王斌
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
- 供职机构：青岛农业大学动物科技学院优质水禽研究所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 鹅热休克蛋白70的表达提纯与病毒复合物形成的研究被引量：2
- 2007年
- 【目的】为研究HSP70在热应激时的特异性表达、组织中HSP70的分离纯化及其结合抗原肽形成复合物的特性,设计此试验。【方法】选取6w健康五龙鹅60只随机分为3组,对照组鹅不经热处理,试验1组鹅进行1次(42±1)℃、5h的急性热处理后立即宰杀,试验2组鹅经热处理后在正常饲养条件下恢复12h后宰杀。取心脏,常规石蜡切片做免疫组化试验;肝脏用于提纯HSP70。比较处理组鹅心脏HSP70表达的差异,同时对肝脏中HSP70进行分离纯化、鉴定。纯化后的HSP70和人工合成的乙肝病毒前S1多肽相结合形成复合物,以双特异抗体夹心法检测其复合物的形成。【结果】热应激状态下心肌纤维中有广泛的HSP70阳性颗粒,试验1组HSP70表达部位重点在核膜及其周围,阳性细胞率为76.0%,试验2组HSP70表达部位转移到胞膜周围,阳性细胞率为88.4%。通过两套纯化方案纯化蛋白均可得到HSP70纯化物,蛋白纯度分别为85.0%和95.0%,蛋白得率分别为0.115mg·g-1和0.157mg·g-1。一定条件下合成肽与HSP70纯化物形成复合物,双特异性抗体夹心法检测复合物为阳性,复合物效价为1﹕81,表明试验中有复合物的形成。【结论】热应激时HSP70的特异性表达部位,在不同时间有所转移,显示HSP70在细胞保护中可能具有一定的功能。在低压层析条件下可以得到高纯度的HSP70蛋白,相比较而言,分子筛初步分离、ConA琼脂糖层析和ADP琼脂糖层析这一流程的纯化效果更好。在一定条件下,人工合成肽可以与HSP70相结合形成复合物,这将为进一步证明复合物的免疫作用提供试验基础。
- 吴晓平王宝维张旭晖王斌贾晓晖张名爱龙芳羽杨志刚王雷
- 关键词：热应激HSP70提纯
