国家高技术研究发展计划(2007AA021004)
- 作品数：12 被引量：25H指数：4
- 相关作者：陈浩李文生秦岭郑钦象孙婧更多>>
- 相关机构：温州医学院附属眼视光医院中国人民解放军总医院中国人民解放军总医院第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划吉林省科技发展计划基金“重大新药创制”科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- 吲哚美辛抑制人眼脉络膜黑色素瘤细胞系OCM-1裸鼠移植瘤生长的研究被引量：1
- 2011年
- 背景吲哚美辛能有效抑制多种肿瘤细胞的增生，但其对脉络膜黑色素瘤（CM）是否具有抑制作用尚不清楚。目的探讨吲哚美辛对人CM细胞系OCM-1细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法将OCM-1细胞植入24只雌性裸鼠腋周皮下建立移植瘤模型，建模后5～6d，待肿瘤长至5mm大小时，将荷瘤鼠随机分为空白对照组、生理盐水组、吲哚美辛1mg／kg组、吲哚美辛2mg／kg组，按组每日腹腔注射相应的药物，连续用药2周，观察肿瘤生长情况。2周后处死动物，称量肿瘤重量并计算抑瘤率；应用免疫组织化学法检测各组动物肿瘤组织中ki67、survivin蛋白的表达；逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法分析各组小鼠肿瘤组织中survivinmRNA的表达。结果吲哚美辛1mg／kg组、吲哚美辛2mg／kg组较空白对照组、生理盐水组CM肿瘤体积缩小、重量减轻，与空白对照组、生理盐水组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）；吲哚美辛2mg／kg组CM肿瘤的体积和重量均小于吲哚美辛1mg／kg组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。吲哚美辛1mg／kg组、吲哚美辛2mg／kg组的抑瘤率分别为22．86％、48．00％，抑瘤率随吲哚美辛剂量的增加而升高。免疫组织化学染色及RT—PCR检测表明，吲哚美辛2mg／kg组ki67增生指数、survivin蛋白及mRNA在肿瘤组织中的表达较空白对照组、生理盐水组明显下降，差异均有统计学意义（P〈0．05）；但吲哚美辛1mg／kg组与其他3组问上述3项指标的差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论吲哚美辛可通过下调survivin的表达抑制OCM-1细胞的增生，从而抑制OCM-1裸鼠移植瘤的生K。
- 骆新瑞陈浩郑钦象秦岭李敏李文生
- 关键词：吲哚美辛脉络膜黑色素瘤KI67
- 抗肿瘤双特异免疫导向治疗制剂CAtin的表达及活性分析被引量：7
- 2009年
- 结合生物信息学方法与已知癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen,CEA)特异性单链抗体(Single chainFv fragment,scFv)核苷酸序列,经分子设计和密码子优化后,通过化学方法合成CEA二硫键稳定性单链抗体(Disulfide stabilized single chain Fv fragments,scdsFv)基因片段.将凋亡素基因(Apoptin)通过一段柔性连接肽(Linker)连接在CEA scdsFv基因下游,并克隆入大肠杆菌表达载体质粒pET28a,转化BL21感受态菌后经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导,表达融合蛋白CAtin.SDS-PAGE和Western-Blot分析表明,目的蛋白得到良好表达,经条件优化后表达量最高可达44.1 mg/L.融合蛋白经分步洗涤法和谷胱甘肽对表达的目的蛋白进行初步纯化和复性后,利用人肝癌细胞(HCC)对所制备融合蛋白进行亲和力测定、细胞结合活性测定和特异性细胞杀伤活性分析.结果显示,所制备融合蛋白不仅能够有效地与上述肿瘤细胞结合,并对其具有明显的杀伤活性,表明成功制备了具有特异性识别和特异性杀伤活性的双特异抗肿瘤免疫导向制剂.
- 李霄金宁一李昌田明尧陈漉贾鹏刘立明刘妍高鹏
- 关键词：癌胚抗原凋亡素基因原核表达
- 含新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶基因重组腺病素的构建及鉴定被引量：4
- 2009年
- 目的：构建表达新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶（Hemagglutinin—neuramidinase，FIN）基因的重组腺病毒，为进一步研究HN基因对消化道肿瘤的抑制作用及分子机制建立基础。方法：用BamHI和XbaⅠ双酶切质粒pVHN，将获得的HN基因片段连接入穿梭质粒pacAd5 CMV K-N pA，构建含HN基因的穿梭质粒pacAd5-HN。利用PacI单酶切对pacAd5-HN和腺病毒基因组质粒（pAd5）进行线性化处理后应用脂质体介导法共转染AAV-293细胞，分别利用蚀斑纯化和RT-PCR、Western blot等方法对重组病毒进行筛选和鉴定，并测定所获得重组病毒的滴度。结果：所构建重组病毒可有效表达HN基因，表达产物分子量约为63kD，重组病毒滴度为10^8～10610PFU／ml。结论：成功构建含HN基因的重组腺病毒，所获得重组病毒的滴度可以满足体内外实验要求。
- 陈漉金宁一李霄刘立明贾鹏刘妍高鹏陆蕴松李明迟宝荣
- 关键词：NDVHN基因重组腺病毒抗肿瘤
- 视网膜色素变性基因治疗的研究现状及展望
- 2010年
- 视网膜色素变性（RP）发生与基因变异有着密切关系.探寻RP致病基因及分子发病机制 通过RP基因治疗延缓或阻止感光细胞的损失,保护视功能已成为研究热点.对某些基因突变类型进行RP基因治疗临床试验是今后值得重视的课题.
