国家自然科学基金(30801184)
- 作品数：10 被引量：37H指数：4
- 相关作者：陈镇洲郭阳陈健谭盛陈瑞清更多>>
- 相关机构：南方医科大学北京军区总医院暨南大学附属第一医院更多>>
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- 左旋氨氯地平对成年大鼠神经干细胞氧／糖剥夺损伤的保护作用被引量：2
- 2012年
- 目的研究左旋氨氯地平对成年大鼠神经干细胞氧／糖剥夺（OGD）损伤后细胞生长活力、增殖和凋亡情况的影响．探讨左旋氨氯地平对OGD后成年大鼠神经干细胞的保护作用。方法制备成年大鼠海马神经干细胞0GD模型，按干预的左旋氨氯地平浓度分为4组：0μmol／L组（即无干预对照组）、0．5μmol／L组、1．0μmol／L组、5．0μmol／L组。CCK-8法检测不同浓度左旋氨氯地平对0GD后成年大鼠神经干细胞生长活力的影响：Edu荧光染色法观察不同浓度左旋氨氯地平对0GD后成年大鼠神经干细胞增殖的影响：AnnexinV．FITC／PI双染流式细胞仪检测0GD后成年大鼠神经干细胞的凋亡情况。结果OGD6h后成功制备成年大鼠海马神经干细胞0GD模型。与无干预对照组比较，不同浓度左旋氨氯地平干预后成年大鼠海马神经干细胞的生长活力均明显增加，差异有统计学意义（P〈0．05）；5．0μmol／L左旋氨氯地平组OGD后神经干细胞增殖率明显增加，差异有统计学意义（P〈0．05）；1．0μmol／L和5．0μmol／L左旋氨氯地平组0GD后神经干细胞中凋亡细胞比例明显减少，差异有统计学意义俨〈0．05）。结论成年大鼠神经干细胞OGD模型中，左旋氨氯地平具有一定的抗0GD损伤的保护作用。
- 郭阳张培东谭盛陈健陈瑞清徐如祥陈镇洲汤浩
- 关键词：左旋氨氯地平神经干细胞
- 骨髓基质细胞及血管内皮祖细胞移植对局灶性脑缺血大鼠神经功能恢复的影响被引量：4
- 2010年
- 目的观察经静脉移植骨髓基质细胞（BMSCs）及血管内皮祖细胞（EPCs）后，缺血性脑损伤大鼠神经系统功能恢复情况。方法40只健康成年Wistar大鼠按随机数字表法分为模型组、移植BMSCs组、移植EPCs组、移植BMSCs／EPCs组，每组10只。线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）模型，造模后24h取1mLBMSCs、EPCs、BMSCs／EPCs细胞悬液（3×10^6个／mE）分别经尾静脉注射移植入后3组大鼠，模型组大鼠注射等量生理盐水。移植前、移植后1、7、14、28d，采用旋转试验、躯体感觉试验、神经系统功能评分mSS）评估各组大鼠神经功能的恢复情况。移植后28d，免疫荧光染色检测各组大鼠缺血脑组织的微血管密度（MVD）。结果移植后第7天，旋转试验显示移植BMSCs／EPCs组大鼠旋转时间长于其他3组，躯体感觉试验和NSS评分分别显示移植BMSCs／EPCs组大鼠移物时间和NSS评分低于其他3组，差异有统计学意义（P〈0．05）；移植后28d，免疫荧光染色检测结果显示缺血脑组织MVD明显高于其他3组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论静脉BMSCs／EPCs联合移植可增强缺血性脑损伤功能的恢复。
- 何旭英陈镇洲段传志寇盛斌王双全李明徐如祥
- 关键词：大脑中动脉闭塞骨髓基质细胞血管内皮祖细胞细胞移植
- 构建人端粒酶催化亚单位基因慢病毒表达载体转染人骨髓基质细胞
- 2012年
- 背景:骨髓基质细胞不表达端粒酶,因而在体外传代扩增过程中端粒长度逐渐缩短,导致细胞衰老,这是限制其用于细胞治疗应用的一个重要因素。目的:构建人端粒酶催化亚单位基因慢病毒表达载体,探讨以慢病毒介导的人端粒酶催化亚单位基因修饰人骨髓基质细胞的可行性。方法:以pReceiver-M02-hTERT质粒为模板PCR扩增获得目的基因。用BP重组系统将目的片段重组到载体pDONR221上。然后使用LR重组系统将目的序列重组到载体pLenti6.3/V5-DEST上。将重组载体与包装质粒充分混合,利用脂质体共转染293FT细胞获得慢病毒颗粒。结果与结论:成功构建人端粒酶催化亚单位慢病毒表达载体,病毒的平均物理滴度为1.07×1012LP/L。以之转染人骨髓基质细胞,目的基因表达水平有显著提升,细胞正确表达人端粒酶反转录酶蛋白。说明以慢病毒介导的人端粒酶催化亚单位基因修饰人骨髓基质细胞能强化细胞表达人端粒酶催化亚单位。
