搜索到203篇“ LIPOFECTAMINE“的相关文章
- 阳离子脂质体Lipofectamine 3000对贴壁细胞、悬浮细胞和原代细胞转染效率比较的研究被引量：10
- 2018年
- 为了比较阳离子脂质体Lipofectamine 3000(Lipo3000)在不同细胞类型中的转染效率,课题组分别在贴壁细胞NIH3T3、悬浮细胞EL4和原代细胞CD4+T细胞中,利用Lipo3000将不同浓度的miRNA mimics转染至细胞内,通过流式细胞术检测的方法,比较不同细胞之间以及同一细胞、不同浓度的miRNA mimics组之间转染效率的差异。结果显示,在NIH3T3细胞中,miRNA mimics为100nmol/L时,转染效率最高,可达(41.47±8.10)%;而在EL4和CD4+T细胞中,随着miRNA mimics浓度的增加,转染效率呈上升的趋势,最高分别可达(12.13±1.16)%和(3.80±0.60)%。可见,Lipo3000在贴壁细胞和悬浮细胞的转染效率明显高于原代细胞。
- 吴婷吴江吴婷吴江钮晓音陈广洁
- 关键词：阳离子脂质体转染效率贴壁细胞悬浮细胞原代细胞
- Lipofectamine2000降低HeLa细胞系中DNMT1的表达被引量：1
- 2018年
- DNA甲基化是一种非常重要的表观遗传修饰，在基因的表达调控、基因组的稳定性和发育过程中都发挥着重要的作用［1］。DNA甲基化的维持由DNA甲基化转移酶家族成员DNA甲基转移酶1（DNMT1）催化完成。DNA甲基化水平的改变，通常与DNMT1密切相关［3-4］。而Lipofectamine2000是一种常用的阳离子脂质体转染试剂，广泛地应用于特定基因的表达和敲低对细胞影响的研究。而阳离子脂质体对细胞有一定的毒性作用［5］。转染试剂Lipofectamine2000会影响细胞中DNMT1的表达，Lipofectamine2000对细胞的毒性作用可能是通过DNMT1实现的。因此本研究通对DNMT1在Lipofectamine2000处理Hela和395-9B-1（小鼠胚胎成纤维细胞）细胞不同时间后的表达情况进行检测，并探讨Lipofectamine2000对细胞的毒性作用。
- 赵丹程易尘吴晓明罗瑛贾舒婷
- 关键词：HELA细胞系DNMT1DNA甲基转移酶1小鼠胚胎成纤维细胞阳离子脂质体表观遗传修饰
- 载脂蛋白E修饰的Lipofectamine 2000靶向转染HepG2细胞的实验研究被引量：1
- 2017年
- 目的制备载脂蛋白E(ApoE)修饰的Lipofectamine 2000作为基因运载体,并研究其对肝癌HepG2细胞的靶向性和毒性作用。方法构建ApoE修饰Lipofectamine 2000运载体,通过DNA包裹实验检测脂质体与DNA结合的能力,分析脂质体包裹DNA的结合比。脂质体包裹p Genesil-1质粒转染HepG2细胞,通过荧光显微镜和流式细胞术检测其转染效率。MTT实验研究脂质体对HepG2细胞的毒性作用。采用t检验进行两两数据之间的比较,实验数据以均数±标准差(sx±)表示,P<0.05为差异具有统计学意义。结果成功制备了ApoE修饰的Lipofectamine 2000运载体,DNA包裹实验显示质粒与Lipofectamine 2000和Apo E修饰的Lipofectamine 2000的质量体积比分别为1∶2、1∶2.5时,可完全包裹质粒;Lipofectamine 2000和Apo E修饰的Lipofectamine 2000转染Hep G2细胞的转染效率分别为(20.35±0.50)%、(30.65±0.49)%,ApoE修饰的Lipofectamine2000对Hep G2细胞的转染效率明显高于Lipofectamine 2000,转染效率差异有统计学意义(P=0.001);MTT实验表明Apo E修饰后的Lipofectamine 2000没有增加Lipofectamine 2000对HepG2细胞的毒性作用(P>0.05)。结论通过Apo E对Lipofectamine 2000进行修饰,提高了HepG2细胞对质粒的摄取,成功构建了一种高效的肝癌靶向基因治疗运输载体。
- 张琪孟凡秀袁洋洋刘畅李勇芳赵娜陈虹瑛曹阳于保锋解军李高鹏徐钧
- 关键词：载脂蛋白EHEPG2细胞LIPOFECTAMINE基因治疗
- ApoE修饰的Lipofectamine 2000介导HSV-tk基因对肝癌杀伤作用的研究
- 目的： 1.将ApoE（载脂蛋白E）与阳离子脂质体Lipofectamine2000偶联，构建能特异转染肝（癌）细胞的基因运载体。 2.检测在体外细胞实验中，ApoE-Lipofectamine2000的转染特异性及...
