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国家自然科学基金(39770388): 作品数：14 被引量：58H指数：6; 相关作者：黄威权蒲若蕾陈蕾孙绪德姚兵更多>>; 相关机构：第四军医大学清华大学第四军医大学唐都医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

大鼠颌下腺GnRH受体基因的体外扩增及基因序列分析被引量：4: 2001年; 目的　研究大鼠颌下腺 Gn RH受体基因的存在及其基因序列。　方法　从 SD大鼠颌下腺提取总RNA,用 RT- PCR法扩增 Gn RH受体基因 ,利用双脱氧链终止法对扩增产物进行序列测定。　结果　从 SD大鼠颌下腺扩增出 Gn RH受体基因的特异性条带 ,经序列分析 ,扩增产物的基因序列与文献报道大鼠脑垂体的完全一致。结论　大鼠颌下腺有 Gn RH受体基因的表达 ,能合成 Gn RH受体 ,是 Gn RH的靶器官 ,颌下腺产生的 Gn RH可作用于颌下腺的靶细胞 ,参与颌下腺生理功能的调节。; 姚兵黄威权张荣庆王雷; 关键词：RT-PCR GNRH受体颌下腺

大鼠胃壁细胞GnRH受体的定位及GnRH类似物对壁细胞内钙的影响被引量：6: 2003年; 目的　观察促性腺激素释放激素 (gonadotropin releasinghormone,GnRH)受体在培养的大鼠胃粘膜壁细胞中的定位 ,并探讨GnRH类似物阿拉瑞林 (alarelin)对壁细胞内游离钙动员的机制。　方法　采用免疫组织化学和原位杂交技术 ;应用Ca2 + 指示剂Fluo 3 AM作为细胞内钙离子的荧光探针 ,对负载培养的胃壁细胞 ,应用激光共聚焦显微镜技术检测单个细胞内钙荧光强度的变化。　结果　大鼠胃壁细胞呈GnRH受体免疫反应阳性 ,阳性物质位于细胞质 ,细胞核为阴性 ;同样壁细胞内可检测到GnRH受体mRNA杂交信号 ,阳性物质位于细胞质 ,细胞核为阴性 ;胞内Ca2 + 浓度变化为 :1 在Hank液中 ,GnRH类似物浓度为 10 - 8、10 - 7、10 - 6 mol L时 ,胃壁细胞内Ca2 + 浓度逐渐升高 ,其峰高 (峰值减去静息值 )分别为 7 1± 1 4、12 1± 1 7、16 8± 2 2。其达峰时间也逐渐增快 ,分别为 34 2± 6 4s、18 9± 1 2s、10 4± 2 3s。相邻两组间其峰高及达峰时间均存在显著性差异 (P <0 0 5 ) ,且呈明显剂量依赖性。 2 在D Hank液 (去除外钙 )中 ,阿拉瑞林可轻度短暂升高胞内Ca2 + ;用内罗啶孵育后再加入阿拉瑞林也可轻度短暂升高胞内Ca2 + ,二者无显著性差异。 3 当用拉西地平孵育后再加入阿拉瑞林 ,可明显抑制胞内Ca2 + 的增加?; 陈蕾黄威权孙绪德吕宝真蒲若蕾; 关键词：GNRH类似物 GNRH受体胃壁细胞原位杂交激光共聚焦显微镜

大鼠胰腺促性腺激素释放激素受体mRNA的原位杂交被引量：11: 2001年; 目的　研究大鼠胰腺促性腺激素释放激素 (Gn RH)受体 m RNA的存在及细胞定位 .方法　采用原位杂交组织化学法 .结果　胰脏的外分泌部腺上皮细胞、胰导管上皮细胞及内分泌部胰岛细胞内均可检测到较强的 Gn RH受体m RNA杂交信号 .杂交阳性信号物质均分布在胞质内 ,胞核呈阴性 .结论　大鼠胰脏内、外分泌部均能合成 Gn RH受体 .Gn RH也是一种消化激素 ,它由胰脏自身合成 ,又作用于胰脏 ,可能参与胰脏内。; 蒲若蕾黄威权姬秋和姚兵孙岚张荣庆王雷; 关键词：促性腺素释放激素胰腺受体MRNA 原位杂交

