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国家重点基础研究发展计划(2007CB707801): 作品数：24 被引量：140H指数：7; 相关作者：欧阳嘉李鑫连之娜陈牧徐勇更多>>; 相关机构：南京林业大学中国科学院南开大学更多>>; 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>; 相关领域：生物学化学工程医药卫生轻工技术与工程更多>>

利用根癌农杆菌T-DNA插入突变寻找参与漆酶葡萄糖阻遏的关键基因被引量：4: 2012年; 【目的】新型隐球酵母(Cryptococcus neoformans)是人类重要致病真菌,主要毒性因子之一漆酶的表达受葡糖糖阻遏,机制未知。本文拟寻找参与葡萄糖阻遏的关键基因。【方法】建立根癌农杆菌介导的转化方法(Agrobacterium tumefanciens-mediated transformation,ATMT)建立一个容量约200000的随即插入突变文库,在高浓度葡萄糖条件下从中筛选葡萄糖去阻遏的突变株。通过Southern确定突变株中T-DNA的拷贝数,利用反向PCR获得依赖葡萄糖的漆酶阻遏基因序列。【结果】筛选到了30株葡萄糖去阻遏突变株,Southern blot发现83%的葡萄糖去抑制突变株含有单个T-DNA拷贝。初步鉴定了可能参与漆酶阻遏的10个不同生物学功能基因,如参与碳水化合物的代谢,固醇的合成,几丁质的合成,GPI脂锚钩的合成等等。【结论】ATMT突变策略可以找到一些参与漆酶葡萄糖阻遏的关键基因,为理解漆酶在致病过程中的作用机制和工业改进漆酶活性提供参考。; 李中明潘皎朱旭东; 关键词：新型隐球酵母漆酶

玉米秸秆蒸爆渣的氨基酸辅助纤维素酶水解被引量：5: 2010年; 以商品纤维素酶C2730酶解玉米秸秆蒸汽爆破渣,研究了不同氨基酸、氨基酸浓度、温度对水洗蒸汽爆破渣纤维素酶水解的影响,优化纤维素酶水解条件,提高纤维素酶水解得率。实验结果表明,纤维素酶水解蒸汽爆破渣的优化氨基酸为苯丙氨酸,优化水解条件为每克纤维素酶用量15FPIU,苯丙氨酸质量浓度为1.5g/L,温度为50℃,水解时间为48h,还原糖和葡萄糖得率分别为51.38%和36.78%。; 陈牧连之娜李鑫; 关键词：纤维素酶酶水解氨基酸

纤维素结合域的研究进展被引量：8: 2008年; 纤维资源是生物界最为丰富的有机碳源,有效酶解植物纤维资源对于减缓能源枯竭和食品危机具有重要意义。然而,天然纤维素结构上的复杂多样性为酶的攻击和可及带来巨大困难。为了克服这一问题,自然界中能够利用纤维原料的酶大多由相对独立的两种结构域、催化结构域(CD)、纤维素结合结构域(CBM)组成。其中,CBM有助于酶与不溶性底物的结合,在纤维原料酶解中具有重要作用。CBM所具备的特殊的底物特异性不仅对于提高酶与纤维的可及度,增强纤维素酶解效率,揭示纤维素酶解机制具有重要意义,而且应用在基因工程产品的分离纯化,酶制剂的品质改善及细胞固定化等领域也有很好的发展前景。本文就近年来CBM的研究现状及其发展前景进行了综述。; 欧阳嘉李鑫王向明严明徐琳; 关键词：纤维素结合域纤维素酶特异性

球毛壳菌(Chaetomium globosum)NK102纤维素酶基因及其表达条件被引量：1: 2013年; 【目的】生物质的利用是当前生物技术研究的一个热点。本小组分离到一株高效降解纤维素球毛壳菌(Chaetomium globosum)NK102,本文拟探索研究此菌的纤维素酶表达系统并寻找影响酶基因表达的关键因素。【方法】通过对NK102测序,本文界定了球毛壳菌NK102的主要纤维素酶编码基因,使用数字基因表达谱升级版(RNA-Seq)的方法得到纤维素酶基因的表达差异,然后观察了营养、物理条件下纤维素酶基因表达和酶活性变化的情况。【结果】发现随着培养时间的延长,纤维素酶基因整体上表达量升高。在所选基因中,外切葡聚糖酶、纤维二糖脱氢酶和内切葡聚糖酶基因(cbh1,cdh和egl1)的表达量最高。糖代谢的负调控因子ACE I和CreA的随时间表达量均降低,而Hap2/3/5复合体的表达量反而升高。之后检测了不同碳源培养基对纤维素酶基因表达量和酶活性的影响,发现葡萄糖为强阻遏因子,纤维二糖为其诱导物,而山梨醇没有影响。特别是,我们发现光照也影响纤维素酶基因的表达,黑暗条件明显抑制酶基因的表达。【结论】转录组学的方法可以初步探索纤维素酶表达的规律,酶基因的表达受到营养、物理条件的影响。本研究为揭示球毛壳菌降解纤维素分子机理和阐释生物质糖代谢途径提供了有用参考。; 胡阳毕建男郝晓冉陈煌潘皎朱旭东; 关键词：纤维素酶

改良木聚糖酶辅助漂白芦苇浆的工艺研究被引量：2: 2012年; 采用分子改良后的木聚糖酶对芦苇浆进行生物预处理,考察了改良木聚糖酶辅助漂白的效果。结果表明,酶预处理可以降低CEH三段漂白中氯化C段的氯气用量60%。改良木聚糖酶预处理辅助漂白芦苇纸浆最佳条件为:pH为7.0,温度60℃,浆浓(质量分数)5%,酶用量12μmol/(min.g),预处理时间60 min。在此条件下C段氯用量降至对照的40%时,酶处理漂后样品白度可达到84.0%(ISO),高出对照样的白度3.7%(ISO)。改良木聚糖酶预处理还能够改善纸浆漂后样的物理性能。; 欧阳嘉连之娜林惊雷李鑫宋向阳; 关键词：芦苇浆预处理生物漂白

