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国家科技重大专项(2012ZX10002006-002-003)

作品数：10 被引量：24H指数：3
相关作者：朱乃硕张宇黄建胜杨艳朱嗣博更多>>
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发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
相关领域：生物学医药卫生更多>>

文献类型

  • 10篇中文期刊文章

领域

  • 7篇生物学
  • 3篇医药卫生

主题

  • 3篇肿瘤
  • 2篇蛋白
  • 2篇酵母
  • 2篇基因
  • 2篇毕赤酵母
  • 2篇病毒
  • 2篇TAQMAN
  • 1篇蛋白表达
  • 1篇蛋白相互作用
  • 1篇动物
  • 1篇动物源
  • 1篇动物源性
  • 1篇动物源性成分
  • 1篇血清
  • 1篇芽孢
  • 1篇芽孢杆菌
  • 1篇药物
  • 1篇乙肝
  • 1篇乙肝病毒
  • 1篇乙型

机构

  • 10篇复旦大学

作者

  • 10篇朱乃硕
  • 2篇高学鹏
  • 2篇黄建胜
  • 2篇朱嗣博
  • 2篇杨艳
  • 2篇张宇
  • 1篇范长胜
  • 1篇常晓月
  • 1篇赵瑞华
  • 1篇崔嘉真
  • 1篇朱玮
  • 1篇李津
  • 1篇龙玲

传媒

  • 3篇中国生物工程...
  • 1篇药物生物技术
  • 1篇中国免疫学杂...
  • 1篇生物技术通报
  • 1篇复旦学报（自...
  • 1篇复旦学报（医...
  • 1篇中国生物化学...
  • 1篇微生物与感染

