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国家自然科学基金(30470772): 作品数：16 被引量：71H指数：4; 相关作者：王长征吴奎毕玉田王彦夏俊波更多>>; 相关机构：第三军医大学新桥医院第三军医大学大坪医院武警总医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>

屋尘螨过敏原DNA疫苗对哮喘模型小鼠Foxp3^＋调节性T细胞功能的影响被引量：7: 2008年; 目的观察编码屋尘螨主要过敏原Derp1和Derp2的质粒DNA疫苗对哮喘小鼠脾细胞Foxp3+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg细胞)功能的影响。方法以屋尘螨提取液复制哮喘模型后,将编码Der p1、Der p2的真核表达质粒pDs-Der p1、pCI-neo-Der p2等量混合接种小鼠后对小鼠进行再次激发。分离小鼠脾脏细胞,以流式细胞仪方法检测CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例。采用磁珠法分离CD4+CD25+T细胞,流式细胞仪检测其Foxp3基因的表达,并以IL-2进行刺激观察其增殖反应,测定其上清液中的IL-10、TGF-β含量。将分离的Treg细胞与哮喘小鼠CD4+CD25-T细胞共同培养,观察Treg细胞对CD4+CD25-T细胞增殖及IL-4、IL-5、IFN-γ的影响。结果哮喘组小鼠脾脏CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例显著低于对照组,经DNA疫苗治疗后CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞显著增加。体外培养发现各组CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞增殖能力均显著低于CD4+CD25-T细胞,培养液上清中均未检测到IL-10和TGF-β存在。3组CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞均可显著抑制哮喘CD4+CD25-T细胞的增殖及IL-4、IL-5和IFN-γ的分泌,但在3组Treg细胞中,哮喘组Treg细胞作用显著低于其他两组。结论Treg细胞可显著抑制哮喘CD4+CD25-T细胞的增殖及炎性介质的分泌,哮喘小鼠不仅出现CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞数量的减少,而且其功能也可能出现缺陷。DNA疫苗治疗可以诱导CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞增加,并恢复其功能活性。; 吴奎孙鲲毕玉田夏俊波王长征; 关键词：DNA疫苗调节性T细胞哮喘

相关专业医学名词和英文缩写的介绍（三）: 2008年

FasL基因修饰的树突状细胞的表型分析及其功能研究被引量：1: 2006年; 目的研究FasL基因修饰后的树突状细胞(DC)的表型和功能的变化。方法以含小鼠FasL(mFasL)基因的重组真核表达载体转染小鼠骨髓来源的DC,FACS法检测DC表型的变化。将转染后DC与T细胞共同培养后,MTT法检测T细胞的增殖,Annexin V法检测T细胞凋亡。结果表型分析表明,FasL基因修饰的DC的CD80、CD86和MHCⅡ表达无变化。FasL基因修饰的DC能抑制T细胞的增殖,诱导T细胞发生凋亡。结论FasL基因转染的DC,其表型无明显变化,可抑制T细胞增殖,诱导T细胞凋亡。; 王彦毕玉田卓文磊王长征吴奎宋云熙夏俊波; 关键词：FASL基因树突状细胞表型

Foxp3基因转染对人CD4^＋ CD25^-T细胞表型和功能的影响被引量：12: 2008年; 目的探讨体外Foxp3基因表达对CD4+CD25-T细胞功能的影响。方法将编码人Foxp3基因全长的逆转录病毒表达载体,转染人外周血CD4+CD25-T细胞。以流式细胞仪方法检测转染后CD4+CD25-T细胞表面CD25、CD127分子及CTLA4分子的表达变化,以流式细胞仪及RT-PCR检测Foxp3基因在转染细胞中的表达。体外刺激、观察转染后的Foxp3细胞的增殖反应,以及重组细胞对CD4+CD25-T细胞增殖反应和细胞因子分泌的作用。结果转染后Foxp3基因在CD4+CD25-T细胞中呈高水平表达。转染细胞表面CD25、CTLA4分子均呈高水平表达,而CD127分子表达水平下降,且IL-2并不能诱导其增殖。转染细胞与CD4+CD25-T细胞共同培养可有效抑制CD4+CD25-T细胞的增殖反应及细胞因子IL-4、IL-5和IFN-γ的分泌。结论Foxp3基因转染可有效诱导CD25及CTLA4分子表达,并使转染细胞具有调节性T细胞的功能。; 吴奎毕玉田王耀丽王长征; 关键词：FOXP3 逆转录病毒