- 陈镇洲
- 关键词：人端粒酶催化亚单位人骨髓基质细胞慢病毒转染
- 大鼠急性脑缺血后CD4^+CD25^+调节性T细胞、Foxp3表达及其意义被引量：15
- 2012年
- 目的动态观察大鼠急性脑缺血后不同时期外周血中CD4+CD25+调节性T细胞和脑组织中Foxp3的表达,探讨其在急性缺血性卒中病理生理演变过程中的作用。方法 48只Wistar大鼠按随机数字表法分为缺血组和假手术组。参考改良的Zea-Longer插线方法将缺血组大鼠制作成右侧大脑中动脉线栓脑缺血动物模型。采用流式细胞术和免疫组化染色检测造模后1、3、7、14 d时大鼠外周血中CD4+CD25+调节性T细胞表达和脑组织中Foxp3表达,同时采用改良NSS神经功能评分观察大鼠行为学变化。结果缺血组和假手术组大鼠神经功能缺损评分在模型制备后逐渐下降(P<0.01)。流式细胞术显示脑缺血后1、3 d时缺血组大鼠外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的表达与假手术组比较差异无统计学意义(P>0.05),7、14 d时表达明显高于假手术组(P<0.05),且与大鼠的神经功能评分呈负相关(r=-0.68,P=0.01)。免疫组化显示脑缺血后1 d时缺血组大鼠脑组织中即可观察到Foxp3表达,且主要集中在缺血灶区域,在未缺血侧也可观察到Foxp3表达,但表达量较少,而假手术组脑组织中未见Foxp3表达。结论 CD4+CD25+调节性T细胞参与了大鼠急性脑缺血后炎症免疫反应的发生发展过程,且在脑缺血后1 d时便开始参与脑缺血性损伤的免疫调节,这种免疫调节对脑细胞有着保护作用。
- 陈瑞清谭盛陈健郭阳李粲陈镇洲
- 关键词：脑缺血CD4+CD25+调节性T细胞FOXP3
- 缺氧条件下葡萄糖对成年神经干细胞体外增殖影响的研究
- 2011年
- 目的探讨不同浓度的葡萄糖对氧/糖剥夺条件下体外成年大鼠神经干细胞活力和增殖的影响。方法无血清培养成年Fisher 344大鼠海马神经干细胞系,用Nestin和DAPI免疫荧光双染以确认其生物学特性。将三气培养箱氧气浓度调至1%以制备缺氧环境,将培养基换为无糖Earle’s平衡盐溶液缺氧培养6 h后更换为含有不同浓度葡萄糖(7.5、17.5、27.75、41.75、83.75 mmol/L)的培养基恢复正常条件继续培养后,检测神经干细胞的活力和形态学改变。同时设置常氧常糖为正常对照组和甘露醇为渗透压对照组。结果 CCK-8检测显示,常糖常氧正常对照组细胞吸光度值较缺氧模型组高,7.5 mmol/l糖培养组以及41.75 mmol/L和83.75 mmol/L糖培养组吸光度值均较正常糖缺氧组(17.5 mmol/L)低,差异有统计学意义(P<0.05);而27.75 mmol/L糖培养组吸光度值较正常糖缺氧组低,差异无统计学意义,且排除了高糖培养基引起的渗透压力的影响。各组细胞形态学改变与CCK-8检测结果一致。结论缺氧后轻度升高的糖对体外缺氧成年神经干细胞的损伤可能有保护作用,而较低浓度和更高浓度的葡萄糖则加重其损伤。
- 谭盛陈健郭阳陈瑞清李粲陈镇洲
- 关键词：神经干细胞葡萄糖
- 慢病毒介导增强型绿色荧光蛋白基因修饰人骨髓基质细胞被引量：1
- 2011年
- 背景:原代细胞的转染效率低下一直是制约其发展的主要因素之一,慢病毒转染以其独特的优势成为各种干细胞基因修饰良好的转染方法。目的:验证慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白基因修饰人骨髓基质细胞的可行性。方法:将携带增强型绿色荧光蛋白基因的慢病毒在含血清或无血清条件下按不同的MOI值分别转染人骨髓基质细胞,长期观察荧光蛋白表达情况。将经修饰的细胞通过立体定向移植入大鼠纹状体内,观察移植细胞的存活及目的基因的表达情况。结果与结论:基因转染48h后,可见人骨髓基质细胞成功表达绿色荧光蛋白,无血清条件下的转染效率高于含血清条件下的转染效率,转染成功的细胞在体外持续培养2个月以上未见明显的荧光消减。转染后的细胞可在大鼠纹状体存活并持续表达绿色荧光蛋白2个月以上。提示慢病毒是一种高效的转染人骨髓基质细胞的载体,慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白基因转染可以作为人骨髓基质细胞的示踪标志用于体内移植研究。
