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国家自然科学基金(30371098): 作品数：19 被引量：46H指数：4; 相关作者：夏春李新生李云岗高凤山方勤美更多>>; 相关机构：中国农业大学河南农业大学大连大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金山西省自然科学基金辽宁省博士科研启动基金更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>

硬骨鱼类MHCⅠ基因结构及表达研究被引量：2: 2008年; 贾震虎夏春; 关键词：基因结构硬骨鱼类 MHC 脊椎动物比较基因组学 Β结构域

禽流感病毒T细胞表位与体外重建鸡MHCⅠ类分子结合试验被引量：14: 2007年; 为探讨体外重建的MHCⅠ复合体BF2-linker-β2 m鉴定病毒抗原肽系统能否在体外结合抗原多肽,以及不同类的MHCⅠ类分子结合相同和不同抗原多肽表位能力的差异,本研究采用人工合成的禽流感病毒的3条多肽,猪口蹄疫病毒的2条多肽,以及来源于草鱼呼肠孤病毒的2条多肽分别与4类体外重建的串联鸡MHCⅠ类分子复合体BF2-linker-β2 m进行了体外结合试验。BF2-linker-β2 m与不同的病毒抗原九肽按照1∶10的摩尔比进行混合,作用后取反应混合物离心除去未与MHCⅠ类分子结合的抗原多肽;然后取BF2-linker-β2 m分别与抗原多肽形成的复合体,利用酸洗法将结合的多肽自MHCⅠ类分子的抗原多肽结合槽中洗脱,洗脱后的蛋白和多肽混合物离心收集洗脱的多肽溶液,随后利用C18柱对洗脱的多肽进行去盐、脱酸处理;将多肽样品冻干,用基质溶解后直接点样进行一级质谱(MS)和二级质谱(MSMS)测定,结果表明,3类体外重建的BF2-linker-β2 m可与禽流感病毒多肽KILTIYSTV和LLLAIVSLV结合,而不与禽流感病毒多肽TIGECPKYV以及猪口蹄疫病毒和草鱼呼肠孤病毒的4条多肽结合。证实由于MHCⅠ类分子的多态性导致复等位基因的MHCⅠ类分子结合病毒抗原表位的能力存在差异;病毒的T细胞抗原表位是MHCⅠ类分子限制性的;KILTIYSTV和LLLAIVSLV是禽流感病毒的候选表位。; 李新生陈红英闫若潜高凤山方勤美夏春; 关键词：MHC T细胞表位质谱

一商品猪SLA-Ⅰ分子复合体的体外构建被引量：2: 2009年; 【目的】研究中国北方杂交商品猪SLA-Ⅰ类分子结构特点,并为进一步的多肽结合等功能研究奠定基础,需要在体外构建正确折叠的SLA-I类分子复合体。【方法】以长白-达兰商品猪为研究材料,克隆SLA-2和β2m。然后采用剪接重叠延伸PCR(splicingoverlapextentionPCR,SOEPCR)法,将SLA-2的胞外区和β2m的成熟肽部分通过一富含甘氨酸/丝氨酸的Linker(G4S)3连接,形成SLA-2-Linker-β2m全长,并插入原核表达质粒pMAL-p2X,转化E.coliTB1,IPTG诱导表达。表达得到的融合蛋白分别经过Western-blot、纯化及FactorXa切割,分离纯化单体蛋白。圆二色谱(circulardichroismspectrum,CD)测定蛋白的二级结构。【结果】SDS-PAGE和Western-blot均证实融合蛋白MBP-SLA-Ⅰ大小为84.1kD。SLA-I单体蛋白大小为41.6kD。圆二色谱分析单体蛋白和融合蛋白二级结构元件α-螺旋、β-折叠、转角和随机卷曲的符合率分别达到了100%、90.6%、88.5%和96.9%。【结论】结果表明重构的SLA-I复合体具有正确的二级结构,可以用于体外多肽结合等研究。; 高凤山李新生李云岗郝惠芳方勤美夏春; 关键词：复合体圆二色谱