胃腔内促性腺激素释放激素类似物对大鼠消化道胃泌素细胞功能的影响被引量：9: 2004年; 目的　研究胃腔内促性腺激素释放激素 (GnRH)类似物对大鼠消化道胃泌素免疫阳性细胞及血液、胃液中胃泌素含量的影响。　方法　应用免疫组织化学和酶联免疫分析 (ELISA)方法分别检测大鼠消化道内胃泌素阳性细胞的密度及血液、胃液中胃泌素的含量。　结果　胃腔注射GnRH类似物后 ,胃壁内单位面积胃泌素阳性细胞数为 19 6 0± 3 6 3,与对照组 10 30± 2 4 1相比 (P <0 0 1) ;而十二指肠阳性细胞数为 18 0 0± 2 31,与对照组 9 0 0± 2 0 5相比 (P <0 0 1)。血液中胃泌素ELISA检测的A值为 0 5 5± 0 0 83,与对照组 0 2 3± 0 0 39相比 (P <0 0 1) ;胃液中为 0 5 2± 0 0 83,与对照组 0 30± 0 0 31相比 (P <0 0 1)。　结论　外分泌的GnRH对大鼠消化道中胃泌素的合成与分泌均起显著的促进作用。; 刘晓宁朱晓东赵洁黄威权; 关键词：促性腺激素释放激素类似物细胞功能胃泌素

促性腺激素释放激素类似物对大鼠胃肠道5-羟色胺分泌的影响被引量：2: 2003年; 目的　研究GnRH对胃肠道内 5 HT分泌的影响。　方法　胃腔直接注射GnRH类似物阿拉瑞林(AlarelinGnRH A)以模拟外分泌产生的GnRH ,并以免疫组织化学、高压液相色谱电化学检测 (HPLC ECD)的方法对阿拉瑞林刺激后胃及十二指肠内 5 HT免疫反应细胞、血清中 5 HT含量进行检测。　结果　胃腔内注射GnRH A后 ,大鼠胃及十二指肠内 5 HT免疫反应阳性细胞密度显著增多 ,但血清中 5 HT含量显著减少。　结论　外分泌的GnRH对于 5 HT的释放起明显抑制作用 ,但对 5 HT的合成可能不产生影响。; 朱晓东王玉珍刘晓宁黄威权; 关键词：促性腺激素释放激素胃肠道 5-羟色胺分泌免疫组织化学

GnRH类似物对培养的大鼠胃平滑肌细胞蛋白激酶C活性的影响: 2002年; 研究GnRH类似物阿拉瑞林 (Alarelin)对大鼠胃平滑肌细胞蛋白酶C (PKC)活性的影响 ,采用放射性同位素法测定PKC的活性 ,发现 :(1)阿拉瑞林可使培养的大鼠胃平滑肌细胞中PKC活性明显升高 ,3min时达高峰 ,10min后作用明显降低 ,且成剂量依赖性。当阿拉瑞林为 10 -5mol/L时 ,PKC活性最高 ,10 -9mol/L时其对PCK的作用基本消失 ;(2 )当用佛波醇酯 (phorbol 12myristate 13 acetate ,PMA)短期作用激活PKC后 ,再加入阿拉瑞林 ,仍可使PKC活性略有升高 ,但无显著性差异 ;当用PMA长期持续作用耗竭PKC后 ,再加入阿拉瑞林作用 3min ,它不能激活PKC ,与单纯的阿拉瑞林作用 3min组相比差异显著 ;(3)在无外Ca2 +时 ,阿拉瑞林也可使PKC活性升高 ,但不如单独用阿拉瑞林作用 3min组的高。因此PKC活性的增高 ,并不完全依赖细胞外Ca2 + ,它可以动员胞内Ca2 + 的释放激活PKC ,说明GnRH类似物可使胃平滑肌细胞中PKC活性增加 ,PKC参与阿拉瑞林对胃平滑肌细胞调控的信号转导过程。; 陈蕾李东红姚元庆刘丽宏黄威权; 关键词：GNRH类似物胃平滑肌细胞蛋白激酶C活性 PKC

培养的大鼠胃壁细胞促性腺激素释放激素的定位、克隆及序列分析被引量：3: 2003年; 目的　研究培养的大鼠胃壁细胞GnRH的定位及其基因序列。　方法　应用免疫组织化学和原位杂交的方法进行定位研究 ;从壁细胞中提取总RNA ,应用RT PCR的方法扩增GnRH基因 ,并对产物进行纯化回收 ,连接入pUC19载体中扩增 ,经PCR和酶切鉴定后进行序列分析。　结果　大鼠胃壁细胞呈GnRH免疫反应性阳性物质位于细胞质 ,细胞核为阴性 ;壁细胞内亦可检测到GnRHmRNA杂交信号 ,信号物质位于细胞质 ,细胞核为阴性 ;同样从大鼠胃壁细胞中扩增出GnRH基因的特异性条带 ,经序列分析发现 ,扩增产物的基因序列与文献报道的大鼠下丘脑的完全一致。　结论　大鼠胃粘膜壁细胞能表达GnRH基因 ,其序列和下丘脑的完全一致 ,并能自身合成GnRH ,说明GnRH可能以自分泌或以旁分泌的方式参与胃壁细胞功能的调节。; 陈蕾孙绪德赵晶杨安钢黄威权; 关键词：细胞培养胃壁细胞促性腺激素释放激素基因定位基因序列

