国家肉鸡产业技术体系建设专项(nycytx-42-G2-05)
- 作品数：6 被引量：16H指数：3
- 相关作者：姚斌石鹏君罗会颖王亚茹柏映国更多>>
- 相关机构：中国农业科学院饲料研究所湖南农业大学兰州大学更多>>
- 发文基金：国家肉鸡产业技术体系建设专项国家科技重大专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 来源于耐碱真菌Pseudallescheria sp.JSM-2的碱性木聚糖酶基因的克隆、表达及其性质研究被引量：4
- 2011年
- 从造纸废水中分离得到的耐碱真菌Pseudallescheria sp.JSM-2的DNA为模板,利用同源克隆和TAIL-PCR的方法,获得了一个碱性木聚糖酶基因xyl11-1。该基因DNA和cDNA分别为797bp和678bp。该基因的推测蛋白N-端有一个18个氨基酸的信号肽序列和一个含207个氨基酸的成熟蛋白。编码成熟蛋白的cDNA序列在毕赤酵母GS115中重组表达后,进一步纯化并进行酶学性质测定。重组XYL11-1的最适pH为6.5,在pH4.5～9.0范围有50%以上的酶活;在pH4.5～12.0范围具有良好的pH稳定性;最适温度为50℃;以燕麦木聚糖为底物,比活为2618U/mg;且对中性和碱性蛋白酶具有极好的抗性。该酶作用底物范围广,包括各种木聚糖、纤维素和葡聚糖,易于工业化发酵生产,具有在纸浆脱墨、动物饲料、鱼类饵料中的应用潜力。
- 王坤罗会颖石鹏君王亚茹杨培龙姚斌
- 关键词：PSEUDALLESCHERIA碱性木聚糖酶基因克隆与表达毕赤酵母
- 脂环酸芽孢杆菌Alicyclobacillus sp. A15木聚糖酶基因xynA15的克隆表达及性质研究
- 2010年
- 从云南保山市的一眼温泉中分离到一株嗜热嗜酸菌,脂环酸芽孢杆菌Alicyclobacillus sp. A15。通过同源克隆和TAIL-PCR方法,从该菌株中克隆得到一个木聚糖酶基因xynA15,全长990 bp,编码329个氨基酸和一个终止密码子。将xynA15基因克隆到原核表达载体pET-22b（＋）上,并转化至BL21（DE3）,经过IPTG诱导,其表达产物具有木聚糖酶的活性。对其酶学性质研究发现,XynA15的最适温度为50℃,最适pH为7.0,不仅在较广的温度范围（35℃-60℃）内具有较高的酶活,而且在50℃具有较好的热稳定性。
- 王建设柏映国尹俊姚斌
- 关键词：ALICYCLOBACILLUS
- 高比活木聚糖酶XYN-W及其突变体在酵母中的高效表达被引量：3
- 2010年
- 将来源于瘤胃真菌Neocallimastix frontalis的高比活木聚糖酶基因xyn-w整合到毕赤酵母表达载体pPIC9上,通过电击转化得到重组转化子。SDS-PAGE分析和表达产物的研究表明,木聚糖酶基因xyn-w得到了高效分泌表达,在5 L发酵罐中木聚糖酶蛋白表达量达到1 mg/mL,酶活性达到13 000 IU以上。XYN-W的C端57个氨基酸序列为连接序列和锚定区域,利用PCR方法将此段序列去除,得到截短的木聚糖酶序列xyn-m。用相同方法构建高效表达XYN-M蛋白的毕赤酵母工程菌株,表达产物经纯化后进行酶学性质测定,结果表明,其比活为19 856.6 IU/mg,Kcat值为4 433.8 s-1,与纯化的XYN-W蛋白(比活性13 795.3 IU/mg、Kcat值2 717.1 s-1)相比,分别提高了43.9%和63.2%。
- 罗建杰王亚茹袁铁铮柏映国黄火清罗会颖姚斌范云六
- 关键词：木聚糖酶毕赤酵母
- 一种来源于Bispora betulina的酸性木聚糖酶基因克隆及其酶学性质研究被引量：4
- 2010年
- 利用简并PCR和TAIL-PCR技术从嗜酸性真菌Bispora betulina中克隆得到一个酸性木聚糖酶基因xyn11BB。该基因全长1 207 bp,含有三段内含子、一段外显子和一个终止密码子,编码由297个氨基酸组成的蛋白质,推测蛋白质含有一个CBM1结构域。将不带原基因信号肽编码序列的cDNA基因以正确阅读框架克隆到表达载体pPIC9上,并在毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中诱导表达,其表达活性达121.15 U/mL。重组蛋白经硫酸铵分级沉淀和阴离子交换柱纯化后达到电泳纯。对其酶学性质分析表明,重组木聚糖酶最适温度为50℃,最适pH为4.5,在酸性条件下具有良好的活性和稳定性,可作为饲料用酶的备选。
- 魁红罗会颖董守良姚斌
- 关键词：毕赤酵母
- 来源于链霉菌Streptomyces fradiae var.k11的抗蛋白酶甘露聚糖酶的基因克隆与鉴定被引量：7
- 2010年
- 通过设计简并引物和TAIL-PCR的方法从Streptomyces fradiaevar.k11中克隆得到一个β-l,4-甘露聚糖酶编码基因manS221,其全长1 359 bp,编码452个氨基酸,前端28个氨基酸为预测信号肽。构建表达载体pET-28a-manS221并转化大肠杆菌BL2l(DE3),特异性表达manS221基因,重组的甘露聚糖酶通过Ni-NTA亲和层析纯化。酶学性质分析表明,重组甘露聚糖酶最适温度为52℃,最适pH值为6.0,在pH5.0～9.0的范围内有良好的稳定性,并且对中性蛋白酶具有高抗性。这些优良的性质使得ManS221在食品、饲料和纺织工业生产中具有良好的应用前景。
- 邱振华石鹏君刘素纯姚斌
- 关键词：甘露聚糖酶
- 来源于瓶霉Phialophora sp. G5的酸性木聚糖酶基因的克隆及性质的研究被引量：1
- 2011年
- 通过简并PCR和TAIL-PCR技术从瓶霉Phialophora sp. G5菌株基因组DNA中克隆得到一个新的编码b-1,4-木聚糖酶的基因,命名为xyn11G5。该基因ORF全长879 bp,共编码292个氨基酸和一个终止密码子,前19个氨基酸为信号肽序列。将xyn11G5在毕赤酵母中进行分泌表达,重组蛋白经纯化达到电泳纯。酶学性质分析表明,该重组木聚糖酶最适温度为50℃,最适pH为5.0,在中性条件下具有良好的稳定性,并且具有一定的热稳定性,在饲料行业和生物能源行业领域具有潜在的应用前景。
- 张帆石鹏君缪礼鸿姚斌
- 关键词：PHIALOPHORAG5木聚糖酶毕赤酵母酶学性质
