国家自然科学基金(30371283)
- 作品数：7 被引量：12H指数：3
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- Ⅱ类反式激活因子启动子Ⅳ区C-1350T和G-944C多态性与乙型肝炎肝硬化易感性的关系被引量：1
- 2008年
- 目的探讨Ⅱ类反式激活因子（CIITA）启动子Ⅳ区1350和-944位点单核苷酸多态性（SNP）与乙型肝炎肝硬化易感性的关系。方法在191例慢性乙型肝炎、353例乙型肝炎肝硬化与125名无HBV感染的健康献血员人群中，应用序列特异性引物PCR技术对CIITA基因启动子Ⅳ区C1350T和G-944C位点进行基因分型研究。结果慢性乙型肝炎患者CC：37．2％、TG：42．2％、CG：18．9％，肝硬化患者CC：35．3％、TG：34．0％，CG：29．3％，肝硬化患者CC、TG单倍型频率较低，而CG单倍型频率显著升高，差异有统计学意义（CG比CC：x^2=8．274，df=1，P〈0．01；CG比TG：x2=15．027，df=1，P〈0．01）；两组患者间CC与TG单倍型频率比较，x^2=1．231，df=1，P〉0．05，差异无统计学意义。与慢性乙型肝炎患者（CC／CC：12．6％；TG／TG：18．3％；含CG的基因型：33．5％；不含CG的基因型：35．6％）相比，肝硬化人群中CC／CC（1组，19．6％）和含CG的基因型（3组，53．5％）频率显著升高，而TG／TG（2组，11．9％）和不含CG的基因型（4组，15．0％）频率显著降低（1组比2组，X2=7．176，df=1，P〈0．01；1组比4组，x^2=19．818，df=1，P〈0．01；3组比2组，x2=11．423，df=1，P〈0．01；3组比4组，x2=34．226，df=1，P〈0．01；1组比3组，x2=0．009，df=1，P〉0．05；2组比4组，x2=2．176，df=1，P〉0．05）。结论CIITA基因启动子Ⅳ区中1350和-944位点多态性与慢性HBV感染者肝硬化的易感性密切相关，携带含CG单倍型的基因型人群更容易发展为肝硬化。
- 洪晓俊张绪清柏秀娟
- 关键词：肝炎乙型肝硬化肝炎病毒乙型主要组织相容性复合物核苷酸类MHC
- CⅡTA基因启动子Ⅳ区G-944C多态性与慢性HBV感染发病易感性的关系研究被引量：3
- 2006年
- 目的探讨MHCⅡ类反式激活因子(CⅡTA)启动子Ⅳ区G-944C基因多态性与慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染发病易感性的关系。方法在1203例慢性HBV感染无症携带与慢性肝患者中,应用序列特异性引物PCR技术(PCR-SSP)对CⅡTA基因启动子Ⅳ区G-944C位点进行基因分型研究。结果CC基因型频率在2组人群中分别为25·7%和19·7%,彼此间相差显著(χ2=5.560,P=0·018),而GC基因型频率分别为43.6%和49.9%,彼此间相差显著(χ2=4·774,P=0·029);在G基因显性模式下(C基因隐性模式),即GG+GC基因型频率在无症状携带和发病组人群中分别为74.3%和80.3%,两者间相差显著(χ2=5.560,P=0·018);在慢性肝炎、慢性重型肝炎和肝炎肝硬变3组人群中,C等位基因频率分别为44.1%、45.8%和45.0%,彼此间相差不显著(P>0.05)。结论CⅡTA基因启动子Ⅳ中的G-944C位点多态性与慢性HBV感染者发病易感性存在一定的关系,而与疾病的严重程度无明显关系;基因型为CC纯合子的慢性HBV感染者不容易发展成慢性肝病。
- 洪晓俊张绪清邓国宏
- MHCⅡ类反式激活因子在上调HepG2细胞HLAⅡ类分子表达中的作用被引量：6
- 2007年
- 目的探讨主要组织相容性复合物(major histocom patibility complex,MHC)Ⅱ类反式激活因子(classⅡtrans-activator,CⅡTA)在调控HepG2细胞HLAⅡ类分子表达中的作用。方法将含CⅡTAcDNA的真核表达载体EBS-NPL-CⅡTA和不含CⅡTAcDNA的空载体EBS-NPL分别转染至HepG2细胞。用RT-PCR技术检测未经转染的HepG2细胞、转染EBS-NPL-CⅡTA及空载体EBS-NPL的HepG2细胞CⅡTA mRNA的表达,并用间接细胞免疫荧光技术及流式细胞技术检测其3种HLAⅡ类分子(HLA-DR、DP、DQ)的表达。结果未经转染的HepG2细胞和转染空载体EBS-NPL的HepG2细胞均无CⅡTA mRNA和HLAⅡ类分子的表达。转染EBS-NPL-CⅡTA后的HepG2细胞出现CⅡTA mRNA表达,并表达3种HLAⅡ类分子。结论CⅡTA是调控HepG2细胞是否表达HLAⅡ类分子的关键因子,HepG2细胞不表达HLA-Ⅱ类分子与其缺乏CⅡTA表达有关,为进一步研究CⅡTA在肝癌治疗中的作用奠定基础。
