国家自然科学基金(30901318)
- 作品数：10 被引量：55H指数：4
- 相关作者：徐林秦安东罗军敏周涯郑静更多>>
- 相关机构：遵义医学院同济大学附属东方医院淮安第四人民医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- MicroRNA-126调控CD4^+Foxp3^+T细胞的外周诱导及功能被引量：2
- 2016年
- 目的探讨Micro RNA-126对CD4^+Foxp3^+Tregs的外周诱导调控及功能的影响。方法分选Balb/c小鼠脾脏CD4^+CD25-初始T细胞,在anti-CD3/CD28的激活下,用TGF-β进行诱导培养,在第3、5天FACS检测CD4^+Foxp3^+Tregs的比例,Real-time PCR检测mi R-126的表达;采用mi R-126抑制剂抑制mi R-126后,FACS检测CD4^+Foxp3^+Tregs的比例,Real-time PCR检测mi R-126的表达;进而采用mi R-126 ASO下调CD4^+Foxp3^+Tregs中mi R-126的表达,Real-time PCR检测IL-10和TGF-β的表达,CFSE标记技术分析CD4^+Foxp3^+Tregs免疫抑制功能。结果 mi R-126在活化的Tregs中的表达高于在活化的CD4^+CD25-T细胞中的表达(P<0.05);TGF-β在体外诱导生成Foxp3^+CD4^+T细胞的比例组间差异具有统计学意义(P<0.05),同时在Tregs的诱导过程中,mi R-126的表达上调(P<0.05);CD4^+CD25-T细胞体外瞬时转染mi R-126抑制剂,与对照组比较,Foxp3^+CD4^+T细胞的比例组间差异具有统计学意义(P<0.05),mi R-126抑制剂能有效下调mi R-126的表达(P<0.05);与对照组相比,mi R-126 ASO转染组Tregs中Foxp3、CTLA-4和GITR的表达均降低(P<0.05),且TGF-β和IL-10的m RNA相对表达均降低(P<0.05);CFSE标记细胞增殖实验显示,mi R-126 ASO Tregs组CD4^+CD25-T细胞增殖与Tcon组、Control Tregs组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论下调mi R-126的表达能显著削弱CD4^+Foxp3^+Tregs的外周诱导和免疫抑制功能。
- 秦安东刘娟罗军敏徐林
- 关键词：调节性T细胞MIR-126FOXP3TGF-Β
- 小鼠CD25分子胞外段的真核表达载体的构建
- 2010年
- 目的构建小鼠CD25分子胞外段的真核表达载体,并在CHO细胞中进行表达。方法从前期构建的原核表达载体PET-32a-CD25胞外段上酶切下CD25胞外段;将其亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1,并进行酶切及测序鉴定;用Lipofectamine 2000将pcDNA3.1-CD25胞外段转染中国仓鼠卵巢细胞(Chinese Hamster Ovary,CHO)进行表达,并用ELISA法对表达产物进行测定。结果酶切、测序验证成功构建真核表达载体pcDNA3.1-CD25e,并在CHO细胞中有效表达CD25e蛋白。结论成功构建小鼠CD25胞外段的真核表达载体,可在CHO细胞中表达,并具有良好的免疫反应性,为后续实验提供了前期基础。
- 徐林张凤秦安东周涯姚新生罗军敏
- 关键词：真核表达T细胞疫苗
- 微小RNA-7对人肺癌95D细胞体外增殖的作用被引量：20
- 2010年
