国家高技术研究发展计划(2012AA021601) 作品数:8 被引量:38 H指数:3 相关作者: 俞晓平 杨倩倩 刘光富 王正亮 伊廷双 更多>> 相关机构: 中国计量学院 中国科学院 更多>> 发文基金: 国家高技术研究发展计划 浙江省自然科学基金 国家重点基础研究发展计划 更多>> 相关领域: 生物学 农业科学 更多>>
灰飞虱Bursicon基因的克隆、序列分析及在不同发育阶段的表达 被引量:2 2012年 Bursicon是通过G蛋白受体调节昆虫表皮硬化及展翅的功能蛋白,它在昆虫蜕皮后的表皮硬化过程中起着关键作用。为探讨灰飞虱Laodelphax striatellus的bursicon的功能,利用RT-PCR和RACE技术克隆获得1126bp的bursicon α和761bp的bursicon β全长序列,将其分别命名为Lsburs-α和Lsburs-β。生物信息学分析表明:Lsburs-α开放阅读框长483bp,编码160个氨基酸,该蛋白具有2个N-豆蔻酰化位点、3个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点以及2个蛋白激酶C磷酸化位点。Lsburs-β开放阅读框长417bp,编码138个氨基酸,该蛋白具有2个N-豆蔻酰化位点、3个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点以及1个酪氨酸激酶磷酸化位点。qRT-PCR结果表明:Lsburs-α和Lsburs-β在灰飞虱各龄期均有转录表达,并在若虫期随龄期增加呈上升趋势,在羽化期达到峰值,成虫期表达量逐渐降低。结果提示bursicon与灰飞虱蜕皮后的外表皮硬化关系密切。本文结果为深入研究bursicon的功能、受体调节和信号通路等奠定了基础。 杨科 许益鹏 董胜张 俞晓平关键词:灰飞虱 BURSICON 同源性分析 基因表达 实时荧光定量PCR 透明颤菌血红蛋白基因在淀粉酶产色链霉菌中的表达及对合成丰加霉素的影响 被引量:2 2013年 【目的】丰加霉素(Toyocamycin)是核苷类抗生素家族的重要成员,其在农业植物病害防治领域具有巨大的应用价值。为改善丰加霉素生产菌淀粉酶产色链霉菌(Streptomyces diastatochromogenes 1628)发酵过程溶氧限制,旨在实现vgb在S.diastato-chromogenes 1628中的表达以促进丰加霉素的生物合成。【方法】首先以gfp为报告基因检测红霉素抗性基因启动子Perm*在S.diastatochromogenes 1628中的转录活性,再利用PermE*实现vgb的异源表达。【结果】在荧光显微镜下,重组菌1628-GFP菌丝可发出稳定明亮的绿色荧光,表明启动子PermE*在菌株1628中可有效启动外源基因的表达;通过一氧化碳结合差光谱分析显示VHb具有生物学活性;摇瓶实验表明:与原始菌株相比,重组菌可促进丰加霉素产量的提高,在中度和高度限氧条件下促进效果尤为明显,提高幅度分别为48.9%和104.5%。PCR和发酵效价检测显示重组菌具有良好的遗传稳定性。【结论】成功实现了vgb在S.diastatochromogenes 1628中的表达,有效提高了其丰加霉素的合成水平,为丰加霉素的工业化生产提供了基础条件。 马正 刘金秀 申屠旭萍 边亚琳 俞晓平关键词:绿色荧光蛋白 透明颤菌血红蛋白 Metabarcoding技术在植物鉴定和多样性研究中的应用 被引量:11 2013年 目前植物学研究已进入后植物志时代,iFlora的实现需要以传统植物分类学及相关研究为基础,整合基于高通量测序的DNA条形码(DNA barcoding)技术并开发便携式快速鉴定仪器及构建信息平台。传统植物鉴定多基于形态学分类,而近年来快速发展的DNA条形码快速鉴定技术被各界分类学家认可,在植物鉴定中也被广泛应用。但DNA条形码技术仍存在一些问题亟待解决,如种的鉴定需要多个条形码的解析、Sanger测序平台无法处理混合样品。本文介绍了传统植物分类技术和DNA条形码技术在植物研究中的应用和遇到的瓶颈;并重点介绍了基于高通量测序的metabarcoding技术在植物鉴定及多样性研究中的应用及前景,及其与iFlora的关系。 唐敏 伊廷双 王欣 谭美华 周欣关键词:植物志 植物多样性 DNA条形码 不同饲料配方对茭白二化螟生长发育和繁殖的影响 2014年 筛选出适合茭白二化螟[Chilo suppressalis walker(Lepidoptera:Pyralididae)]最佳人工饲料配方,以期改进二化螟的室内饲养技术,为进一步研究二化螟人工繁殖技术提供依据.方法:以二化螟初孵幼虫为供试虫源,设计了4种人工饲料配方饲养二化螟,研究4种人工饲料配方对二化螟生长发育、存活、繁殖和种群增长的影响.结果表明,4种人工饲料饲养的二化螟幼虫的发育历期、化蛹率、羽化率、产卵量及卵孵化率等与天然饲料饲养的基本接近,幼虫存活率和蛹重明显高于天然饲料. 刘光富 俞晓平关键词:二化螟 人工饲料 生长发育 DNA条形码技术的应用研究 被引量:7 2014年 自2003年加拿大科学家Paul Hebert首次提出DNA条形码的概念以来,DNA条形码技术在生物分类学领域已经越来越受关注.该技术是通过一个标准化基因短片段的序列变异来快速鉴定物种,提供了可信息化的分类学标准和有效的分类学手段,成为近年来生命科学和生物技术领域进展最迅速的学科前沿之一.我们针对目前DNA条形码技术的应用研究现状、存在问题及应用前景等予以综述,以期推动我国DNA条形码技术研究的发展. 