低温石油烃降解菌LHB16的筛选及降解特性被引量：4: 2010年; 自盘锦油田低温环境土样中分离到1株低温菌,该菌能以石油烃为唯一碳源和能源。经形态学、生理生化和16S rDNA序列鉴定:菌株LHB16为嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)。紫外分光光度法测定该菌在含石油0.5%(w/v)的无机盐培养基中,20℃,振荡培养10 d,降解率达80.16%。经传代培养数代,降解性能稳定。GC-MS分析表明烷烃C15～C32被完全降解。菌株LHB16在低温地区石油污染的生物治理中有良好的应用前景。; 李兵张庆芳窦少华孙子羽王羽迟乃玉; 关键词：石油降解 STENOTROPHOMONAS

碱法-酶法处理玉米秸秆的制糖工艺研究被引量：13: 2010年; 以天然玉米秸秆为原料研究碱法-酶法制糖工艺,考察了碱预处理条件对样品组分变化、酶解效率和总糖得率的影响。试验结果表明,碱预处理具有良好的木素脱除效果,但会伴随半纤维素的损失,为了获得高的总糖得率,必须适当降低预处理强度。试验范围内固液比1∶10,预处理条件为1.5%NaOH,80℃下反应1h时,总糖得率最高。固相中保留了近100%纤维素和69.58%半纤维素,木素去除率为54.84%。预处理样品在底物质量浓度30g/L,酶用量为纤维素酶15μmol/(min·g),纤维二糖酶30μmol/(min·g),水解48h,纤维素酶解得率从24.18%上升至71.29%,半纤维素酶解得率达到78.85%。整个工艺总糖得率为66.86%,较未处理样品提高46.66%。; 欧阳嘉李鑫董郑伟连之娜; 关键词：玉米秸秆总糖酶水解

Chloride channel-dependent copper acquisition of laccase in the basidiomycetous fungus Cryptococcus neoformans被引量：2: 2010年; The CLC chloride channel gene CLC-A of the pathogen yeast Cryptococcus neoformans was previously reported to be critical for multicopper laccase activity and growth at an elevated pH.This study reports that copper homeostasis was impaired in the clc-a mutant.This was demonstrated by the substantial decrease of the intracellular quantity of copper under copper-limited growth as determined by flame atomic absorption spectrometry.CLC-A is a critical factor in copper homeostasis which is required for copper acquisition of laccase in C.neoformans.; ZHU ChangWei1,JIANG Nan1,XIAO DongGuang2,PAN Jiao1 & ZHU XuDong1 1 State Key Program of Microbiology and Department of Microbiology,College of Life Sciences,Nankai University,Tianjin 300071,China; 关键词：CHLORIDE LACCASE COPPER HOMEOSTASIS CRYPTOCOCCUS

汽爆玉米秸秆渣诱导产纤维素酶及其水解特性被引量：11: 2009年; 为提高玉米秸秆的生物降解效率,研究了汽爆处理玉米秸秆渣对纤维素酶的诱导作用及所产纤维素酶的水解特性。结果表明:玉米秸秆采用汽爆处理可以去除大量的半纤维素成分,获得的汽爆渣对里氏木霉NL02合成纤维素酶的诱导作用良好,以10 g/L的汽爆渣为碳源发酵7 d滤纸酶活达到1.90 U/mL。发酵5 d获得的汽爆酶水解效果最佳,当酶用量25 U/g,底物质量浓度50 g/L条件下,水解24 h酶解得率达到95.9%,水解48 h葡萄糖产率为76.4%。当汽爆渣质量浓度为80 g/L,酶用量为15 U/g时,48 h酶解效率达到90.1%,葡萄糖产率为62.9%。; 欧阳嘉董郑伟谢喆李鑫宋向阳; 关键词：纤维素酶水解玉米秸秆

新型隐球酵母氯离子通道在阳离子内稳态中的趋异作用: 2012年; 新型隐球酵母Cryptococcus neoformans有两个变种(varieties),即grubii和neoformans。目前研究最多的两个菌株H99(血清型A)和JEC21(血清型D)分别代表这两个变种,两者的毒性差别显著,为研究新型隐球酵母菌株间毒性的进化提供了良好模型。通过比较JEC21的clc1-突变体Tx1与早先鉴定的H99clc1-菌株Mlac3发现,JEC21CLC1同样决定铜离子的吸收。Tx1中丧失的漆酶活力可以通过外源Cu2+的加入得以恢复,而漆酶基因LAC1的转录与野生型相比没有明显变化,此外铜离子转运蛋白基因CTR4在Tx1中的转录水平有着明显的上调,并且不能被外源铜离子抑制--这说明Tx1细胞中缺乏铜离子。另外实验发现,Tx1对1mol/L Na+或者K+十分敏感,生长受到明显的抑制,而Mlac3则不受影响。同时,与Mlac3不同,Tx1在pH8.0的条件下仍然能够正常生长。实验表明,CLC1在新型隐球酵母不同变种中对于Cu2+存在相同调节作用,但是对于Na+、K+、H+的调节作用在JEC21与H99菌株间存在差异。这个工作对于解释H99和JEC21间的毒力差异提供了证据。; 李东张笑娇杨娇潘皎朱旭东; 关键词：漆酶阳离子

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