- 目的:探讨微小RNA-7(microRNA-7,miR-7)对人肺癌95D细胞体外增殖的作用。方法:采用体外转染法将miR-7瞬时转染95D细胞后,应用Real-time PCR特异探针法检测95D细胞中miR-7的表达情况,应用MTT法检测95D细胞的生长情况,FCM法分析细胞周期变化,并用Western印迹法检测95D细胞中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)表达的变化。结果:与对照组相比,miR-7转染组95D细胞的miR-7表达水平显著增加(P<0.05),细胞生长明显受抑(P<0.05),且主要阻滞在G1期(P<0.05),而EGFR表达显著下调。结论:miR-7可以抑制人肺癌95D细胞的体外增殖,可能作为后续肺癌生物治疗的新靶点。
- 徐林任涛周涯秦安东郑静
- 关键词：人肺癌体外增殖WESTERN印迹法体外转染瞬时转染EGFR表达
- CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T细胞研究的新进展被引量：17
- 2010年
- CD4+CD25+调节性T细胞作为重要的T细胞亚群,其与自身免疫性疾病、感染性疾病、移植排斥反应以及恶性肿瘤等的发生、发展过程密切相关。本文就近年来CD4+CD25+调节性T细胞的胸腺内发育、外周诱导、作用机制及其与疾病的关系等方面研究的新进展做一综述。
- 李颖徐林
- 关键词：CD4^+CD25^+调节性T细胞FOXP3TH17细胞
- MAPK4敲除对DSS诱导小鼠急性溃疡性结肠炎模型的影响
- 2021年
- 目的:观察MAPK4敲除对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠急性溃疡性结肠炎模型的影响并探讨其意义。方法:用2%的DSS溶液喂食野生型(WT)小鼠,常规建立小鼠急性溃疡性结肠炎模型,Western blot检测肠组织MAPK4的表达情况;分别建立野生型(WT)和MAPK4基因敲除(KO)小鼠的急性溃疡性结肠炎模型,并观察小鼠体重变化和结肠长度变化;HE染色观察结肠组织病理学变化情况;阿利新蓝染色检测结肠组织酸性黏蛋白分泌情况;免疫荧光法观察结肠组织中性粒细胞浸润情况;Real-time PCR及ELISA实验检测结肠组织中炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α表达的水平变化。结果:与正常WT小鼠相比,KO模型小鼠体重下降明显减轻,结肠长度明显较长,结肠组织中MAPK4表达增加;HE染色显示KO模型小鼠结肠黏膜下层水肿较轻,黏膜下炎症细胞浸润较少;阿利新蓝染色结果显示,KO模型小鼠结肠组织中酸性黏蛋白分泌较多;免疫荧光结果显示,KO模型小鼠结肠组织中性粒细胞浸润明显减少;Real-time PCR结果显示,KO模型小鼠结肠组织中IL-1β、TNF-α和IL-6的mRNA水平显著降低;ELISA结果显示,KO模型小鼠结肠组织中IL-1β、TNF-α和IL-6的蛋白水平显著降低。结论:MAPK4敲除可减轻小鼠溃疡性结肠炎的病理变化,表明其在急性溃疡性结肠炎发生发展中具有重要作用。
- 唐琳冒灵官蔹陈静周涯陈超郭萌萌赵娟娟张继东徐林(指导)
- 关键词：DSS急性溃疡性结肠炎炎症细胞因子
- DHHCs家族成员在小鼠CD4^+CD25^-T细胞和CD4^+CD25^+调节性T细胞活化中的表达及意义被引量：1
- 2012年
- 目的观察DHHCs家族成员在小鼠CD4+CD25-T细胞和CD4+CD25+调节性T细胞活化前后的表达情况并探讨其意义。方法磁珠法从小鼠脾脏分选CD4+CD25-T细胞和CD4+CD25+调节性T细胞,流式细胞术检测纯度后,体外用anti-CD3e/CD28抗体分别刺激其活化。TRIzol法提取细胞总RNA,RT-PCR逆转录成cD-NA,分别用24个DHHCs家族成员特异性引物进行PCR反应,对产物进行琼脂糖凝胶电泳分析。结果活化前CD4+CD25-T细胞高表达DHHC5、DHHC14和DHHC18,活化后其上调表达DHHC2、DHHC4、DHHC6、DHHC8、DHHC9、DHHC12、DHHC15和DHHC16;活化前CD4+CD25+调节性T细胞仅表达DHHC9,活化后其上调表达DH-HC18,而下调DHHC9的表达。结论 DHHCs家族成员在CD4+CD25-T细胞和CD4+CD25+调节性T细胞中表达存在差异,活化后表达谱发生显著变化,提示DHHCs家族成员的表达与CD4+T细胞的活化有关,可能参与CD4+T细胞不同亚群活化的调控。