李超 王正亮 杨倩倩 俞晓平关键词:DNA条形码 生物分类学 物种鉴定 Molecular detection of Xanthomonas oryzae pv.oryzae, Xanthomonas oryzae pv. oryzicola, and Burkholderia glumae in infected rice seeds and leaves 被引量:2 2014年 The polymerase chain reaction(PCR) is particularly useful for plant pathogen detection. In the present study, multiplex PCR and SYBR Green real-time PCR were developed to facilitate the simultaneous detection of three important rice pathogens, Xanthomonas oryzae pv.oryzae, X. oryzae pv. oryzicola, and Burkholderia glumae. The unique PCR primer sets were designed from portions of a putative glycosyltransferase gene of X. oryzae pv. oryzae, an Avr Rxo gene of X. oryzae pv. oryzicola, and an internal transcribed spacer(ITS) sequence of B. glumae. Using a multiplex PCR assay, X. oryzae pv. oryzae, X. oryzae pv. oryzicola, and B. glumae were detected in one PCR reaction that contained the newly developed primer set mix. Using SYBR Green real-time PCR assays, X. oryzae pv. oryzae, X. oryzae pv. oryzicola, and B. glumae were detected at 1, 1, and 10 fg μL-1, respectively. These newly designed molecular assays are sensitive and could be reliable tools for pathogen detection and disease forecasting. Wen Lu Luqi Pan Haijun Zhao Yulin Jia Yanli Wang Xiaoping Yu Xueyan Wang关键词:XANTHOMONAS ORYZAE PATHOGEN 基于DNA条形码技术对浙江省外来入侵福寿螺进行分子鉴定 被引量:12 2016年 外来入侵福寿螺对我国农业生产和水生生态系统平衡等造成严重危害。2010年,种类鉴定研究首次揭示我国外来入侵福寿螺包括Pomacea canaliculata和P.maculata两个种,而浙江省仅见P.canaliculata一种报道。P.canaliculata和P.maculata种间形态近似,且受环境、食物源等因素影响,同种内外壳形态特征多样,因而基于形态特征进行种类的准确鉴定极为困难。本研究在采集浙江省7个区县的福寿螺样本的基础上,利用DNA条形码技术扩增了101个不同个体的COI序列,并从BOLD数据库下载了"P.canaliculata种团"的5个近缘种的55条COI序列用于分析,其中包括P.lineata,P.dolioides和P.paludosa所有已发表序列,以及P.canaliculata和P.maculata的南美洲样品的序列等。序列相似度比对、DNA条形码间隙和系统发育树等分析表明,COI序列可以实现近缘福寿螺的有效鉴别。待测的浙江省福寿螺样品中,杭州江干区检测到P.canaliculata和P.maculata两种,而舟山普陀区、绍兴上虞区和新昌县、温州瓯海区及杭州西湖区仅检测到P.canaliculata,表明P.canaliculata在浙江省具有更广的分布范围。P.canaliculata和P.maculata分别形成4种和2种单倍型,各区县样点分别包含1–3种单倍型,浙江省各发生地呈现较低的遗传多样性。依据系统发育关系推测,浙江省分布的P.canaliculata和P.maculata分别可能来源于阿根廷和巴西。 杨倩倩 刘苏汶 茹炜岽 刘光富 俞晓平关键词:COI POMACEA 分子鉴定 入侵种 我国外来入侵种福寿螺分子生物学研究进展 被引量:3 2014年 福寿螺是一类恶性外来入侵生物,自20世纪80年代初引种并入侵我国以来,对我国农作物生产和水生生态系统造成了严重的危害.我国已报道的福寿螺入侵种类包括Pomacea canaliculata和P.insularum两种,这两种福寿螺也是东南亚、南亚和北美等多国的入侵种类.这两种福寿螺近年来在世界范围内得到了广泛的研究,现综述这两种福寿螺分子生物学的研究进展,包括种类的分子鉴定、分子系统学及蛋白基因的研究等,并对其分子生物学研究和应用进行了讨论和展望. 杨倩倩 王正亮 刘光富 俞晓平关键词:福寿螺 POMACEA P 分子生物学