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重庆市自然科学基金(2007BB5069)
作品数:
1
被引量:2
H指数:1
相关作者:
胡川闽
李鹏
陈安
李淑慧
臧家涛
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第三军医大学
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1篇
2008
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应用DNA shuffling及T7噬菌体展示技术定向进化并筛选鉴定sCD74突变体
被引量:2
2008年
目的利用DNA shuffling技术,结合T7噬菌体表面展示技术,定向进化MIF受体sCD74,以获得高亲和力突变体基因。方法定点突变的牛、小鼠、人CD74胞外同源区基因以DNaseⅠ消化,回收25—50bp片段进行DNA shuffling;将500bp shuffling产物经限制性酶切后与T7噬菌体DNA连接,与T7 package extracts组建噬菌体文库;采用竞争淘洗方法进行5轮筛选,富集得到高亲和力结合MIF的噬菌体;挑取20株噬菌体单克隆进行基因克隆并测序,对测序结果进行生物信息学分析,同时以竞争ELISA初步鉴定进化效果。结果20株噬菌体单克隆具有相同的sCD74突变基因,为相同克隆,将此克隆命名为sHCD74m,其基因命名为sHCD74mD;竞争性ELISA分析显示其MIF结合力提高。结论得到了与MIF高亲和力结合的sCD74突变体基因sHCD74mD。
臧家涛
李淑慧
李鹏
陈安
胡川闽
关键词:
SHUFFLING
巨噬细胞移动抑制因子
CD74
噬菌体展示技术
MHC
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