- 汤浩项永生秦玲莎姜晓丹徐如祥陈镇洲
- 关键词：增强型绿色荧光蛋白人骨髓基质细胞慢病毒转染
- 脑肿瘤干细胞的发育相关信号通路被引量：2
- 2015年
- 脑胶质瘤干细胞存在于微环境中,微环境中包含有多种的细胞信号调控分子,胶质瘤的生物学行为正是由细胞外微环境作用于细胞内信号所决定的。脑胶质瘤干细胞信号通路的研究已成为脑胶质瘤研究的热点。本文将重点综述脑胶质瘤干细胞中几条重要的与神经干细胞相关的信号通路,为更全面的认识脑胶质瘤细胞信号、以及开拓新的脑胶质瘤治疗方法提供基础证据。
- 郭阳徐如祥
- 关键词：脑肿瘤干细胞信号通路
- 大鼠成年海马神经干细胞体外氧糖剥夺／复氧模型的建立被引量：6
- 2011年
- 目的探讨一种简便、稳定、可重复的大鼠成年神经干细胞体外氧糖剥夺／复氧模型的制备方法。方法以来自于成年Fisher344大鼠的海马神经干细胞系为研究对象，以无血清培养基培养并传代．并用nestin和DAPI免疫荧光双染确认其生物学特性。将三气培养箱氧气浓度调至1％以制备缺氧环境，将培养基换为不含葡萄糖的Earle’s平衡盐溶液，分别缺氧缺糖2h、4h、6h、8h、10h后取出细胞，恢复正常条件继续培养24h后倒置显微镜下观察细胞形态学变化，CCK-8比色法检测细胞存活率，流式细胞术检测细胞凋亡率。同时设置常氧常糖的正常对照组。结果与正常对照组相比．缺氧缺糖2h组细胞吸光度值明显升高，细胞存活率有一定的增长，但差异无统计学意义（P〉0．05）。随着缺氧缺糖时间延长，神经干细胞形态学损伤逐渐加重，细胞吸光度值逐渐下降．缺氧缺糖6h后与正常对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）；缺氧缺糖6h起细胞存活率均较正常对照组明显下降，比较差异有统计学意义伊〈0．05）；神经干细胞凋亡率逐渐增高，且均明显高于正常对照组，差异有统计学意义（P〈0．05），其中缺氧缺糖6h时细胞的凋亡率已超过50％。结论利用三气培养箱物理缺氧方法可成功建立一种简便、有效的神经干细胞体外氧糖剥夺／复氧模型。
- 谭盛陈健郭阳陈瑞清李粲陈镇洲
- 关键词：神经干细胞
- CatWalk步态分析系统分析大鼠大脑中动脉阻塞模型的行为学特征被引量：7
- 2011年
- 目的探讨以CatWalk步态分析系统对大鼠暂时性大脑中动脉阻塞（MCAO）模型进行行为学评价的可行性。方法30只SD雄性大鼠按随机数字表法分为MCAO模型组和对照组，其中模型组以线栓法制作成暂时性MCAO模型。分别于模型制作后第1、3、7、14、28天应用传统的18分制mNSS评分以及CatWalk步态分析系统对2组大鼠进行行为学特征分析。结果CatWalk结果显示MCAO模型组大鼠的四肢压强、接触面积和运行速度均比对照组大鼠减小减慢；存协调性方面，模型组大鼠造模后第3天时同为后侧的左后肢→右后肢的时间较对照组明显缩短，且其同为左侧的左前肢→左后肢的时间亦较对照组明显缩短，这一变化在第28天时仍然存在：在造模后第3天模型组出现了在对照组中并未见到的Ra型（1．5％）和Rb型f2-3％）步序；但步渊、站立时间、抬爪时间和规律指数等参数在2组间差别不明显。结论CatWalk步态分析系统在压强、速度、接触面积、步态以及协调性等方面可反映脑缺血造成的损伤及其随时间变化的过程，可用于动物模型的多种行为学特征的综合分析。
- 汤浩项永生郭阳蔡颖谦姜晓丹陈镇洲徐如祥
- 关键词：脑缺血行为学评价
- 帕金森病人危重疾病性多发性神经病1例临床分析
- 2011年
- 目的分析1例帕金森病人发生危重疾病性多发性神经病的过程、临床特点及早期诊断方法。方法对1例帕金森病危重疾病性多发神经病进行临床资料分析及相关文献回顾。结果该病人败血症过程不典型、发展快,早期以内环境紊乱为表现,很快引起呼吸肌无力,需用呼吸机辅助呼吸,但肢体活动尚好。在有效抗生素应用、内环境紊乱纠正后,仍然难以撒离呼吸机,行肌酶检查和脑脊液检查正常,肌电图发现四肢感觉与运动神经传导速度下降及波幅降低,提示危重疾病性多发神经病可能。结论帕金森病人发生败血症后,出现脱机困难和肢体无力时,应重视神经系统检查,及时观察病情变化和完善肌电图检查,考虑危重疾病性多发性神经病可能。避免危险因素,预防脓毒血症的发生可能是预防本病发生的有效措施。
- 谭盛陈健陈瑞清刘卉郭阳李粲张马辉陈镇洲
- 关键词：帕金森病病例报道
