国家自然科学基金(31101526)
- 作品数：5 被引量：15H指数：3
- 相关作者：高志红章镇侍婷王培培孙海龙更多>>
- 相关机构：南京农业大学江苏省农业科学院中国科学院植物研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金公益性行业(农业)科研专项中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 果梅PmKNAT2基因全长cDNA克隆及表达分析被引量：4
- 2014年
- 【目的】从‘大嵌蒂’果梅中克隆PmKNAT2,并对其结构特征及表达模式进行分析,为研究果梅雌蕊败育的分子机理和分子育种奠定基础。【方法】在NCBI中查找与果梅相似性很高的桃KNOPE2(KNAT2的同源基因)序列(EF093491),根据桃的KNOPE2序列设计特异引物;采用改良CTAB法提取‘大嵌蒂’果梅花芽总RNA;通过RT-PCR和RACE技术获得基因cDNA序列全长;使用DNAMAN软件进行序列拼接;利用NCBI数据库中的BLASTn和BLASTp程序进行相似性分析;通过生物信息学方法分析结构特征;用DNAMAN软件分析基因的ORF和氨基酸序列;MEGA4.0软件进行系统进化树的构建;利用Bioxm2.6推测分析蛋白分子量和等电点;根据NCBI中Conserved Domains程序进行蛋白质保守域结构预测;用ExPaSy提供的在线SOPMA程序进行蛋白质二级结构预测;构建PJIT166-PmKNAT2-GFP的融合亚细胞定位表达载体,采用基因枪法转化洋葱表皮细胞,经暗培养后在激光共聚焦显微镜下观察;利用实时荧光定量RT-PCR研究其表达模式,分析其在‘大嵌蒂’花芽发育不同时期、不同器官中的表达特性。【结果】在‘大嵌蒂’果梅中获得一个KNAT2的同源基因,命名为PmKNAT2,其cDNA全长为1 402 bp,5'UTR47 bp,3'UTR 293 bp,编码区全长为1 062 bp,编码353个氨基酸,预测蛋白质分子量为40.41 kD,理论等电点为4.85。蛋白结构分析表明该基因编码的氨基酸具有2个结构域,MEINOX结构域(KNOXⅠ和KNOXⅡ2个亚结构域)和HD(homomeodomain)结构域,属于KNOX蛋白;相似性分析发现该基因与GenBank中其它来源的KNOX蛋白序列的相似性为50%—100%;系统进化树分析显示果梅PmKNAT2与桃KNOX聚为一类,表明与其亲缘关系最近。二级结构预测结果表明PmKNAT2所编码蛋白由47.14%的α-螺旋(Alpha helix)、3.43%的β-转角(Beta turn)、3.14的β-折叠(Extended strand)和46.29%的随机卷曲(Random coil)组成。亚细胞定位结果显示该基因编码的蛋白定位于细�
- 孙海龙宋娟高志红倪照君章镇
- 关键词：果梅雌蕊败育基因克隆
- KNOX Ⅰ类基因在雌蕊发育中的作用被引量：2
- 2012年
- 雌蕊由心皮和花柱组成并最终发育成果实,其发育对作物的产量、质量都有决定性的影响。因此,对雌蕊败育相关基因的研究是植物生物学研究领域的热点,KNOX家族是植物中的5个同源异型盒基因家族之一,分为Ⅰ类和Ⅱ类KNOX亚家族,主要在植物茎顶端分生组织中特异表达,是分生组织发生与维持所必需的关键基因,调控与器官发生相关的细胞分化,最终影响侧生器官的形态建成、该文综述了与雌蕊发育相关的KNOX家族基因功能,重点对KNOX家族中的KNOX Ⅰ类基因进行了阐述。
- 孙海龙侍婷章镇高志红
- 关键词：雌蕊发育相关基因KNOX
- 果梅自交不亲和相关基因型(S、SFB/SLF)研究进展被引量：2
- 2012年
- 果梅(Prunus mume Sieb.etZucc.)原产于中国,为蔷薇科典型的配子体自交不亲和(GSI)品种。GSI至少由S位点的花柱S(S-RNase)基因和花粉S(SFB/SLF)基因决定。主要介绍了果梅GSI决定基因S基因和SFB/SLF基因的研究现状,并对基因型的鉴定技术AS-PCR的理论基础进行了介绍,对目前国内外已经鉴定出基因型的果梅品种进行了总结,这些将对果梅品种授粉树的合理配置和杂交育种的亲本选择具有重要的意义。
- 王培培高志红章镇
- 关键词：果梅自交不亲和S基因
- 桃PpPGIP1启动子的分离与功能分析被引量：3
- 2012年
- 通过染色体步移法分离桃[Prunus persica(L.)Batch]PpPGIP1 上游启动子序列,利用生物信息学方法对其功能进行初步预测;构建该启动子植物表达载体并通过农杆菌介导法转化烟草,研究不同激素诱导条件下GUS蛋白瞬时表达情况;并利用实时荧光定量 RT-PCR 技术分析了PpPGIP1在水杨酸(SA)、茉莉酸甲酯(MeJA)、脱落酸(ABA)和 1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)诱导下的表达特性,获得了长度为1018bp的桃PpPGIP1启动子序列。该序列与梅和中国李PGIP启动子序列的同源性分别为90%和89%;该启动子序列含有SA、MeJA、ABA和ETH诱导调控相关的抗病与胁迫顺式作用元件;ABA和ACC可以诱导PpPGIP1启动子调控GUS基因的表达;实时荧光定量RT-PCR分析结果表明:SA、MeJA、ABA和ACC都可以诱导桃叶片中PpPGIP1的表达。PpPGIP1可能参与SA、MeJA、ABA和ETH的信号转导,在桃抵抗病原菌和逆境胁迫方面起着非常重要的作用。
- 王秀云张计育古咸彬高志红章镇俞明亮张妤艳
- 关键词：调控元件表达载体构建
- 中国原产果梅自交亲和变异品种花粉决定基因SFB的插入突变被引量：5
- 2012年
- 果梅是配子体自交不亲和树种,但在长期进化过程中也出现了自交亲和品种。以果梅典型的自交不亲和品种‘南高’和自交亲和品种‘甲州小梅’为对照,采用田间自交授粉试验对原产于中国的‘四川白梅’和‘长农17’两个果梅品种进行了自交亲和性鉴定,结果表明:其自花授粉坐果率分别为30.73%和16.27%,属于自交亲和品种。进一步通过AS-PCR分析发现花粉SFB基因存在一段插入序列,造成了分子水平的基因突变。推测该基因的突变使‘四川白梅’和‘长农17’SFB功能发生改变,从而自交亲和。
- 王培培侍婷高志红章镇庄维兵
- 关键词：果梅自交亲和性AS-PCR
