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PD-L2在宫颈鳞状细胞癌的表达及对外周血T细胞凋亡的影响被引量：4: 2014年; 目的检测负性共刺激分子PD-L2在人宫颈鳞状细胞癌的表达情况,分析其与患者临床病理特征的相关性,并观察重组人PD-L2蛋白对患者外周血T细胞凋亡的影响。方法采用免疫组织化学染色检测PD-L2蛋白在60例宫颈鳞状细胞癌患者癌组织中的表达,并统计分析PD-L2蛋白表达与宫颈鳞状细胞癌患者临床病理特征的相关性。将患者外周血T淋巴细胞分为空白对照组、PD-L2组和PD-L2+抗PD-1组单克隆抗体组,流式细胞术分析各组T细胞的凋亡率。结果宫颈鳞状细胞癌表达PD-L2的阳性率为53.3%(32/60)。PD-L2的表达与宫颈鳞状细胞癌的淋巴结转移相关(P<0.05)。PD-L2组宫颈鳞状细胞癌患者外周血活化CD4+T和CD8+T的凋亡率分别为17.0%和22.4%,明显高于空白对照组9.0%和16.2%;加入抗PD-1阻断PD-L2与T淋巴细胞、PD-1结合后,PD-L2+抗PD-1组CD4+T和CD8+T淋巴细胞凋亡率下降到11.1%和17.5%。结论宫颈鳞状细胞癌细胞异常表达PD-L2,且与肿瘤的淋巴结转移有关。PD-L2通过促进T细胞凋亡而削弱宫颈微环境的抗肿瘤免疫,并促进肿瘤的淋巴结转移。PD-L2/PD-1途径有可能成为宫颈鳞状细胞癌免疫治疗的靶点之一。; 耿卫朴徐曼张燕陈瑜黄文炼王婷婷; 关键词：宫颈肿瘤 T淋巴细胞淋巴转移 PD-L2

人子宫颈癌肿瘤相关巨噬细胞浸润与T细胞亚型及临床病理特征的相关性分析被引量：4: 2016年; 为了探讨肿瘤相关巨噬细胞(tumor associated macrophages,TAMs)在人子宫颈癌微环境内的分布与T细胞亚型和临床病理特征的相关性,本研究应用S-P免疫组化法检测TAMs在60例子宫颈癌组织、10例高级别鳞状上皮内病变组织及10例子宫颈组织的分布情况;间接免疫荧光双标法分析浸润的FOXP3^+Treg细胞数量、CD8^+T细胞数量及其粒酶B分泌情况。统计学分析TAMs数量与癌间质浸润的FOXP3^+Treg、CD8^+T数量和临床病理特征的相关性。结果显示TAMs在子宫颈癌微环境的数量均显著多于高级别鳞状上皮内病变和子宫颈组织(p<0.01,p<0.01),同时高级别鳞状上皮内病变组织阳性细胞数也明显多于子宫颈组织(p<0.01);TAMs数量与宫颈癌间质内浸润的FOXP3^+T细胞数量呈正相关性(p<0.05),且与淋巴结转移和癌栓相关(p<0.05,p<0.05),但与CD8^+T细胞浸润数量无明显相关性(p>0.05)。本实验发现TAMs在宫颈癌微环境内大量分布,且与肿瘤局部免疫抑制及淋巴结转移和癌栓有关。; 沈依帆徐曼王欣汪涛刘慧; 关键词：肿瘤相关巨噬细胞宫颈癌 CD8^+T

