天津市高等学校科技发展基金计划项目(20060122)
- 作品数：7 被引量：9H指数：2
- 相关作者：胡海龙韩瑞发孙岩吴长利任海林更多>>
- 相关机构：天津市泌尿外科研究所天津医科大学吉林大学第一医院更多>>
- 发文基金：天津市卫生局科技基金天津市高等学校科技发展基金计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 膀胱移行细胞癌组织中E2F3、C-myc和Bcl-2的表达及其与膀胱癌相关性研究
- 2012年
- 目的:探讨膀胱移行细胞癌(BTCC)组织及正常膀胱黏膜组织中E2F3基因及其下游相关基因C-myc和Bcl-2的表达情况,同时分析E2F3、C-myc和Bcl-2的表达与临床病理参数之间的关系及3个指标之间的相关性,初步揭示BTCC发生、发展的分子机制。方法:检测不同病理分期及组织分级的BTCC标本和正常膀胱黏膜中E2F3、C-myc与Bcl-2蛋白的表达情况,分析E2F3 mRNA在不同组织中的表达情况,探讨BTCC组织中E2F3、C-myc与Bcl-2蛋白的表达之间的关系及三者与临床病理参数之间的关系。结果:E2F3表达阳性率在膀胱移行细胞癌与正常膀胱黏膜中的差异有显著性(P<0.05),且与肿瘤分级和分期密切相关(P<0.01)。肿瘤组织中E2F3 mRNA阳性表达而正常黏膜中E2F3 mRNA呈阴性表达。C-myc及Bcl-2在移行细胞癌组及正常膀胱黏膜中的表达率均有显著性差异(P<0.01)。其中移行细胞癌组C-myc表达与病理分级、组织分期有关(P<0.01),Bcl-2的表达率只与病理分级相关(P<0.01)。结论:E2F3与膀胱癌的恶性程度密切相关,其不仅是膀胱癌的诊断与预后指标,而且为膀胱癌的基因靶向治疗提供理论依据。E2F3与靶基因C-myc和Bcl-2的表达密切相关,E2F3可能通过与C-myc及Bcl-2协同作用共同参与了膀胱移行细胞癌的发生、发展。
- 陈昌盛吴长利胡海龙孙岩陈涛
- 关键词：膀胱移行细胞癌E2F3C-MYCBCL-2
- E2F3及C-myc在膀胱移行细胞癌组织中的表达及其相关性研究被引量：1
- 2010年
- 目的:探讨E2F3及C-myc在膀胱癌组织中表达的相互关系及其与膀胱癌恶性生物学行为之间的关系。方法:应用免疫组织化学方法检测不同病理分期及组织分级的BTCC标本和正常膀胱黏膜中E2F3及C-myc蛋白的表达情况,应用免疫组化自动分析系统进行分析,结果以积分光密度表示。结果:膀胱移行细胞癌组织中E2F3及C-myc蛋白的表达阳性率明显高于正常膀胱黏膜,两组间有显著性差异(P<0.05),同时E2F3的表达率与膀胱癌的分级和分期密切相关(P<0.05;P<0.01);C-mvc的表达率与膀胱癌的分级和分期密切相关(P<0.01;P<0.01)。膀胱移行细胞癌中E2F3与C-myc的表达呈正相关。结论:E2F3及C-myc与膀胱癌的恶性程度密切相关,同时二者之间的表达密切相关,二者不仅可以作为膀胱癌的诊断与预后指标,而且为以E2F3为靶点的膀胱癌的基因治疗提供理论依据。
- 胡海龙韩瑞发孙岩刘利维任海林梁恩利王春阳吴长利
- 关键词：E2F3C-MYC膀胱移行细胞癌
- E2F3基因腺相关病毒干扰载体的构建被引量：4
- 2009年
- 目的:构建针对E2F3基因的腺相关病毒干扰穿梭质粒载体,为进一步包装能够表达干扰序列的病毒奠定基础。方法:通过已经合成的pRNAT-U6.1-siE2F3/Neo干扰质粒载体,进行限制性内切酶Mlu酶切,将干扰片段克隆入线性质粒pAAV-MCS中,构建具有表达沉默E2F3基因的RNA干扰穿梭质粒。通过Bgl Ⅱ及Mlu单酶切,BamH1和HandⅢ双酶切、PCR鉴定及基因片段序列分析验证构建是否成功。结果:pAAV-siE2F3线性化后,片段大小约6 300bp;以Mlu为两边酶切位点设计的引物对重组质粒进行PCR,可获得的产物大小1 700bp;应用ITR专用引物进行重组质粒的PCR后证实本研究所构建的重组质粒ITR片段存在,大小约3 500bp,上述指标均与预期设计结果相符。基因测序结果表明插入序列无基因突变,序列完整。结论:穿梭质粒载体的成功构建,为进一步包装能够表达针对E2F3基因干扰序列的腺相关病毒,进一步研究E2F3基因在肿瘤中的功能奠定基础。
- 胡海龙韩瑞发孙岩刘利维任海林梁恩利王春阳吴长利
- 关键词：RNAIE2F3
- pRNAT-U6.1/Neo系统在E2F-3基因RNA干扰载体构建中的应用被引量：5
- 2009年