哮喘小鼠CD4^+CD25^+调节性T细胞数量及功能的改变被引量：21: 2005年; 目的观察哮喘小鼠脾脏CD4+CD25+调节性T细胞(简称Treg细胞)数量及功能的改变。方法以屋尘螨提取液复制小鼠哮喘模型后,分离小鼠脾脏CD4+T细胞,采用流式细胞仪检测Treg细胞占CD4+T细胞的比例;分离Treg细胞,与屋尘螨提取液共同培养后测定上清液中白细胞介素-4(IL-4)及IL-10的含量;将Treg细胞与CD4+T细胞共同培养,观察其对CD4+T细胞增殖及IL-4、IL-5、γ-干扰素(IFN-γ)分泌的影响。结果哮喘小鼠脾脏Treg细胞占CD4+T细胞比例明显下降;与正常组相比,哮喘小鼠脾脏Treg细胞IL-4、IL-10的分泌无明显差异;Treg细胞可显著抑制哮喘小鼠CD4+T细胞的增殖,并降低其IL-4的分泌,对IFN-γ的合成分泌无明显作用;使用anti-CD25 mAb后,哮喘和正常小鼠Treg细胞的作用均被显著抑制。结论哮喘小鼠Treg细胞功能与正常对照组小鼠无明显区别,但数量显著下降。哮喘发病过程中Th2型反应占优势,与Treg细胞数量减少,对Th2型反应的抑制作用降低有一定关系。; 吴奎孙鲲毕玉田夏俊波王长征; 关键词：调节性T细胞哮喘

FasL基因和屋尘螨过敏原基因共表达质粒DNA疫苗对屋尘螨致敏/激发小鼠气道炎症的作用被引量：2: 2011年; 目的:观察FasL基因和屋尘螨过敏原Derp2基因共表达质粒的DNA疫苗(DNA-FasL-Derp2)对屋尘螨致敏/激发小鼠气道炎症的作用。方法:DNA-FasL-Derp2肌注接种屋尘螨致敏/激发C57BL/6小鼠,再次激发后处死小鼠。观察肺组织病理变化,检测支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞总数和分类计数,以及IL-5、IFN-γ水平。并与仅编码Derp2基因的DNA疫苗(DNA-Derp2)比较。结果:接种DNA-FasL-Derp2和DNA-Derp2均能显著减轻屋尘螨致敏/激发小鼠气道炎症,减少BALF中细胞总数和嗜酸粒细胞比例,降低BALF中IL-5水平,以DNA-FasL-Derp2更显著。结论:DNA-FasL-Derp2可有效抑制屋尘螨致敏/激发小鼠气道炎症,而且比DNA-Derp2更有效。; 王彦林科雄王长征吴奎毕玉田; 关键词：DNA疫苗气道炎症

屋尘螨致敏/激发小鼠气道变态反应性炎症模型的构建被引量：4: 2007年; 目的使用屋尘螨(HDM)提取液致敏和激发C57BL/6小鼠构建气道变态反应性炎症模型的方法。方法模型组和对照组,各8只。模型组以HDM致敏和激发小鼠,分别于第0、7、14、21天腹腔注射HDM,10 d后,连续雾化吸入HDM 3 d。对照组以PBS代替HDM。进行支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞总数计数和分类计数,肺组织病理检查,ELISA测定BALF上清中IL-4、IL-5和IFNγ-水平。结果模型组可见明显炎性细胞浸润,以嗜酸性粒细胞为主。而对照组未见明显炎性细胞浸润。BALF中细胞总数计数和嗜酸性粒细胞比例较对照组明显升高(P<0.01);BALF上清中IL-4、IL-5水平较对照组明显升高(P<0.001),IFNγ-水平较对照组降低(P<0.01)。结论使用HDM致敏和激发C57BL/6小鼠成功地建立了小鼠气道变应性炎症模型。; 毕玉田王彦吴奎卓文磊王长征钱桂生; 关键词：动物模型超敏反应炎症