年份

  • 1篇2019
  • 1篇2018
  • 1篇2017
  • 1篇2016
  • 3篇2015
  • 3篇2014
共 10 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
基于ChIP-Seq进行肿瘤/睾丸抗原XAGE-1b的DNA结合位点鉴定被引量：1
2014年
XAGE-1b(X antigen family member 1B)属于XAGE亚家族,是一种肿瘤-睾丸抗原(cancer/testis antigen,CTA),表达于正常人睾丸组织和多种类型的肿瘤细胞中.本实验室前期研究发现,该基因在涎腺腺样囊性癌高转移细胞系中呈高表达.为了进一步研究XAGE-1b下游调控基因,本实验采用ChIP-Seq技术筛查XAGE-1b蛋白质可能存在的DNA结合片段.结果发现,XAGE-1b下游调控基因富集于细胞分裂(cell division,P-Value=7.95e-04)、细胞周期调控(cell cycle,P-Value=5.532e-03)、及癌症相关基因(GESA/MSigDB module_11,P-Value=2.010e-06)中.同时发现,XAGE-1b下游调控多个基因的表达产物(NCBI/interactions 22827,P-Value=4.678e-06)能与原癌基因c-Myc的启动子抑制蛋白PUF60发生蛋白质相互作用,并通过qPCR进行了验证.这些研究对阐明XAGE-1b在肿瘤细胞的增殖和转移中的作用有重要意义.
高学鹏朱嗣博赵瑞华朱乃硕
关键词：肿瘤睾丸抗原C-MYC
应用比色法检测枯草芽孢杆菌变异菌株中1-脱氧野尻霉素含量被引量：2
2016年
为寻找测定枯草芽孢杆菌黑色变种突变株Bacillus subtilis var.niger-231(B-231)的发酵液中1-脱氧野尻霉素(1-Deoxynojirimycin,DNJ)的新方法并提高其产发酵液中DNJ的含量。在有铜离子的存在下,DNJ与二硫化碳反应,用有机溶剂对产物萃取后在440 nm进行光度测定,得到DNJ含量。再采用紫外诱变方法处理突变株B-231。绘制了检测DNJ标准品的标准曲线,对测定DNJ的新方法做了精密度、灵敏度、准确度以及产物的稳定性的探讨,设计正交试验优化了反应条件,并将此方法运用到细菌发酵液中DNJ含量的测定中,通过遗传诱变手段处理原始细菌B-231,最终筛选到一株高产DNJ的菌株,命名为B.subtilis var.niger-431(B-431),DNJ含量达87.3 mg/L,其产生DNJ的量较原始菌株原突变株提高了4.2倍。首次提出了一种快速测定细菌发酵液中的1-脱氧野尻霉素的新方法,紫外诱变手段使细菌产生DNJ的能力有较大提高。
龙玲杨艳朱乃硕
关键词：枯草芽孢杆菌1-脱氧野尻霉素Α-糖苷酶抑制剂紫外诱变
乙型肝炎病毒疫苗免疫不应答群体中蛋白质组表达差异性的初步研究
2014年
以往研究显示,人群中约有10%无法通过接种乙型肝炎病毒(HBV)疫苗而产生保护性水平的应答。为研究HBV疫苗免疫后不应答发生的机制,本研究对108例经正常免疫程序(大连汉信产HBV疫苗,10μg/支,共接种3针)后不同应答水平人群的血浆蛋白质组差异进行分析,将其分为无应答(抗体效价检测结果为阴性)组和高应答(抗体效价约1 000mIU/ml)组。用多重亲和去除系统(MARS)亲和柱去除14种高丰度蛋白后,采用双向荧光差异电泳(2D-DIGE)与基质辅助激光解析电离串联飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)相结合的方法,鉴定获得11种差异表达蛋白质。在这些差异表达蛋白质中,α1微球蛋白、激肽原1的表达在无应答人群中较高应答人群上调,而α1抗胰凝乳蛋白酶、维生素D结合蛋白、afamin、抗凝血酶Ⅲ和玻连蛋白表达下调。其中,α1抗胰凝乳蛋白酶、激肽原1和α1微球蛋白的差异性表达进一步得到酶联免疫吸附试验(ELISA)或蛋白免疫印迹法验证。以上蛋白质的表达情况与HBV疫苗免疫应答状况相关,可能成为检测HBV疫苗免疫应答水平的分子标记,为进一步研究免疫不应答机制奠定基础。
常晓月朱嗣博高学鹏朱玮朱乃硕
关键词：分子标记乙型肝炎病毒疫苗血清
表达乙肝表面抗原结合蛋白的毕赤酵母工程菌遗传稳定性研究被引量：5
2014年
研究表达乙肝表面抗原结合蛋白的毕赤酵母工程菌的遗传稳定性,为今后可能的大规模生产奠定基础。在无选择压力下,将分泌表达乙肝表面抗原结合蛋白SBP的毕赤酵母工程菌在YPD固体平板上进行连续传代培养,并对工程菌的菌落和细胞形态、SBP的分泌表达情况以及目的基因的拷贝数等进行检测。结果显示,传代至50代过程中,工程菌的菌落特征和菌体形态与典型的毕赤酵母菌保持一致,其基因组中SBP基因未发生突变,并且原代和第30,50代工程菌基因组中SBP基因的整合拷贝数都为1;目的蛋白SBP的分泌表达量基本不变,SBP在发酵液可溶性蛋白中所占比例保持在50%左右。该毕赤酵母工程菌具有良好的遗传稳定性,适合大规模生产。
李津范长胜朱乃硕
关键词：毕赤酵母
STAT3诱捕寡核苷酸经STAT3/IRF-1通路抑制肿瘤细胞PD-L1的表达被引量：4
2019年
目的:探究STAT3诱捕寡核苷酸(STAT3 Decoy-ON)对免疫抑制分子PD-L1的调控及其作用机制。方法:以前列腺癌细胞DU145为模型,通过流式细胞仪与激光扫描共聚焦显微镜分析STAT3 Decoy-ON对DU145的亲和性;通过qRT-PCR与Western blot分析STAT3 Decoy-ON对STAT3与IRF-1的表达影响;通过流式细胞仪及上述方法分析STAT3 Decoy-ON对PD-L1的表达调控;进一步构建PD-L1启动子上STAT3、IRF-1转录因子识别位点的突变或缺失荧光素酶质粒,探究STAT3与IRF-1对PD-L1表达的调控。结果:发现STAT3 Decoy-ON与DU145细胞具有高度亲和性,且显著下调DU145细胞STAT3与PD-L1的表达;同时STAT3与IRF-1识别位点的缺失或突变皆可显著降低PD-L1启动子的活性;STAT3 Decoy-ON通过下调细胞内IRF-1的表达发挥对PD-L1的抑制作用。结论:STAT3 Decoy-ON介导STAT3/IRF-1的信号通路抑制前列腺癌细胞(DU145)PD-L1的表达。
