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双功能酶NagEA及其应用: 本发明涉及生物技术领域，具体涉及双功能酶NagEA及其应用。本发明利用多个酶的组合应用有效的转化乙酰基葡萄糖胺至3’‑唾液酸乳糖，具有简便易控、转化率高、副产物少的特定。融合表达异构酶和裂解酶，降低了添加酶的用量。使用固...; 刘建廖立新何平赵弘邓彭花焦茂青

双功能酶NagEA及其应用: 本发明涉及生物技术领域，具体涉及双功能酶NagEA及其应用。本发明利用多个酶的组合应用有效的转化乙酰基葡萄糖胺至3’‑唾液酸乳糖，具有简便易控、转化率高、副产物少的特定。融合表达异构酶和裂解酶，降低了添加酶的用量。使用固...; 刘建廖立新何平赵弘邓彭花焦茂青

用于降解呕吐毒素的双功能酶及其应用: 本发明提供了一种用于降解呕吐毒素的双功能酶及其应用。首次揭示一种呕吐毒素降解双功能酶，其能够有效地表达且能形成正确的空间蛋白结构，具有良好的生物活性，能将DON转化3‑keto‑DON，并进一步降解为几乎无毒性的3‑ep...; 武爱波郭明珠余佃贞孙姝婷刘美辰

一种基于底物通道效应的双功能酶突变体及应用: 本发明公开了一种基于底物通道效应的双功能酶突变体及应用，属于酶工程技术领域。该突变体在序列为SEQ ID NO.1的黄素腺嘌呤二核苷酸合成酶(FADS)上定点突变204位亮氨酸所得，突变体1(L204V)、突变体2(L2...; 冯延宾徐颖李鸿飞薛松

一种逆转录-聚合双功能酶及其制备方法、应用: 本发明提供一种逆转录‑聚合双功能酶及其制备方法、应用，涉及基因工程技术领域。该逆转录‑聚合双功能酶通过对野生型Taq DNA聚合酶氨基酸序列进行定向基因突变获得，包括将第583位的天冬酰胺突变为丝氨酸、第587位的精氨酸...; 郭金灿吴丽玲高幼冷

一种基于构建双功能酶合成PAPS的方法: 本发明公开了一种基于构建双功能酶合成PAPS的方法，属于生物技术领域。本发明首先对不同来源的ATP硫酸化酶和APS激酶进行优选，利用蛋白质融合技术，将优选所得的ATP硫酸化酶和APS激酶之间融合一段不同的蛋白接头(lin...; 康振王阳胥睿睿堵国成陈坚

一种双功能酶、双功能酶突变体及其应用: 本发明公开了一种双功能酶、双功能酶突变体及其应用。该双功能酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，该双功能酶由CKI酶和CCT酶通过连接肽连接组成，CKI酶的蛋白序列如SEQ ID NO:2所示，CCT酶的蛋白序列如...; 刘珊珊秦永发

一种生成萜类物质的双功能酶基因CaTPS3及其应用: 本发明公开了一种生成萜类物质的双功能酶基因CaTPS3及其应用。本发明首次在姜荷花中克隆的到一种可以催化法呢基焦磷酸和成牻牛儿基焦磷酸生成萜类物质β‑法尼烯和β‑月桂烯，具有双功能酶作用的萜类合成酶基因CaTPS3；该基...; 范燕萍曹紫涵王兰余让才岳跃冲玉云祎李昕悦

黄色瘤胃球菌双功能酶xynD基因在毕赤酵母中的表达及其酶学特征被引量：2: 2023年; [目的]黄色瘤胃球菌xynD基因编码葡聚糖酶和木聚糖酶2个独立的催化结构域。本研究在毕赤酵母中导入xynD基因,表达蛋白并对其酶活性及酶学性质进行研究。[方法]根据毕赤酵母的密码子偏爱性对xynD基因优化(优化后的基因命名为xynDm),构建重组质粒pPIC9K-xynDm,转化至毕赤酵母GS115,通过筛选获得基因工程菌株GS115-pPIC9K-xynDm,经诱导表达获得重组XynDm,再对其酶学性质进行初步研究。[结果]XynDm的木聚糖酶与葡聚糖酶在36和72 h酶活性和比活性均达到最大值,分别为265.32、468.36 IU·mg^(-1)和2260.87、3208.31 IU·mg^(-1)。XynDm的木聚糖酶活性在温度37~40℃、pH值为4.5~6.5时较稳定,最适酶活性温度和pH值分别为37℃和6.0,对4-O-甲基-D-葡萄糖醛酸-D-木聚糖、高黏度阿拉伯木聚糖和桦木木聚糖有良好的水解作用;XynDm的葡聚糖酶活性在温度40~55℃、pH值为5.0~9.0时较稳定,最适酶活性温度和pH值分别为55℃和6.0,对大麦β-葡聚糖有水解作用。XynDm双功能酶活性被Cu^(2+)、Zn^(2+)和Co^(2+)激发,Ag^(+)和SDS使其酶活性几乎丧失。[结论]XynDm木聚糖酶和葡聚糖酶的最适底物分别为4-O-甲基-D-葡萄糖醛酸-D-木聚糖和大麦β-葡聚糖,最适温度分别为37和55℃,最适pH值均为6.0。; 王蕾李文菁杨东林陈勇; 关键词：双功能酶毕赤酵母异源表达

氨基酸转氨/脱羧双功能酶克隆表达、功能鉴定及其机理研究: 2023年; 大肠杆菌来源的L-天冬氨酸转氨酶(L-AspAT)是一种具有严格立体选择性、高效一步合成特性的生物催化剂,研究该酶对于手性胺化合物的生物合成至关重要。该研究将野生大肠杆菌来源的L-天冬氨酸转氨酶基因克隆表达至大肠杆菌工程菌BL21(DE3)中高效表达、分离纯化出该酶,并对该酶催化的反应进行功能鉴定。结果表明该酶是一种具有催化氨基酸转氨和二羧酸底物非氧化脱羧2种催化能力的双功能酶,该研究对其催化的2种反应酶学性质分别进行了研究,同时对酶催化机理进行了探讨。检测反应液中底物和产物的浓度随时间的变化,发现反应体系中先进行转氨反应,待反应液中脱羧底物浓度足够多时才开始进行脱羧反应,脱羧反应同时又促进转氨反应,2种反应相互影响,互相促进。同时将L-AspAT分别与转氨和脱羧的底物小分子对接,结果显示,L-天冬氨酸转氨酶对于谷氨酸和酮戊二酸而言,对接获得的结合位点是不同的,该双功能酶存在2个催化活性中心用来催化不同的反应。实验发现转氨反应的最适温度为35℃,脱羧反应的最适温度为37℃。2种反应的最适pH均为8,5 mmol/L的Cu^(2+)和Mg^(2+)能够促进转氨反应,5 mmol/L的Ni^(2+)能够促进脱羧反应。; 丁小洁刘嘉荔杨静文胡雪芹张洪斌; 关键词：克隆表达双功能酶酶学性质

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