- 目的:构建针对E2F-3基因的siRNA表达载体。方法:化学合成3对编码短发夹RNA序列的、靶向E2F-3基因的寡核苷酸链,各64个碱基,退火、克隆到经BamHI、HindⅢ双酶切的pRNAT-U6.1/Neo载体上,重组构建RNAi质粒。通过双酶切、PCR鉴定及基因片段序列分析验证构建效果。结果:重组构建的pRNAT-U6.1/Neo载体经PCR分析及插入基因片段序列分析,结果表明64个碱基成功插入到预计位点,并且序列完全一致,插入序列无点突变位点。结论:载体的成功构建为进一步研究E2F-3基因在膀胱肿瘤中的作用奠定了基础,为进一步以其为靶点进行膀胱癌细胞系体外实验创造了条件。
- 胡海龙吴长利孙岩张文岚韩瑞发
- 关键词：RNA干扰质粒
- E2F3基因沉默载体pRNAT-U6.1-siE2F3/Neo的构建及表达被引量：1
- 2010年
- 【目的】构建针对E2F3基因的shRNA表达载体,通过脂质体进行膀胱癌细胞内转染,监测转染效率。【方法】通过软件设计针对E2F3基因的寡核苷酸链,化学合成一对编码短发夹RNA序列,长度为64个碱基。核苷酸链经退火,克隆到经BamHI、HindⅢ双酶切的pRNAT-U6.1/Neo载体上,构建针对E2F3基因的RNA干扰质粒。通过双酶切、PCR鉴定及基因片段序列分析验证构建效果。通过不同浓度的Lipofectamin 2000及干扰质粒混合物进行膀胱癌细胞系5637细胞转染,通过绿色荧光的表达程度摸索出细胞最佳转染浓度及转染时间。【结果】重组构建的pRNAT-U6.1-siE2F3/Neo载体经PCR分析及插入基因片段序列分析,结果表明64个碱基成功插入到预计位点,并且序列完全一致。Lipofectamin 2000能够有效的进行pRNAT-U6.1-siE2F3/Neo质粒的转染。【结论】载体的成功构建及膀胱癌细胞系的高效转染,为进一步研究E2F3基因在膀胱肿瘤中的功能奠定基础。
- 胡海龙韩瑞发孙岩刘利维任海林梁恩利吴长利
- 关键词：RNAIE2F3
- E2F3在膀胱癌组织中的表达及其与肿瘤临床特征的关系
- 2010年
- 目的:探讨E2F3在膀胱移行细胞癌组织中的表达情况及其与临床病理参数之间的关系。方法:应用免疫组织化学方法检测不同病理分期及组织分级的膀胱移行细胞癌标本和正常膀胱黏膜中E2F3蛋白的表达情况,应用免疫组化自动分析系统进行分析,结果以积分光密度(integrated optical density,IOD)表示;应用RT-PCR的方法半定量分析E2F3mRNA在不同组织中的表达情况。结果:E2F3表达阳性率在膀胱移行细胞癌组织中为32.8%,而正常膀胱黏膜组织无表达。E2F3的表达率在膀胱癌的不同分级和分期间差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。膀胱移行细胞癌组织中E2F3表达的IOD值为6.5698±3.2275,正常膀胱黏膜组织E2F3无表达,且E2F3的表达程度与膀胱癌的分期、分级差异有统计学意义(P<0.01)。结论:E2F3与膀胱癌的恶性程度密切相关,其不仅是膀胱癌的诊断与判断预后指标,而且是以E2F3为靶点的基因治疗提供理论依据。
- 胡海龙吴长利孙岩张文岚韩瑞发
- 关键词：膀胱肿瘤移行细胞转录因子逆转录聚合酶链反应
- Fascin及VEGF在膀胱移行细胞癌中的表达及意义被引量：1
- 2010年
- 目的:探讨球形肌动蛋白交联蛋白Fascin与血管内皮生长因子(VEGF)在膀胱移行细胞癌(BTCC)组织的表达及与BTCC生物学行为的相关性。方法:采用免疫组织化学SABC法分别检测56例BTCC组织及10例正常膀胱黏膜组织Fascin、VEGF的阳性表达情况。结果:Fascin蛋白及VEGF在10例正常膀胱组织中均不表达,而在56例BTCC组织中阳性表达率分别为73.21%和60.71%,2种组织间Fascin、VEGF表达比较差异均有统计学意义(均P<0.01);随着膀胱癌病理分级和临床分期的增高,Fascin及VEGF表达均增高。Fascin及VEGF阳性表达率在复发患者均高于初发患者,差异有统计学意义(均P<0.01)。在BTCC组织中Fascin与VEGF表达呈正相关(r=0.4769,P<0.01)。结论:Fascin可作为判断BTCC生物学行为的新参考指标,Fascin及VEGF协同促进BTCC的浸润及转移,两者为临床开展肿瘤防治新途径提供新的理论依据。
- 李志辉胡海龙王建民韩瑞发
- 关键词：膀胱肿瘤血管内皮生长因子类FASCIN蛋白