- 秦安东李颖罗军敏李永菊徐林
- 关键词：细胞活化
- MicroRNAs与T细胞关系的研究进展被引量：5
- 2012年
- MicroRNAs(miRNAs)是非编码蛋白质的单链小分子RNA,其主要在转录后水平通过降解靶mRNA或抑制蛋白质翻译来调控目的基因的表达,参与细胞的发育、分化、信号转导及肿瘤的发生、发展等多种重要的生物学进程。近年来的研究表明,miRNAs对机体免疫细胞具有多种调控功能。本文主要就近年来与T细胞的胸腺发育、分化及功能相关的miRNAs研究进展作一综述。
- 秦安东徐林
- 关键词：MICRORNAST细胞基因调控
- 蛋白质的棕榈酰化修饰被引量：7
- 2012年
- 棕榈酰化修饰是蛋白质翻译后脂质修饰的重要形式,是调控蛋白质的转运、稳定、定位和功能的重要机制,同时,棕榈酰化修饰还参与多种细胞生物学进程,与许多疾病的发生发展密切相关。本文主要就蛋白质棕榈酰化及其修饰酶与蛋白质功能、相关疾病的关系做一综述。
- 秦安东徐林
- 过表达miRNA-7对乳腺癌4T1细胞体外生长的影响被引量：2
- 2017年
- 目的探讨过表达miRNA-7(miR-7)对乳腺癌4T1细胞体外生长的影响。方法将真核表达载体pcDNA3.1-miR-7(p-miR-7)体外瞬时转染乳腺癌4T1细胞后,Real-time PCR探针法检测细胞中miR-7的表达;CCK-8法及克隆形成实验观察细胞的增殖和克隆形成情况;划痕法观察细胞体外迁移能力的变化;Western blot检测细胞Akt与p-Akt蛋白表达的变化。结果与对照组比较,p-miR-7载体转染组细胞miR-7的表达水平明显上调,差异有统计学意义(P<0.05);细胞增殖和克隆形成能力明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);划痕实验进一步显示p-miR-7载体转染组细胞的体外迁移能力显著削弱,差异有统计学意义(P<0.05);Western blot检测结果显示细胞p-Akt蛋白表达显著下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论过表达miR-7能明显抑制乳腺癌细胞的体外生长能力,可能与Akt信号通路传递改变有关。
- 田丹陶弋婧赵娟娟郭萌萌陈超罗军敏徐林
- 关键词：乳腺癌增殖蛋白激酶B
- pG-miR-7-Sponge转基因小鼠载体的构建及鉴定被引量：4
- 2014年
- 目的构建pG-miR-7-Sponge转基因小鼠的真核载体并检测其表达活性,为转基因小鼠的建立提供前期实验基础。方法利用miRNA sponge(海绵体)技术原理,合成miR-7-Sponge序列,酶切连接入真核表达载体eGFP-C2并转化Stbl3感受态细胞,克隆PCR、酶切和测序鉴定重组载体eGFP-C2-miR-7-Sponge(简称pG-miR-7-Sp);将重组载体pG-miR-7-Sp体外瞬时转染人肺癌95D细胞,荧光显微镜下观察细胞的GFP表达情况;Real-Time PCR检测细胞中miRNA-7的表达;MTT法检测细胞的增殖变化。结果经克隆PCR、酶切鉴定及测序分析,成功构建了真核表达载体pGmiR-7-Sp;pG-miR-7-Sp瞬时转染95D细胞48 h后,与对照组细胞相比,miR-7表达水平明显降低(P<0.05);同时细胞的生长明显加快(P<0.05)。结论成功构建pG-miR-7-Sp真核表达载体。
- 李永菊周涯陈超朱顺飞胡燕秦娜琳郑静徐林
- 关键词：海绵体