依含黄建胜李雪朱乃硕
关键词：PD-L1抗肿瘤药物
HAC1基因过表达对重组人CTLA-4蛋白在毕赤酵母中分泌表达的影响
2015年
重组人细胞毒性T细胞相关抗原(Cytotoxic T Lymphocyte Associated Antigen 4,CTLA-4)是一类重要的基因工程药物,其在毕赤酵母中表达水平偏低使其一直无法广泛应用于临床治疗.而影响毕赤酵母中的外源蛋白分泌表达的因素,主要为内质网中的折叠速率以及不可折叠蛋白积累造成的胞内胁迫压力.本文通过在毕赤酵母细胞中过表达HAC1基因对毕赤酵母细胞中未折叠蛋白反应(Unfolded Protein Response,UPR)的信号通路进行调控,从而改善了CTLA-4蛋白的表达水平.摇瓶中改造菌株M-HAC1发酵上清液中该蛋白的分泌表达量是原始菌株表达量的2.55倍.
何秋焱杨艳朱乃硕
关键词：巴斯德毕赤酵母蛋白表达
乙肝病毒X与Tab1蛋白相互作用的体内外验证
2018年
目的：借助实验室前期质谱分析技术和数据分析研究基础,采用免疫共沉淀（Co-IP）和蛋白质沉降实验（GST pull-down）验证HBV X蛋白与Tab1蛋白的相互作用,为进一步研究HBx在HBV慢性感染致癌机制中的作用提供一定的实验依据。方法：成功构建pGEX-2TK-GST-HBx质粒,对GST-HBx融合蛋白进行诱导表达,与GST-beads结合孵育,构建pcDNA3.1/myc-His（-）BTab1,转染293T细胞使其表达,然后GST pull-down体外试验验证二者的相互作用;构建pcDNA3.1/myc-His（-）B-Tab1和pcDNA3.1-3×flag-HBx真核表达质粒,共转染293T和HepG2细胞使其表达,通过Co-IP实验验证抗Myc抗体可以将HBx从细胞裂解液中沉淀下来,证实了它们在两种细胞系中存在相互作用。结果：显示了HBx和Tab1在体内外条件下能够发生相互作用,为进一步明确HBV X蛋白功能及作用机制奠定基础。
于丽丽胡博李雪朱乃硕
关键词：HBVX蛋白相互作用
产KPC酶超耐药阿斯肠杆菌EaH7的发现及其耐药伴生质粒的遗传特征
2015年
目的分析1株亚胺培南抗性阿斯肠杆菌(Enterobacter asburiae)的耐药机制及其遗传特征。方法Vitek-2 Compact系统初步鉴定菌株并测定抗生素最小抑菌浓度,对16s rRNA基因测序以确定菌株;PCR法扩增β-内酰胺类、喹诺酮类和氨基糖苷类等17种耐药基因并测序确认;以CaCl2诱导的化学法转化质粒;构建伴生质粒DNA文库并测序,以Glimmer 3.02和BLASTP软件注释并预测伴生质粒序列的编码基因功能;采用接合试验验证伴生质粒对耐药性质粒转移的作用。结果该菌株为阿斯肠杆菌,对亚胺培南等15种β-内酰胺及氨基糖苷类抗生素耐药,仅对左氧氟沙星和环丙沙星敏感;该菌株同时含有2种质粒,其中耐药性质粒pEa-1携带耐药基因blaKPC-2、blaCTX-M-15和blaTEM-1,而伴生质粒pEa-2则携带4种转移蛋白基因mobA、mobB、mobC和mobD;pEa-2可促进耐药质粒pEa-1接合转移。结论在国内首次报道了产KPC-2酶的阿斯肠杆菌,该菌携带的质粒pEa-2具有促进耐药性质粒pEa-1接合转移的作用。
崔嘉真黄建胜朱乃硕
关键词：耐药质粒
Taqman多重实时荧光PCR同步定量检测6种动物源性成分方法的建立被引量：11
2017年
旨在建立一种可同时检测猪、牛、羊、鸡、鸭、鹅6种动物源性成分的六重实时荧光定量PCR方法。根据猪、牛、羊、鸡、鸭、鹅细胞核基因组保守序列,参照序列比对结果选择差异位点设计6对特异性引物和6条以不同荧光素标记的Taqman探针。通过对PCR反应体系和反应条件的优化筛选,建立能同步定量检测猪、牛、羊、鸡、鸭、鹅源性成分的六重实时荧光PCR方法。应用此方法分别对18种不同源性动物DNA和200份不同来源样品进行猪、牛、羊、鸡、鸭、鹅源性成分检测,结果表明,所建立的六重实时荧光PCR方法灵敏度高,对六种动物的最低核酸检测量分别为0.049ng、0.048ng、0.085ng、0.13ng、0.162ng、0.074ng(50μl体系);特异性强,对狗、兔、鼠、驴、马、骆驼等其他12种动物无特异性扩增;200份样品的检测结果表明六重qPCR检测方法敏感,同一反应体系下实现一次对6种动物快速定量检测,耗时短、效率高、适用性广,可用于肉品、奶品、皮毛和饲料等动物产品猪、牛、羊、鸡、鸭、鹅源性成分单一或混合物种的鉴别诊断。
付理文张宇依含李雪朱乃硕
关键词：动物源性成分
Taqman多重实时荧光定量PCR检测裸鼠肿瘤转移模型中肿瘤转移率方法的建立被引量：1
2015年
目的:建立基于多重荧光定量PCR技术的动物体内恶性肿瘤转移模型中肿瘤转移率高效检测的方法。方法:以人和小鼠的β2m基因为目标,设计相应的引物和Taqman探针;分别抽提人涎腺腺样囊性癌ACC细胞和小鼠Sp2/0细胞的基因组DNA作为模板,建立两物种双重荧光定量PCR检测方法,且分别以人和鼠定量基因检测为参照考察双重荧光定量PCR方法的特异性、灵敏性和精确性,并与传统转移灶称重计算肿瘤转移率的方法进行比较。结果:双重Taqman实时荧光定量PCR检测方法具有很好的特异性和较高的灵敏度(0.006ng/μl DNA),重复性较好(批间平均CV=0.036),有较强稳定性,比传统称重法更高效,更准确。结论:双重荧光定量PCR能够在同一反应体系下同时对动物组织中人肿瘤转移灶和周围组织进行快速准确的定量检测,计算出肿瘤转移率,具有经济、快速、特异性强等优点,在肿瘤动物模型肿瘤转移率检测方面具有很高的应用价值。
张宇白豆朱乃硕
关键词：涎腺腺样囊性癌
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