乳腺癌异常表达B7-H4对T细胞分泌细胞因子和凋亡的影响被引量：3: 2016年; 目的:探讨B7-H4在乳腺癌中的表达及其对外周血T细胞分泌细胞因子及增殖、凋亡的影响。方法:应用SP免疫组化法检测B7-H4在乳腺浸润性癌、癌旁组织和纤维腺瘤的表达。流式细胞术分析B7-H4对乳腺癌患者外周血活化T细胞增殖和凋亡的作用。ELISA芯片检测T细胞培养上清液细胞因子的含量。结果:B7-H4在乳腺浸润性癌的阳性表达率为84.62%(44/52),显著高于癌旁组织和纤维腺瘤组织(P<0.01,P<0.01)。体外淋巴细胞混合培养结果显示,与空白组比较,B7-H4对乳腺癌患者外周血活化T细胞的增殖指数Ki67无明显影响;但B7-H4诱导CD8^+T细胞凋亡的作用强于CD4^+T细胞。B7-H4组FOXP3^+T/CD4^+T也高于空白组(P<0.05)。B7-H4组较空白组细胞培养上清液中TGF-β1、IL-17含量均显著增高(P<0.05,P<0.05)。结论:乳腺浸润性癌异常表达B7-H4。B7-H4在体外能促进CD8^+T细胞凋亡、促进T细胞分泌TGF-β1和IL-17。B7-H4在削弱乳腺癌微环境的抗肿瘤细胞免疫中发挥一定作用。; 沈依帆黄文炼徐曼苏新良王欣汪涛; 关键词：B7-H4 乳腺癌 CD8^+T细胞 TGF-Β1 IL-17

人子宫颈癌异常表达程序性死亡配体-1并促CD4＋T和CD8＋T细胞凋亡被引量：8: 2012年; 目的:探讨程序性死亡配体-1(Programmed death ligand-1,PD-L1)在人子宫颈癌的表达及其与肿瘤内CD4+T和CD8+T细胞浸润的相关性,体外实验观察重组人PD-L1蛋白对宫颈癌患者外周血T细胞凋亡的影响。方法:采用免疫组化SP法检测PD-L1在10例正常人宫颈组织和67例宫颈癌组织中的表达以及死亡受体-1(Programmed death receptor-1,PD-1)在宫颈癌内浸润淋巴细胞的表达;TUNEL法检测肿瘤内浸润的淋巴细胞凋亡;免疫荧光分析宫颈癌内浸润的CD4+T和CD8+T淋巴细胞数量;流式细胞术分析PD-L1促进宫颈癌患者外周血活化CD4+T和CD8+T细胞凋亡情况。结果:正常子宫颈上皮不表达PD-L1;宫颈癌PD-L1的表达率为70%(47/67)。部分宫颈癌内浸润的淋巴细胞表达PD-1,且淋巴细胞存在凋亡现象。PD-L1阳性宫颈癌肿瘤内浸润的CD8+T细胞数量明显减少(P<0.05)。体外实验发现PD-L1与健康人或宫颈癌患者外周血活化T细胞混合培养48 h后,T细胞凋亡率明显高于空白组,2组平均凋亡率分别为(32.8±1.4)%、(38.3±1.5)%(P<0.05)和(27.7±1.3)%、(30.9±1.9)%(P<0.05);抗PD-1抗体使PD-L1诱导的T细胞凋亡率下降,分别为(29.8±1.6)%和(31.6±1.4)%(P>0.05)。PD-L1对人外周血活化CD4+T和CD8+T细胞均有促凋亡作用。结论:人子宫颈癌异常表达PD-L1与肿瘤内浸润的淋巴细胞凋亡及CD8+T细胞数量减少有关。PD-L1经PD-1促进活化的CD4+T和CD8+T细胞凋亡。; 陈瑜徐曼肖琳耿卫朴王婷婷黄文炼; 关键词：子宫颈癌程序性死亡配体-1 凋亡