GnRH类似物阿拉瑞林对培养的胃平滑肌细胞内钙离子浓度变化的影响被引量：3: 2000年; 目的研究ＧｎＲＨ类似物（阿拉瑞林）诱导胃平滑肌细胞内钙动员的机制。方法采用共聚焦技术检测细胞内钙荧光强度的变化。结果（１）在Ｈａｎｋｓ液中，ＧｎＲＨ类似物浓度为１０７、１０６、１０－５ｍｏｌ－Ｌ．－１时，胃平滑肌细胞内Ｃａ２＋逐渐升高，其峰高（ｐｅａｋ－ｒｅｓｔｉｎｇ）分别为６．００ ± ０．５０、９．２３± ０．６２、１８．９７± ２．４２，其达峰时间分别为４２．３７± １．６５、５４．９３± ３．２２、１０５．６３ ± ３．９２ｓ，井呈时间和剂量依赖性；（２）当阿拉瑞林浓度为１０－４ｍｏｌ·Ｌ－１时，胞内Ｃａ２＋略有升高，与１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１相比（Ｐ＜０．０１）；（３）在有外钙和无外钙时，阿拉瑞林对胞内Ｃａ２＋的升高亦有显著差异（Ｐ＜０．０１）；（４）在无外钙并加入内罗陡孵育后，ＧｎＲＨ引起的胞内Ｃａ２＋轻度升高，但与Ｄ－Ｈａｎｋｓ组相比无显著性差异（Ｐ＜０．０５）；（５）在Ｈａｎｋｓ液中，用拉西地平孵育后，再加入阿拉瑞林，其胞内Ｃａ２＋仍可升高，井有显著差异（Ｐ＜０．０１）。结论Ｃａ２＋参与了ＧｎＲＨ类似物阿拉瑞林对胃平滑肌细胞作用的细胞内分子转导过程。细胞内Ｃａ２＋的增加既源于内钙的释放又源于外?; 陈蕾黄威权刘丽宏吕葆真蒲若蕾; 关键词：GNRH类似物胃平滑肌钙; 全文增补中

大白鼠颌下腺促性腺激素释放激素受体(GnRHR)mRNA的RT-PCR和原位杂交的研究被引量：1: 2000年; 本实验采用 RT- PCR法探讨大白鼠颌下腺是否存在 Gn RH受体 m RNA,并用原位杂交法对其细胞定位进行了研究。结果显示 RT- PCR可扩增出大白鼠颌下腺 Gn RH受体 m RNA的特异性片段 ,其碱基数与设计的一致。原位杂交发现颌下腺浆液性腺泡上皮细胞、颗粒曲管、排泄管及分泌管上皮细胞内有 Gn RH受体 m RNA的杂交信号。信号物质分布于胞质内 ,胞核阴性。上述结果表明大白鼠颌下腺能合成 Gn RH受体 ,颌下腺产生的 Gn RH可作用于颌下腺的靶细胞 ,参与颌下腺生理功能的调节。; 姚兵黄威权蒲若蕾张荣庆王雷; 关键词：促性腺激素释放激素受体 RT-PCR 原位杂交颌下腺大白鼠

培养的大鼠胃平滑肌细胞GnRH受体的免疫组织化学及原位杂交研究被引量：5: 2002年; 目的　观察培养的大鼠胃平滑肌细胞中是否能表达GnRH受体 ,为进一步研究GnRH对胃平滑肌细胞的功能提供形态学依据。　方法　采用免疫组织化学SABC和原位杂交方法。　结果　培养的大鼠胃平滑肌细胞呈GnRH受体免疫反应阳性 ,阳性物质分布于细胞浆和细胞膜上 ,细胞核呈阴性反应。培养的胃平滑肌细胞同样含有GnRH受体mRNA杂交信号 ,信号物质亦分布于细胞浆内 ,细胞核呈阴性反应。　结论　胃平滑肌细胞能自身表达GnRH受体。; 陈蕾黄威权刘丽宏吕宝真蒲若蕾; 关键词：GNRH受体免疫细胞化学原位杂交胃平滑肌细胞动物实验

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