体外鉴定的禽流感病毒T细胞表位的免疫效果研究被引量：2: 2008年; 为验证来源于禽流感病毒的、可与鸡MHCⅠ类分子结合的九肽KILTIYSTV和LLLAIVSLV的免疫原性,使用TIGECPKYV、LLLAIVSLV和KILTIYSTV 3条多肽免疫BALB/c小鼠,加强免疫时和加强免疫1、2、3、4、5周后分别采血,流式细胞术测定免疫前后小鼠外周抗凝血中CD8+淋巴细胞的变化情况;加强免疫后14 d进行MTT试验;首次免疫3周后进行DTH试验;ELISA检测免疫前后小鼠分泌IFN-γ的变化情况。结果表明,KILT-IYSTV、LLLAIVSLV、TIGECPKYV免疫后分别引起CD8+T淋巴细胞4.2%、4.0%和0.2%的额外增殖。KILTIYSTV和LLLAIVSLV免疫组的IFN-γ的增长和迟发型变态反应均显著高于对照组。简言之,与重建的MHCⅠ类分子结合的多肽KILTIYSTV和LLLAIVSLV可以刺激小鼠产生特异性CTL反应,而不结合的多肽TIGECPKYV刺激小鼠未产生特异性CTL反应。; 李新生陈红英高凤山夏春崔保安; 关键词：多肽免疫禽流感病毒 CTL

一养鸡地区传染性法氏囊炎免疫失败的研究被引量：1: 2006年; 鸡传染性法氏囊病(in fectious bursa l d isease,IBD)是一种严重危害养禽业健康发展的传染病,该病感染后不但造成重大的损失,还引起不同程度的免疫抑制,给禽群免疫带来更大的困扰。作者对发生在河南某地区的IBD免疫失败进行了研究,研究结果发现:鸡群免疫使用的鸡传染性法氏囊炎中等毒力苗每瓶标识含量均为500羽份,发生严重免疫失败的A疫苗抽检的6瓶测得的0.1 m l疫苗稀释液的TC ID50分别是1-0 2.2、1-0 2.7、100、10-2.9、1-0 1.9、100,即每瓶实际分别含有3.17、10.04、0、15.9、1.3和0羽份。而当地市场使用效果较好的B疫苗和C疫苗每瓶疫苗分别平均含有485和453羽份。疫苗有效含量不足是该地区IBD免疫失败的主要原因。; 李新生杜向党陈红英崔沛廖仲磊崔保安; 关键词：传染性法氏囊病免疫失败

巴马小型猪SLA-2和β_2m复合体蛋白的构建及二级结构测定分析被引量：3: 2007年; 以巴马小型猪为研究材料,克隆SLA-2和β2m基因。然后采用剪接重叠延伸PCR(Splicing overlap exten-tion PCR,SOE PCR)法,将SLA-2的胞外区和β2m的成熟肽部分通过一富含甘氨酸/丝氨酸的Linker(G4S)3连接,形成SLA-2-Linker-β2m。将SLA-2-Linker-β2m在pMAL-p2X系统上表达,其融合表达蛋白分别经过West-ern-blot、纯化及Factor Xa切割,分离纯化单体蛋白。圆二色谱(Circular dichroism spectrum,CD)测定蛋白的二级结构。结果显示,重构表达的复合体融合蛋白MBP-SLA-2-(G4S)3-β2m大小为84.1 ku。切割后去除MBP的单体蛋白大小为41.6 ku。圆二色谱分析单体蛋白和融合蛋白二级结构元件α-螺旋、β-折叠、转角和随机卷曲的符合率分别达到了100%、97.3%、97.1%和97.9%,揭示重构的复合体具有正确的二级结构,可以用于体外多肽结合等研究。; 高凤山李新生李云岗方勤美郝慧芳夏春; 关键词：圆二色谱 SLA-2 Β2M

Construction and Characterization of Grass Carp (Ctenopharyngodon idellus) Fosmid Library被引量：1: 2010年; Grass carp (Ctenopharyngodon idellus) genomic fosmid library cotaining 129 014 clones was constructed and characterized from one diploid grass carp. The average insert size of the fosmid library was determined to be 35 kb by pulsed field gel electrophoresis, which is 4.1-fold coverage of the grass carp genome. To demonstrate the probability of picking the functional genes from the library, eleven functional genes were screened by three-dimensional PCR technique. The number of positive clones of these genes was from 1 to 6. So, this library may screen any useful genes from grass carp. This grass carp genome fosmid library will be integrated in the presently ongoing efforts to determine the sequence of the grass carp genome.; JIA Zhen-huLIN Chang-youYANG Tian-yaoJIANG Yi-nanXIA Chun; 关键词：草鱼基因组序列脉冲场凝胶电泳功能基因阳性克隆 PCR技术