- 柏秀娟张绪清
- 关键词：HEPG2细胞
- 人CIITA基因启动子IV不同单倍型DNA真核表达载体的构建
- 2007年
- 目的:构建人MHCⅡ类反式激活因子(CIITA)基因启动子IV4种不同单倍型DNA的真核表达载体。方法:根据人CIITA基因启动子IV区的2个单个核苷酸多态性(SNPs)位点C-1350T和G-944C,可以构建出4种单倍型(CG、CC、TG和TC)。分别以CG/CG、CC/CC、TG/TG和TC/TC4种基因型的人基因组DNA为模板,用PCR法扩增出包含启动子IV两个SNP位点的长487bp的DNA片断,TA克隆至pMD18-TSimple载体后用MluI/HindⅢ双酶切,纯化回收后分别与同样双酶切的荧光素酶报告基因载体PGL3-Basic和PGL3-Promoter相连接,构建CG-PGL3-Basic、CG-PGL3-Promoter、CC-PGL3-Basic、CC-PGL3-Promoter、TG-PGL3-Basic、TG-PGL3-Promoter、TC-PGL3-Basic、TC-PGL3-Promoter8个表达载体,并测序验证其DNA序列。结果:实验得到含有人CIITA基因启动子IV4种不同单倍型DNA序列的真核表达载体8个,且测序证实了这8个表达载体序列与理论序列完全一致。结论:成功构建人CIITA基因启动子IV不同单倍型的真核表达载体,为CIITA基因启动子IV不同单倍型的功能研究奠定基础。
- 洪晓俊张绪清柏秀娟
- 关键词：MHC单倍型
- CⅡTA基因编码区不同单倍型cDNA的功能研究
- 2009年
- 目的研究MHCⅡ类反式激活因子（CⅡTA）基因编码区非同义单核苷酸多态性（SNP）位点C19170G（Leu45Val）和C30799G（Ala500Gly）构成的4种不同单倍型eDNA的功能。方法将4种不同单倍型的真核表达载体和空载体分别转染至HeLa细胞。用RT—PCR和间接细胞免疫荧光技术检测未经转染的HeLa细胞、转染4种真核表达载体及空载体的HeLa细胞C1ITAmRNA与3种HLAⅡ类分子（HLA-DR、DP、DQ）的表达，并用流式细胞技术对其表达的3种HLAⅡ类蛋白进行定量分析。结果未经转染和转染空载体的HeLa细胞均无CⅡTA mRNA和3种HLAⅡ类分子的表达，而转染4种不同单倍型真核表达载体的HeLa细胞均出现CⅡTA mRNA表达，并表达3种HLAⅡ类分子。证实了转染4种不同单倍型真核表达载体后的HeLa细胞3种HLAU类分子表达水平差异无统计学意义（P均〉0．05）。结论中国人CⅡTA基因编码区这两个SNP位点的多态性（2个位点氨基酸的改变）不影响CⅡTA反式激活HLAⅡ类基因表达的能力。
- 柏秀娟张绪清
- 关键词：单倍型
- MHCⅡ类反式激活因子与病毒感染的关系被引量：5
- 2006年
- MHCⅡ类反式激活因子(ClassⅡtransactivator,CⅡTA)通过调控细胞是否表达MHCⅡ类分子及其水平而决定宿主是否对外来病毒感染产生免疫应答及其程度,从而影响病毒感染的发生、发展与转归。本文介绍了CⅡTA的结构与功能、IFNγ诱导MHCⅡ类基因表达的机制及CⅡTA分子与病毒间的相互作用。
- 张绪清
- 关键词：病毒
- 人CⅡTA基因不同单倍型CDNA真核表达载体的构建
- 2007年
- 目的 构建人MHCⅡ类反式激活因子（CⅡTA）基因3种不同单倍型cDNA的真核表达载体。方法 以野生型重组质粒EBS-NPL-CⅡTA cDNA为模板,用重叠延伸PCR定点突变技术对CⅡTA基因编码区的两个非同义单个核苷酸多态性（SNP）位点进行突变,制备CⅡTA基因另外3种单倍型CDNA的部分片段。将其分别克隆至EBS-NPL-CⅡTA酶切后的线性化载体上,通过菌落PCR及酶切鉴定获得阳性克隆,并对其进行测序鉴定。然后将4种单倍型的真核表达载体和空载体EBS-NPL分别转染至HepG2细胞,用间接细胞免疫荧光技术检测其HLA-DR分子的表达。结果 成功制备人CⅡTA基因3种单倍型CDNA的部分片段,并获得含有CⅡTA基因3种不同单倍型cDNA完整序列的真核表达载体。证实未经转染和转染空载体的HepG2细胞无HLA-DR分子的表达,转染4种真核表达载体的HepG2细胞均可表达HLA-DR分子。结论 成功构建人CⅡTA基因不同单倍型的真核表达载体,为研究CⅡTA基因不同单倍型功能之间的差异奠定基础。
- 柏秀娟张绪清洪晓俊
- 关键词：单倍型HEPG2细胞
