pOPE101-8E5的改构及单链抗体的表达鉴定
- 2007年
- 利用基因重组技术将链亲和素(core-streptavidin)cDNA插入原核表达载体pOPE101-8E5的3′端,并用单链抗体scFv-C4的重链和轻链可变区cDNA取代其scFv-8E5,构建重组表达载体pOPE101-C4∷core-streptavidin。将该表达载体转化入在大肠杆菌中进行诱导表达,用聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹法分析表达产物的表达量和产物活性。结果提示成功地获得一个分子量约为45kDa的scFv-C4∷core-streptavidin的融合蛋白,它可结合KG1a细胞裂解物中分子量约为60kDa、45kDa的蛋白带,且其结合功能可以通过融合蛋白中的链亲和素基因直接测定。
- 许静刁世勇张磊徐洁孟磊
- 关键词：链亲和素单链抗体融合蛋白
- 脐带间充质干细胞体外分化为有功能的低免疫原性肝细胞样细胞被引量：24
- 2010年
- 目的观察人脐带来源的间充质干细胞(UC-MSCs)体外诱导分化为肝细胞样细胞(DHC)后,是否具有肝细胞的生物学特性和功能,以及其免疫原性的变化。方法采用改良的二步法肝细胞分化培养体系体外诱导UC-MSCs向肝细胞分化,并用RT-PCR和免疫荧光染色法检测诱导后不同时间DHC肝细胞特异性标记的表达;采用ELISA法检测细胞培养液中白蛋白(ALB)和尿素的浓度,以及混合淋巴细胞培养检测DHC对淋巴细胞增殖能力的影响。结果 UC-MSCs低表达甲胎蛋白(AFP)、ALB和细胞角蛋白-19(CK-19)的mRNA和蛋白,成肝诱导分化后14和28dDHC均高表达肝细胞标志AFP、ALB、CK-19以及色氨酸2,3-加双氧酶基因。诱导后的DHC能够以时间依赖方式产生ALB和分泌尿素,不表达人白细胞DR抗原,而且能够抑制淋巴细胞增殖。结论 UC-MSCs在体外能够分化为有功能的DHC且具有低免疫原性的特征。
- 任红英赵钦军邢文杨少光卢士红任倩张磊韩忠朝
- 关键词：间充质干细胞肝细胞样细胞分化免疫原性
- 人促血液血管生成素(rh-HAPO)对人的骨髓造血干/祖细胞和血管内皮细胞促增殖功能的研究
- 目的:探讨重组人促血液血管生成素(rh-HAPO)对人骨髓细胞及内皮细胞的作用。方法:细胞液体培养、半固体培养、MTT方法、免疫荧光标记流式细胞仪测定、免疫组化、显微镜观察照相等方法。结果:1.在液体培养3周的胎儿骨髓单...
- 卢士红刘拥军张磊杨仁池陆敏冯义任倩韩忠朝
- 文献传递
- B3HM细胞免疫小鼠脾细胞scFv噬菌体展示文库的构建及表达
- 2007年
- 目的:利用噬菌体展示技术构建B3HM细胞免疫小鼠的脾细胞表达scFv文库。方法:用人骨髓细胞系B3HM细胞免疫小鼠,取其脾细胞采用RT-PCR方法扩增VH和Vk基因并克隆入噬菌体展示表达载体,构建scFv文库,测定文库的库容量,BstNI酶切单克隆分析文库的多样性,对文库进行富集检测,鉴定单克隆噬菌体与B3HM细胞结合反应。结果:文库的库容为5×106cfu,单克隆的BstNI酶切图谱显示多样性,单克隆噬菌体抗体与B3HM细胞呈阳性反应。结论:噬菌体展示文库的成功构建为寻找新的致白血病相关基因,阐明白血病发病机理奠定了基础。
- 许静张磊刁世勇刘斌孟磊姜学英韩忠朝
- 关键词：噬菌体展示抗体库单链抗体
- 巴曲酶对胎儿骨髓CD34+细胞的粘附、趋化功能的作用
- ＜正＞目的巴曲酶（Batroxobin）为强力单成分溶血栓、改善微循环治疗剂,它的作用是分解纤维蛋白,能降低血中纤维蛋白原的含量,增强纤溶系统的活性,抑制血小板聚集、沉降,增强血液流动性, 防止血栓形成。我们最新探索了巴...
- 卢士红张磊杨仁池韩忠朝
- 文献传递
- 抗脐带间充质干细胞表面分子噬菌体ScFv抗体库的构建及初步鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的:利用噬菌体展示技术构建抗脐带间充质干细胞表面分子噬菌体ScFv抗体库。方法:收集P3代培养的UC-MSCs免疫BALB/c小鼠,提取其脾细胞总RNA,RT-PCR扩增全套VH和VL基因片段,将其先后克隆入噬菌粒pSEX81中,构建成完整的噬菌体ScFv抗体库。结果:构建的噬菌体ScFv抗体库的库容为2×107cfu,ScFv插入重组率为93%,BstN1酶切图谱呈不同多样性。ScFv抗体库经3轮初步筛选后插入重组率达100%,3个克隆出现了相同的酶切图谱,并且随着筛选次数的增加,输出/输入比明显提高,这说明抗体库得到了特异性富集。结论:成功地构建了抗脐带间充质干细胞表面分子噬菌体ScFv抗体库,这为将来筛选特异性抗体和进一步用于间充质干细胞表面特异性分子研究奠定了坚实的基础。
- 徐洁顾东生廖文斌许静杜伟廷张磊卢士红韩忠朝
- 关键词：间充质干细胞脐带噬菌体展示单链抗体库
