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Regularity of hypoxia inducible factor 1 alpha expression in acute myocardial ischaemia in rats被引量：2: 2007年; Acute myocardial ischaemia is a common acutedisease and a common cause of sudden death.However,it is difficult to diagnose in patients who diedwithin 6 hours after the onset of myocardial ischaemia.The occurrence of sudden cardiac death often haspathological basis of primary heart diseases,which maylead to a series of changes in metabolism and geneexpression.Recent research found that hypoxia induciblefactor 1 alpha (HIF-1α) is a sensitive marker of hypoxia;its gene expression is upregulated within several minutesafter acute myocardial ischaemia,followed by; LI Zhi-gangWANG Jiang-fengCHENG Jian-dingLIU Yan-weiXING Hao-weiWANG YongCHEN Yu-chuan; 关键词：肌肉萎缩窒息免疫化学

CD4^+CD25^+调节性T细胞的体外扩增被引量：6: 2008年; 【目的】探讨有效的体外培养扩增CD4+CD25+Treg的方法。【方法】收集健康志愿者外周血5例,免疫磁珠法分选出CD4+CD25+Treg。将实验分为3组,第1组在CD4+CD25+Treg中加入100nmol/Lrapamycin(1μg/mL)和包被了CD3/CD28单抗的磁珠培养3周,第8天开始加入1000U/mL的IL-2,第2组培养条件除不加rapamycin外其余与第1组相同,第3组培养细胞为CD4+CD25-T细胞,培养条件同第1组。培养第7、14、21天收集细胞计数,第21天收集细胞行流式细胞术三标法检测CD4、CD25、FOXP3的表达。MTT法检测体外扩增的CD4+CD25+Treg对自体和异体的CD4+T细胞增殖的抑制作用。【结果】三组细胞均有明显的扩增。加rapamycin培养的CD4+CD25+Treg细胞的扩增率比不加rapamycin扩增倍数低,但细胞的纯度明显增加。CD4+CD25-T细胞组在培养第1周扩增迅速,从第2周开始增殖减慢,其中CD4+CD25+Treg细胞的比例较培养前无明显的差别。三组至第3周时扩增倍数分别为89±21、338±78、216±55(F=484.655,P<0.0001),细胞的纯度分别为84.32%±4.62%、34.04%±5.78%、0.68%±0.39%(F=24.660,P<0.0001)。体外抑制实验显示体外扩增的CD4+CD25+T细胞对自体和异体的CD4+T细胞增殖均有明显的抑制作用,并且随着效靶比浓度的降低而降低。在CD4+T/Treg比例为8:1、4:1、2:1、1:1时对自体CD4+T细胞的抑制率分别为9.65%、16.43%、28.75%、55.34%,对异体CD4+T细胞的抑制率分别为6.43%、14.72%、26.47%、50.25%,而且在各浓度梯度其抑制作用在自体和异体之间均无明显的差异。【结论】我们采用rapamycin+CD3/CD28单抗标记的磁珠+IL-2在体外成功扩增了CD4+CD25+Treg,其扩增的倍数为89.4±20.53,具有免疫抑制功能,有望进一步应用于临床。; 史艳侠何伟彭柔君姜文奇; 关键词：CD4^+CD25^+TREG 体外扩增 RAPAMYCIN

CD4＋CD25＋Treg细胞的分选、表型鉴定及Foxp3表达鉴定: 2010年; 目的为验证从C57BL／6小鼠脾脏中分离出高纯度CD4＋CD25＋Treg细胞及证实CD4＋CD25＋Treg细胞中Foxp3基因的表达。方法使用免疫磁珠分选出CD4＋CD25＋Treg细胞，流式细胞仪检测纯度；使用TRIZOL抽提Foxp3基因mRNA，使用RT—PCR方法逆转录出Foxp3基因的cDNA。结果从C57BL／6小鼠脾脏中分离出了纯度达到90％CD4＋CD25＋Treg。进一步应用RT—PCR技术克隆出Foxp3的cDNA，通过凝胶电泳证实了克隆出了Foxp3的cDNA。结论使用免疫磁珠方法能够分离出C57BL／6小鼠CD4＋CD25＋Treg细胞，并进行了Foxp3基因表达的鉴定。; 韩文杰史艳侠; 关键词：免疫磁珠 CD4+CD25+TREG细胞 FOXP3基因