B7-H4对宫颈癌患者外周血活化T细胞增殖、凋亡和分泌细胞因子的影响被引量：6: 2015年; 目的观察重组人B7-H4蛋白对宫颈癌患者外周血T细胞增殖周期、凋亡及分泌细胞因子的影响。方法 B7-H4分别与15例宫颈癌患者外周血活化淋巴细胞混合培养48h后,采用流式细胞术分析T细胞增殖、细胞周期、凋亡及各亚群T细胞的变化,酶联免疫吸附试验(ELISA)芯片检测培养上清液细胞因子含量。结果宫颈癌患者外周血T细胞与B7-H4混合培养48h后,G1、G2和S期的T细胞分别占90.59%、8.55%和0.87%,空白对照组T细胞各期占92.83%、6.09%和1.13%;B7-H4组CD4+T和CD8+T细胞的Ki67阳性率分别为2.13%±0.13%和1.03%±1.33%,空白对照组为2.74%±0.98%和1.71%±1.32%。B7-H4组较空白对照组CD8+T和CD4+T细胞占T细胞的比例下降,但CD4+T/CD8+T比值增高,CD4+CD25+Foxp3+T细胞增多;B7-H4组混合培养上清液中TGF-β1含量为(259.25±32.78)pg/mL,空白对照组为(202.75±20.17)pg/mL。B7-H4对宫颈癌患者外周血活化T细胞凋亡无明显影响。结论 B7-H4使宫颈癌患者外周血活化T细胞被阻滞于G2期,S期细胞明显减少;B7-H4抑制CD4+T和CD8+T细胞增殖,但对Foxp3+T细胞增殖和分泌TGF-β1可能有促进作用;B7-H4对T细胞凋亡无明显影响。B7-H4在抑制宫颈癌抗肿瘤细胞免疫中发挥作用,它可能成为宫颈癌免疫治疗的潜在靶点。; 张燕王婷婷徐曼黄文炼罗玮肖琳; 关键词：CD4+CD8+

PD-L1在人子宫颈癌细胞异常表达并促T细胞凋亡被引量：1: 2012年; 目的探讨人子宫颈癌中负性协同刺激分子PD-L1的表达和它与肿瘤浸润淋巴细胞的关系以及PD-L1融合蛋白促宫颈癌患者外周血活化T细胞凋亡的作用。方法采用免疫组化S-P法检测67例宫颈癌组织及20例正常宫颈组织中PD-L1的表达,分析PD-L1同临床病理特征的相关性,免疫荧光观察肿瘤浸润淋巴细胞数量,TUNEL法检测T细胞凋亡,体外实验将PD-L1融合蛋白细胞加入PHA刺激活化的宫颈癌患者外周血T细胞中共同培养,流式细胞术分析T细胞凋亡率和CD8^+/CD4^+T细胞比例。结论正常子宫颈组织不表达PD-L1;宫颈癌组织中PD-L1的表达率为70%。宫颈癌PD-L1的表达与宫颈癌浸润深度相关(P<0.05)。PD-L1阳性病例肿瘤局部浸润淋巴细胞存在凋亡且CD8^+T细胞数量明显减少;PD-L1融合蛋白组T细胞凋亡率明显高于抗PD-1组和空白对照组T细胞,分别为32.7%、18.3%和17.9%;CD8^+T/CD4^+T细胞的比值低于加入抗PD-1组和空白对照组,分别为0.864、0894和0.907。结论 PD-L1在子宫颈癌中高表达且与肿瘤浸润程度及肿瘤浸润淋巴细胞数量减少有关,PD-L1能促进活化的T细胞尤其是CD8^+T细胞的凋亡。; 陈瑜徐曼耿卫朴; 关键词：子宫颈癌 PD-L1 PD-1 肿瘤浸润淋巴细胞凋亡

灵芝多糖和当归多糖促进人外周血T淋巴细胞增殖和分泌IFN-γ被引量：43: 2012年; 目的探讨中药灵芝多糖和当归多糖对人外周血活化T淋巴细胞的免疫调节作用。方法分离健康人外周血T淋巴细胞并分为空白对照组、灵芝多糖组和当归多糖组,免疫荧光观察各组T细胞PI3K和Caspase-3蛋白的表达;MTT法检测培养72 h后各组T细胞的增殖水平;流式细胞术分析各组T细胞凋亡率和细胞周期变化;ELISA检测各组T细胞培养上清液的IFN-γ含量。结果灵芝多糖组和当归多糖组T细胞均表达PI3K,细胞增殖OD值均明显高于空白对照组(P<0.01,P<0.05);灵芝多糖组T细胞Caspase-3蛋白表达的平均光密度值明显低于空白对照组(P<0.05),T细胞凋亡率也低于空白对照组,分别为18.23%和29.74%;灵芝多糖组和当归多糖组T细胞培养上清液IFN-γ的含量明显高于空白对照组(P<0.05,P<0.05)。结论灵芝多糖和当归多糖均明显促进外周血T淋巴细胞增殖和分泌IFN-γ,灵芝多糖还能下调Caspase-3蛋白表达并抑制T淋巴细胞凋亡。; 耿卫朴徐曼罗祎王婷婷黄文炼陈瑜; 关键词：灵芝多糖当归多糖 PI3K IFN-Γ