鸡主要组织相容性复合体I(BF2和β_2m)二级结构与同源模建被引量：1: 2005年; 为了推进鸡主要组织相容性复合体(MHC)Ⅰ类分子(BF2,β_2m)空间结构的研究,克隆、表达了鸡BF2和β_2m基因,采用圆二色谱(CD)测定了其重组蛋白的二级结构,并同源模建了其三级结构。首先,将BF2和β_2m基因分别插入原核表达载体进行了可溶性表达。对表达的融合蛋白进行纯化、蛋白酶切割并对切割后的蛋白进行分离和纯化,获得了麦芽糖结合蛋白(MBP)—BF2, β_2m蛋白以及MBP单体。随后,测定了BF2和β_2m的CD值。CD表明BF2蛋白呈典型的α螺旋; 其中,α螺旋、β折叠、转角和随机蜷曲分别为72,102,70和90个氨基酸。β_2m重组蛋白呈典型的β折叠,α螺旋、β折叠、转角和随机蜷曲分别为0,46,30和22个氨基酸。同源模建显示鸡BF2和β_2m蛋白与人HLA-A2和小鼠H2的3D结构类似。结果显示了BF2和β_2m蛋白在二维和三维上的分子特征及其与抗原多肽结合氨基酸的空间分布,为以后进一步构建鸡BF2-β_2m复合物体外鉴定病毒抗原肽系统奠定了基础。; 闫若潜李新生杨天耀夏春; 关键词：Β2M 圆二色谱同源模建主要组织相容性复合体麦芽糖结合蛋白

重构猪SLA-I单链复合体及其口蹄疫病毒VP1蛋白限制性表位的筛选被引量：4: 2007年; 目前,没有研究猪SLA-I类复合体限制性表位的系统.为了构建猪的SLA-I类复合体,研究其相应重要病毒的限制性表位,亚克隆猪主要组织相容性复合体重链基因SLA-2胞外区和轻链基因β2m成熟肽区,利用一富含甘氨酸和丝氨酸的Linker(G4S)3连接两个基因,通过SOEPCR体外构建了猪可溶性的单链复合体SC-SLA-I[SLA-2-(G4S)3-β2m],计算机方法设计3类口蹄疫病毒VP1蛋白的T细胞表位,经化学合成,分别命名为PepⅠ(FMDV/VP126—34)、PepⅡ(FMDV/VP1157—165)和PepⅢ(FMDV/VP145—53),用以结合单链复合体蛋白SC-SLA-I.酸洗脱结合质谱法测定SC-SLA-I结合表位,同时设定非相关蛋白和多肽的对照试验.结果显示,Pep Ⅰ和Pep Ⅱ均能和SC-SLA-I结合,而Pep Ⅲ及非相关多肽不能结合,对照蛋白MBP的肽结合试验显示阴性.结果表明,多肽Pep Ⅰ和Pep Ⅱ属于SLA-I类限制性表位.; 高凤山姜平方青美李云岗李新生王钦富迟彦夏春; 关键词：T细胞表位口蹄疫病毒

鸡复等位基因BF2与β2m的结构解析: 2006年; 为了阐明鸡主要组织相容性复合体I(BF)和β2微球蛋白(β2m)不同复等位基因的分子结构,利用pMAL-p2X／E．coli TB1系统表达了5类不同复等位基因BF2的胞外区和一类新的β2m,并采用纯化、蛋白酶切和Western blot进行了鉴定．最后,采用圆二色谱(CD)测定了各重组蛋白的二级结构以及同源模建了其三级结构．5类不同复等位基因的BF2蛋白分子中的α-螺旋、β-片层、转角和随机卷曲的氨基酸长度分别为69—73,67—72,35—37和94—98．5类不同复等位基因BF2和一类新的β2m蛋白分子的同源模建揭示了其结构与人和鼠的MHC I类分子类似,但各有其特征性的结构;研究获得了正确折叠、不同复等位基因的BF2和β2m蛋白分子,并为进一步形成BF2-β2m复合体、鉴定抗原表位提供了依据．; 李新生闫若潜高风山方勤美李云岗郝惠芳夏春; 关键词：Β2M 圆二色谱同源模建

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