- 张琪
- 关键词：载脂蛋白EHSV-TK基因肝癌靶向杀伤作用
- Lipofectamine2000转染psiRNa-STAT3质粒对乳腺癌细胞作用的影响被引量：1
- 2017年
- 目的研究Lipofectamine2000转染psiRNa-STAT3质粒对4T1细胞侵袭及凋亡的作用。方法 Transwell小室检测psiRNa-STAT3质粒对乳腺癌细胞侵袭能力影响,Western-blot检测Cyclin-D1、Caspase-3蛋白表达水平。结果 Mock组与Scramble组穿膜细胞数比较差异无统计学意义(P>0.05),psiRNa-STAT3组穿膜细胞数与Scramble组比较差异有统计学意义(P<0.05);western-blot检测Scramble组Cyclin-D1、Caspase-3蛋白表达水平与Mock对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。psiRNa-STAT3组Caspase-3及Cyclin-D1蛋白表达量与Scramble组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 psiRNa-STAT3质粒可能通过下调Caspase-3、Cyclin-D1蛋白表达从而抑制乳腺癌细胞侵袭能力,诱导细胞凋亡。
- 刘爽王枭威宋杰莫莉周庆伟
- 关键词：乳腺癌转染
- 优化脂质体对肝癌细胞株HepG2细胞转染效率被引量：4
- 2016年
- 摸索用Lipofectamine 2000(Lipo)转染质粒pEGFP-C1到肝癌细胞HepG2较为合适的转染条件。以HepG2细胞为研究对象,采用脂质体Lipofectamine 2000转染pEGFP-C1质粒,在24孔板先按每孔0.5μg固定pEGFP-C1质粒用量,摸索Lipo在1μL、1.5μL、2μL、2.5μL量上较为合适的用量,确定Lipo用量后,然后固定Lipo为1μL,摸索质粒用量0.5μg、1μg,确定脂质体与质粒的最佳比例。此外,对转染中培养基是否含血清,Lipofectamine 2000与pEGFP-C1质粒比例为1:0.5的基础上,扩大用量,即Lipofectamine 2000 2μL和pEGFP-C1质粒1μg,以及脂质体复合物孵育细胞时间进行优化。最后,采用荧光倒置显微镜观察细胞转染效率和方差分析及秩和检验的统计学方法进行统计分析。结果显示,pEGFP-C1质粒固定为0.5μg时,Lipo用量在1μL及1.5μL用量组转染效率最好,之后随着Lipo用量加大,转染效率下降;固定Lipo用量1μL,pEGFP-C1质粒0.5μg时转染效率最好(p<0.05),比例不变,扩大Lipo和质粒用量,并不增加转染效率。转染后于3 h、6 h、8 h、12 h、24 h换成正常培养基培养,转染6 h后换液较好。此外,研究发现培养基是否含血清不影响转染效率。本研究表明在24孔板板中用Lipofectamine 2000转染HepG2细胞时较为合适的转染条件为每孔1μL Lipofectamine 2000和0.5μg质粒,脂质体与质粒的最佳比例为2:1,血清不影响转染效率,用含血清培养基转染后6 h换液培养。
- 廖维芳李建玲孙芳吴正远林文珍
- 关键词：HEPG2细胞LIPOFECTAMINE转染效率
- 脂质体RNAiMAX介导siRNA转染沉默胰岛素瘤NIT-1细胞血管紧张素Ⅱ1型受体基因的实验研究
- 2016年
- 目的:探讨脂质体RNAiMAX能否介导小干扰RNA(siRNA)转染入胰岛素瘤NIT-1细胞并实现血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)的基因沉默,同时评价其细胞毒性。方法:针对AT1R,设计合成3对siRNA序列,转染NIT-1细胞,荧光显微镜下观察RNAiMAX能否介导荧光分子Cy3标记的siRNA转入细胞内,以及不同siRNA浓度对转染效率的影响;Real-time PCR检测AT1R mRNA的相对表达量,计算基因沉默效率并探讨不同干扰序列及干扰时间对其影响;流式细胞仪检测si-AT1R组、脂质体组和空白组的凋亡率。结果:荧光显微镜观察发现,在一定范围内,5个浓度siRNA转染时,细胞荧光强度均达90%以上,以40nmol/L的荧光强度最高;AT1R的3对序列(si-AT1R-1、si-AT1R-2、si-AT1R-3)转染24h沉默效率分别为86.07%、92.20%、74.67%,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),以si-AT1R-2的沉默效率最高,检测其24h、48h、72h的沉默效率,显示24h的沉默效率最高;各组细胞凋亡率比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论:脂质体RNAiMAX可以介导siRNA转入NIT-1细胞中并实现AT1R基因的沉默,40nmol/L si-AT1R-2转染24h可达到理想的沉默效果;此方法对细胞基本无毒性作用。