PD-L1^＋ HeLa细胞对人外周血活化T细胞的免疫调节作用被引量：1: 2011年; 目的探讨人宫颈癌细胞表达PD-L1对人外周血T细胞的免疫调节作用。方法采用PD-L1质粒转染人宫颈癌HeLa细胞株,将PD-L1+HeLa细胞与PHA刺激活化的人外周血T淋巴细胞混合培养,MTT法检测T细胞的增殖水平,流式细胞术分析T细胞凋亡率和CD8+/CD4+T细胞比例;ELISA检测PD-L1+HeLa细胞与PHA刺激活化的人外周血T淋巴细胞混合培养上清液IFN-γ的含量。结果 MTT检测显示与PD-L1+HeLa混合培养组的T细胞增殖光密度值为(0.31±0.02),明显低于与PD-L1-HeLa混合培养组的T细胞和对照组T细胞,分别为[(0.62±0.02)和(0.59±0.03),P<0.01];T细胞凋亡率明显高于与PD-L1-HeLa混合培养组和对照组T细胞,分别为(32.7%、17.9%和18.3%);CD8+/CD4+T细胞比值稍低于PD-L1-HeLa混合培养组和对照组T细胞(分别为0.86、0.91和0.89);与PD-L1+HeLa混合的T细胞培养上清液IFN-γ的含量低于与PD-L1-HeLa混合培养组和对照组T细胞,分别为[(801.1±20.5)pg/ml、(1 006.2±30.2)pg/ml和(1 070.2±113.3)pg/ml,P<0.01]。结论 PD-L1明显抑制人外周血活化T细胞增殖促进其凋亡并下调其免疫功能。; 徐光旭徐曼耿卫朴陈瑜赵涌; 关键词：PD-L1 T细胞

B7-H4在人子宫颈癌的表达及其与肿瘤内浸润T细胞亚群的相关性研究被引量：8: 2012年; 目的:研究共刺激分子B7-H4在人子宫颈癌的表达及其与肿瘤内浸润的FOXP3+、CD4+T、CD8+T细胞数量和分泌细胞因子的关系。方法:采用SP免疫组织化学染色检测B7-H4在30例正常人宫颈组织、30例高级别宫颈上皮内瘤变(Cervical intraepithelial neoplasiaⅡ-Ⅲ,CINⅡ-Ⅲ)和67例子宫颈癌的表达;间接免疫荧光双标(Indirect immunofluorescentdouble-staining)观察肿瘤内浸润的FOXP3+、CD4+T、CD8+T细胞数量及其TGF-β1和IFN-γ分泌情况。结果:B7-H4不表达于正常人宫颈上皮,仅在部分瘤变宫颈上皮微弱表达;子宫颈癌B7-H4的阳性表达率为46%(31/67),显著高于正常人宫颈上皮和瘤变宫颈上皮(P<0.01,P<0.05);子宫颈癌B7-H4阳性组病灶内浸润的CD8+T细胞以及分泌IFN-γ的CD8+T数量显著低于B7-H4阴性组(P<0.001,P<0.035);B7-H4的表达与肿瘤内浸润的FOXP3+细胞、CD4+T细胞以及分泌TGF-β1的CD4+T细胞数量无关(P>0.05,P>0.05)。结论:B7-H4在人子宫颈癌细胞异常高表达,并与肿瘤内浸润的CD8+T细胞数量减少以及分泌IFN-γ减少有关,提示B7-H4在抑制肿瘤微环境的细胞免疫中发挥作用。; 王婷婷徐曼耿卫朴黄文炼陈瑜; 关键词：B7-H4 FOXP3 CD4+T细胞 CD8+T细胞子宫颈癌

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重庆市自然科学基金(CSTC2009BB5268)

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