使用FLAG标签肽及慢病毒载体共同筛选小鼠foxp3基因RNA干扰的有效靶点被引量：6: 2007年; 【目的】筛选高效的foxp3RNA干扰的靶点用于阻断CD4+CD25+Treg细胞的免疫抑制功能。【方法】使用oligoengine软件设计foxp3基因shRNA序列,化学合成法合成4条shRNA序列,构建含foxp3的靶序列的慢病毒载体;构建出表达FLAG融合蛋白和目的基因的工具细胞293T细胞用于筛选RNA干扰的有效靶点。【结果】成功包装了4条foxp3基因靶序列相应的慢病毒颗粒;成功构建了表达融合蛋白和目的基因的293T工具细胞;在工具细胞上筛选出了2条RNAi效率分别为91.3%和95.6%的有效靶点。【结论】使用FLAG融合蛋白和慢病毒载体能够筛选出Foxp3基因的RNAi最佳靶点。; 史艳侠韩文杰彭柔君张景航黄慧强姜文奇; 关键词：FOXP3

B-NHL患者NK细胞中CD16ζ表达及利妥昔单抗与LAK细胞的联合抗瘤作用被引量：4: 2007年; 背景与目的:自然杀伤细胞(nature killer cell,NK)是抗体依赖细胞介导的细胞毒作用的主要效应细胞,肿瘤患者普遍存在NK细胞活化功能的缺陷可能会影响单克隆抗体的治疗效果。因此如能逆转NK细胞的CD16ζ链信号转导的功能缺陷,并与单克隆抗体联合免疫治疗,可能会产生协同抗肿瘤作用。本研究的目的是了解B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-cellnon-HodgkinI's lymphoma,B-NHL)患者是否存在NK细胞的活化障碍,体外白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)是否能完全逆转其活化障碍,并观察利妥昔单抗与LAK细胞联合对肿瘤细胞的杀伤作用。方法:使用密度梯度离心方法分别分离69例B-NHL患者和30例健康志愿者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),将两种PBMC在体外与1000U/mlIL-12共同培养制备LAK细胞,流式细胞仪检测PBMC和LAK细胞中CD16ζ链的阳性率和平均荧光强度。流式细胞仪检测Raji细胞表面CD20的表达;AnnexinⅤ/PI方法检测利妥昔单抗单药对Raji细胞的促凋亡作用,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放实验进行杀伤活性的检测。结果:在B-NHL组和健康对照组,CD56+细胞表达CD16ζ链的阳性率为(63.3±16.4)%、(97.8±3.1)%(P<0.001),CD16ζ链MFI值分别为1.3±1.3和3.6±1.7(P<0.001)。在体外1000U/ml的IL-2共培养的LAK细胞中,两组CD16ζ链的阳性率分别为(99.3±4.1)%和(99.7±3.9)%,其MFI值分别为29.2±12.5和31.4±13.8,均无显著性差异(P=0.15和P=0.44)。40μg/ml利妥昔单抗可以完全结合细胞表面CD20抗原,在24h时才开始出现对Raji细胞的明显的凋亡作用。利妥昔单抗与LAK细胞联合对Raji细胞的杀伤率在不同的浓度组均明显高于不加利妥昔单抗组(P<0.05)。LAK细胞与Herceptin(40μg/ml)联合的杀伤率与不加Herceptin组相比,在各效靶比浓度梯度均无明显提高(P>0.05)。LAK细胞与利妥昔单抗联合对Jurket细胞的杀伤率在各效靶比浓度梯度均与不加利妥昔单抗�; 史艳侠张晓实夏建川李永强徐瑞华韩文杰张景航管忠震姜文奇; 关键词：利妥昔单抗 LAK细胞

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国家自然科学基金(30500610)

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