河北省自然科学基金(302499)
- 作品数：4 被引量：10H指数：3
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- 三种IL-15基因转染NCI-H446细胞模型的建立与鉴定被引量：4
- 2005年
- 目的构建并鉴定三种IL-15基因转染的人小细胞肺癌(NCI-H446)细胞模型。方法PCR法扩增得原型IL-15基因片段(FhIL-15)I、L-15成熟肽基因片段(FhIL-15mp)和IL-2信号肽基因片段(FhIL-2sp);利用重叠延伸基因拼接法将FhIL-15mp和FhIL-2sp拼接成改型IL-15基因片段(FhIL-2sp-hIL-15mp)。将三种IL-15基因片段(FhIL-15、FhIL-15mp和FhIL-2sp-hIL-15mp)分别插入真核表达载体pEGFP-N1构建成相应的重组质粒(PhIL-15、PhIL-15mp和PhIL-2sp-hIL-15mp),用脂质体法分别转染NCI-H446、G418筛选得三种IL-15基因转染的NCI-H446细胞(C-hIL-15、C-hIL-15mp、C-hIL-2sp-hIL-15mp)。对所得的各基因片段和重组质粒,用琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定;对所得的各转染细胞,用RT-PCR法检测hIL-15mRNA的表达,ELISA法检测hIL-15蛋白的分泌。结果琼脂糖凝胶电泳和测序证明,FhIL-15、FhIL-15mp、FhIL-2sp-hIL-15mp电泳条带位置和基因序列正确。三种转染细胞均有IL-15mRNA表达,但仅C-hIL-2sp-hIL-15mp可测到22pg/mL的IL-15蛋白分泌。初步应用表明,三种转染细胞确有不同的免疫生物学特性。结论正确构建了三种IL-15基因转染的NCI-H446细胞模型,可在进一步研究IL-15基因与肿瘤细胞免疫生物学特性的关系及至机制中应用。
- 张征峥王润田王丽刘维华杨丽娟王平丁军颖
- 关键词：基因克隆基因转染
- 不同IL-15转染对NCI-H446HLA-Ⅰ和HLA-Ⅱ表达及NK敏感性的影响被引量：3
- 2005年
- 目的探讨不同形式IL15基因转染对人小细胞肺癌细胞株NCIH446细胞HLA的Ⅰ类和Ⅱ类分子表达及NK杀伤敏感性的影响。方法在本室已构建的3种细胞模型(转染IL15成熟肽基因的NCIH446/IL15mp细胞、转染原型IL15基因的NCIH446/IL15细胞和转染以IL2信号肽替代IL15信号肽的改型IL15基因的NCIH446/IL2spIL15mp细胞)基础上[1],以野生株细胞为对照,流式细胞分析仪(Fluorescenceactivatedcellsorter,FACS)分析这3种细胞HLA的Ⅰ类和Ⅱ类分子表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定它们对NK杀伤的敏感性。结果野生株NCIH446细胞表面阳性表达HLA的Ⅰ类和Ⅱ类分子;转染IL15成熟肽基因或改型IL15基因后,这两种分子的表达均被抑制为阴性;转染原型IL15基因后,这两种分子的表达均被显著上调。5名不同健康志愿者的外周血单个核细胞(PBMC)对野生株NCIH446细胞的平均NK杀伤率最低,对NCIH446/IL15、NCIH446/IL15mp和NCIH446/IL2spIL15mp细胞的平均NK杀伤率依次升高。结论转染不同形式IL15基因对NCIH446细胞的免疫生物学特性影响不同。转染IL15成熟肽基因或改型IL15基因,抑制NCIH446细胞表面HLA的Ⅰ类和Ⅱ类分子表达;转染原型IL15基因,上调这两种分子的表达;转染不同形式IL15基因均可增强NCIH446细胞对NK杀伤的敏感性,但程度不同:以改型IL15者最高,IL15成熟肽者次之,原型IL15者最低。
- 丁军颖王润田张征峥杨志强韩志鹏李铁民邓郁青王平
- 关键词：IL-15基因转染NCI-H446
- 人肺癌和乳腺癌组织IL-15的表达与临床病理因素相关分析被引量：3
- 2006年
- 目的检测人体肺癌和乳腺癌组织中IL-15和IL-15Rα的表达及NK细胞和CD8+细胞的浸润,以探求IL-15在人体肺癌和乳腺癌发生发展中的作用。方法用免疫组化方法,检测29例肺癌和51例乳腺癌肿瘤组织标本中IL-15和IL-15Rα的表达及NK细胞和CD8+细胞的浸润,分析IL-15、IL-15Rα、NK细胞、CD8+细胞之间相关关系及与临床病理因素之间的关系。结果肺癌和乳腺癌肿瘤组织中IL-15表达的阳性染色密度值(PSD)随临床分期增加而减少,肿瘤直径<3cm组大于肿瘤直径≥3cm组,无淋巴结转移组大于有淋巴结转移组。两种肿瘤组织中IL-15的表达和IL-15Rα的表达没有相关性,与NK细胞、CD8+细胞的浸润成正相关。IL-15Rα的表达与这两种肿瘤病人的临床分期、肿瘤大小、淋巴结转移无关。结论IL-15高表达者,多处于肿瘤分期早期,瘤体体积较小,少伴有淋巴结转移;IL-15低表达者,多处于肿瘤分期晚期,瘤体体积较大,多伴有淋巴结转移。推测IL-15在这两种肿瘤发生发展中可能起抑制作用。
- 刘维华王润田张征峥王平杨志强佟慧李全海
- 关键词：IL-15肺癌乳腺癌
- 抗人白细胞介素15单克隆抗体的制备及特性鉴定被引量：2
- 2004年
- 目的 :制备鼠抗人白细胞介素 15(hIL 15)单克隆抗体 (mAb) ,并鉴定其特性。方法 :自重组人白细胞介素 15(rhIL 15)基因工程菌中 ,提取融合蛋白GST IL 15,以 12 0g/LSDS PAGE分离鉴定 ,切取含有目的条带的凝胶 ,免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠的脾细胞与Sp2 / 0骨髓瘤细胞常规融合 ,依次进行HAT选择培养 ,间接ELISA法筛选抗体阳性的杂交瘤细胞及克隆化。对杂交瘤细胞株的稳定性及其分泌的mAb的特性进行鉴定。另外 ,以rhIL 15包涵体蛋白 (rhIL 15IBP)免疫新西兰白兔 ,制备抗hIL 15的多克隆抗体 (多抗 )。用抗hIL 15的mAb与多抗建立双抗体夹心间接ELISA。结果 :获得 1株可稳定分泌特异性抗hIL 15mAb的杂交瘤细胞。建立了双抗体夹心间接ELISA ,检测rhIL 15蛋白的敏感性达 10 μg/L。结论 :成功地制备抗hIL 15mAb ,并建立了一种可用于hIL 15检测的双抗体夹心间接ELISA。
- 王平王润田王丽王从印佟慧李全海杨丽娟
- 关键词：包涵体蛋白单克隆抗体ELISA