Der p2基因真核表达载体的构建及其在小鼠树突状细胞中表达被引量：1: 2006年; 目的构建Der p2真核表达载体,并证明能在小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC)中表达。方法采用分子生物学方法,将原核表达质粒plambd Der p2携带的Der p2全长cDNA切下,重组到真核表达质粒pCI-neo中,然后在脂质体介导下,将重组质粒转染到小鼠骨髓来源的DC,并用RT-PCR、Western Blot检测Der p2 mRNA和蛋白表达。结果测序证实构建的重组质粒中携带了Der p2的全长cDNA序列,且与Gene Bank序列完全一致;重组质粒转染小鼠DC后,能产生Der p2 mRNA和蛋白。结论成功构建重组Der p2基因真核表达载体,其转染DC后,能有效地表达于DC中。; 毕玉田王彦吴奎王长征钱桂生; 关键词：P2 树突状细胞

屋尘螨过敏原质粒DNA疫苗对屋尘螨小鼠气道变应性炎症的作用被引量：3: 2007年; 目的探讨屋尘螨过敏原质粒 DNA 疫苗对屋尘螨致敏/激发小鼠气道变应性炎症的作用。方法 40只小鼠分为健康对照组、屋尘螨致敏/激发模型组(用屋尘螨提取液致敏/激发)、Derp1治疗组(用屋尘螨提取液致敏/激发,用编码有屋尘螨过敏原 Der p1的真核表达质粒肌肉注射后再次激发)、Der p2治疗组(用屋尘螨提取液致敏/激发,用编码有屋尘螨过敏原 Der p2的真核表达质粒肌肉注射后再次激发)、Der p1联合 Der p2治疗组(用屋尘螨提取液致敏/激发,用编码有屋尘螨过敏原 Der p1和 Der p2的真核表达质粒肌肉注射后再次激发)5组,每组8只。检测5组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞计数和分类。取5组小鼠肺组织行病理检查。测 BALF、血清中 IL-4、IL-5、IFNγ水平及 BALF 中 IgE、IgG1水平。结果屋尘螨致敏/激发模型组小鼠肺组织可见明显炎性细胞浸润;BALF 中炎性细胞特别是嗜酸性粒细胞计数较健康对照组明显升高(P<0.01),IL-4、IL-5、IgE、IgG1水平较健康对照组明显升高(P<0.001),IFNγ水平与健康对照组比较差异无统计学意义(P<0.01)。经 DNA 疫苗治疗后,小鼠肺部炎性细胞浸润显著减少;BALF 中炎性细胞计数及 IL-4、IL-5、IgE、IgG1水平显著下降,IFNγ水平无显著变化,IL-10水平显著升高。Der p1联合 Der p2治疗组各项指标的改善情况优于 Der p1治疗组和 Der p2治疗组。结论屋尘螨过敏原质粒 DNA 疫苗可有效抑制屋尘螨致敏/激发小鼠气道变应性炎症,且两种疫苗联合治疗优于单用一种疫苗治疗。; 毕玉田吴奎王彦卓文磊王长征钱桂生; 关键词：疫苗气管变态反应性炎症

小鼠FasL全长cDNA的克隆、真核表达载体构建及其在树突状细胞中的表达: 2007年; 目的克隆小鼠FasL(mouse FasL,mFasL)全长cDNA,构建其真核表达载体,并验证其在小鼠骨髓来源的树突状细胞(dendritic cells,DC)中的表达。方法采用RT-PCR和TA克隆技术,从激活的小鼠脾脏T淋巴细胞中扩增mFasL全长cDNA,亚克隆到T载体中,再克隆到pIRES2EGFP载体中。转染小鼠DC后,用RT-PCR、免疫荧光及W estern blot检测mFasL mRNA和蛋白表达。结果测序证实所得的mFasL cDNA序列与其在GenBank中的序列完全一致。mFasL真核表达载体转染小鼠DC后,能表达mFasL mRNA和蛋白。结论成功克隆了mFasL基因,构建其真核表达载体,并证明能有效表达于DC中。; 王彦卓文磊王长征钱桂生毕玉田吴奎; 关键词：FASL 克隆树突状细胞

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