- 莫丽雯卢德成李海滨
- 关键词：NIT-1细胞RNA干扰基因沉默
- 利用脂质体法建立转Toll样受体4基因大尾寒羊胎儿成纤维细胞株的研究
- 2016年
- 利用脂质体转染法获得转Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR4)基因的成纤维细胞,将其作为供体细胞,再通过体细胞核移植技术构建重构胚,最终生产出转TLR4基因且性别可控的大尾寒羊。本研究通过原代培养大尾寒羊胎儿皮肤成纤维细胞,并进行SRY基因性别鉴定,利用脂质体转染法转入TLR4基因,然后分别从形态学与分子水平检测TLR4基因的表达,将稳定表达转TLR4的成纤维细胞核移植入绵羊去核卵母细胞中构建重构胚。最终获得5个稳定表达TLR4的阳性细胞克隆,经SRY基因性别鉴定为雌性细胞株,通过实时荧光定量PCR分析,在第4代转染的细胞中TLR4表达量最高,比未转染细胞高出7.4816倍(P<0.01),卵裂的重构胚中有EGFP的表达。试验成功构建出含TLR4基因的重构胚,为今后生产出性别可控的抗病转基因绵羊地方新品种奠定基础。
- 邢书涵李方舟曹玉桃顾美超倪和民刘云海郭勇
- 关键词：大尾寒羊脂质体转染重构胚
- Lipofectamine2000转染pSiRNA-STAT3质粒对脑神经胶质瘤C6细胞的作用被引量：3
- 2016年
- 目的研究Lipofectamine2000下转染p SiRNA-STAT3质粒对脑神经细胞C6的作用。方法取对数生长期的C6细胞随机分为Mack组、Scramble组和p SiRNA-STAT3组采用MTT法检测C6细胞在不同时间段(6、8、10 h)细胞增殖活性;荧光显微镜观察吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)检测细胞凋亡及线粒体膜电位变化。结果 Lipo2000转染p SiRNA-STAT3质粒在8 h时对C6细胞具有明显的抑制作用;镜下观察p SiRNA-STAT3组可见典型的细胞凋亡形态学特征性改变;线粒体膜电位显著降低。Mock组与Scramble组比较无统计学意义(P>0.05);p SiRNA-STAT3组与Scramble组比较差异显著(P<0.05)。结论 Lipo2000转染p SiRNA-STAT3质粒可能通过降低线粒体膜电位,抑制肿瘤细胞增殖并促进细胞凋亡,发挥抗肿瘤生长的作用。
- 周翔宇田琳周悦戴乐刘爽周庆伟
- 关键词：线粒体膜电位
- 建立pEGFP—N1-TGF-β1重组质粒和脂质体介导转染原代培养新生猪AEC-Ⅱ方法
- 2016年
- 目的构建pEGFP—N1—TGF-β1重组质粒，利用脂质体介导方法将重组质粒转染入原代培养的新生猪肺泡Ⅱ型上皮细胞（AEC-Ⅱ）中，为构建实验性干预急性肺损伤的真核表达载体及转染原代培养AEC-Ⅱ提供方法学基础。方法应用含人TGF—β1CDS的质粒，设计PCR引物扩增出其CDS片段，将其与空质粒pEGFP—N1用Xhol和EcoRI双酶切，T4DNA Ligase连接双酶切产物，将连接产物转化入DH5α中，培养16h后抽提质粒，PCR法鉴定和测序证实TGF—β1 CDS序列正确。采用Lipofectamine 2000脂质体介导转染，将新生猪AEC—Ⅱ原代培养48h至细胞融合80％-90％，换为无血清培养液；将质粒DNA（pEGFP—N1-TGF—β1重组质粒）和Lipofectamine 2000加至DMEM培养液中混匀，置于培养箱中培养4—6h，更换为完全培养液；转染24—48h后，荧光显微镜下观察细胞EGFP表达水平。结果PCR法及测序鉴定证实TGF—β1 CDS序列正确，重组质粒构建成功，采用Nanovue超微量分光光度计测浓度质粒浓度为195．5μg/mL，转染后48h在荧光显微镜下可见细胞有绿色荧光表达，证实已将其成功转染入原代培养的AEC—Ⅱ中。结论成功构建了pEGFP-N1—TGF-β1真核表达载体，并首次采用脂质体介导方法将重组质粒转染入原代培养的新生猪AEC—Ⅱ中，为开展其他实验性干预ALI的基因转染并进一步研究其修复作用及转归提供方法学基础。
- 徐艳孙波
- 关键词：原代培养