- 郑钦象陈浩李文生
- 关键词：视网膜炎基因疗法
- Foxp3在成神经细胞瘤细胞株SK-N-SH中的表达及其对化疗的敏感性被引量：2
- 2010年
- 目的:研究成神经细胞瘤细胞株SK-N-SH中Foxp3的表达及其对化疗药物环磷酰胺(cyclophosvnamide,CTX)和吡柔比星(pirarubicin,THP)的敏感性。方法:体外培养SK-N-SH细胞,流式细胞术检测Foxp3在SK-N-SH细胞中的表达。MTT法检测化疗药物CTX、THP对SK-N-SH细胞的敏感剂量;流式细胞术及real-time PCR检测CTX、THP对SK-N-SH细胞中Foxp3表达的影响。结果:流式细胞术检测结果显示,SK-N-SH细胞高表达Foxp3分子。CTX作用于SK-N-SH细胞的敏感剂量为6mmol/L,THP作用于SK-N-SH细胞的敏感剂量为80ng/ml。6mmol/L CTX或80ng/ml THP以及两者的联合不能抑制SK-N-SH细胞中Foxp3的表达(P>0.05);real-time PCR结果也证实,CTX或THP以及两者的联合不能抑制SK-N-SH细胞中Foxp3 mRNA的表达。结论:成神经细胞瘤细胞株SK-N-SH高表达Foxp3蛋白,但其表达对化疗药物CTX和THP不敏感。
- 孙婧李良肖燕唐锁勤
- 关键词：FOXP3成神经细胞瘤环磷酰胺吡柔比星
- 临床膀胱癌组织中miRNA的差异表达研究被引量：5
- 2010年
- 目的寻找并鉴定在膀胱癌及癌旁组织中差异表达的微RNA(miRNA)。方法结合miRNA芯片技术寻找膀胱癌及癌旁组织中差异表达的miRNA,并通过荧光定量PCR进行验证。结果在癌与癌旁组织中共检测到115条存在显著性差异的miRNA,其中膀胱癌组织中下调42条,上调73条。结论膀胱癌组织与癌旁组织中miRNA表达谱存在较大差异,miRNA与膀胱癌的发生发展存在一定的相关性。
- 夏伟宋涛李洁黄宝春李少华丁红梅王天有邵宁生
- 关键词：膀胱肿瘤微RNA聚合酶链反应
- CXCR4在神经母细胞瘤细胞SK-N-SH上的表达及其对化疗敏感性研究
- 2010年
- 目的:探讨CXCR4在神经母细胞瘤细胞SK-N-SH表面的表达及其对化疗药物环磷酰胺(CTX)、吡柔比星(THP)的敏感性。方法:体外培养SK-N-SH神经母细胞瘤细胞,流式细胞仪测定CXCR4在其表面的表达。通过CH50试验明确化疗药物CTX、THP对SK-N-SH细胞的效应剂量。最后通过Real-time PCR及流式细胞术在基因及蛋白水平检测化疗药物对SK-N-SH细胞中CXCR4表达的变化。结果:FACS检测结果表明CXCR4分子在SK-N-SH肿瘤细胞中高表达,但化疗药物不能降低其在蛋白水平的表达。Real-time PCR结果显示化疗药物也不影响CXCR4在mRNA水平的表达。结论:与我们前期报道化疗药物能影响神经母细胞瘤细胞LA-N-5上CXCR4的表达不同,CTX、THP不能显著降低转移相关趋化因子受体CXCR4在神经母细胞瘤细胞SK-N-SH表面的表达,提示神经母细胞瘤来源不同,其对化疗药物的敏感性不同。
- 孙婧肖燕李良余素明唐锁勤
- 关键词：CXCR4神经母细胞瘤化疗药物
- CXCR4在神经母细胞瘤细胞LA-N-5上的表达及其对化疗敏感性的研究
- 2009年
- 目的:探讨CXCR4在神经母细胞瘤细胞LA-N-5上的表达及其对化疗药物环磷酰胺(CTX)、盐酸吡柔比星(THP)的敏感性,明确化疗药物是否能通过抑制转移相关趋化因子受体的表达发挥作用。方法:体外培养神经母细胞瘤细胞LA-N-5,流式细胞仪和PCR测定LA-N-5细胞上CXCR4蛋白和mRNA的表达。通过MTT试验明确化疗药物CTX和THP对LA-N-5细胞的效应剂量,通过Real-timePCR及流式细胞术在基因及蛋白水平检测化疗药物作用后LA-N-5细胞中CXCR4表达的变化。结果:①流式细胞术检测结果表明CXCR4分子在LA-N-5肿瘤细胞中高表达,两种化疗药物均能使其在蛋白水平表达显著降低,但两种药物之间没有协同作用。②Real-timePCR结果显示化疗药物THP能使肿瘤细胞中CXCR4mRNA的表达降低,而CTX没有此作用,二者在抑制LA-N-5上CXCR4mRNA的表达方面有协同作用。结论:CTX和THP能显著降低转移相关趋化因子受体CXCR4在神经母细胞瘤细胞LA-N-5表面的表达,提示化疗药物发挥作用的机制可能涉及其对趋化因子受体表达的影响。
- 孙婧肖燕李良余素明唐锁勤
- 关键词：CXCR4神经母细胞瘤化疗药物
- 抗血管内皮生长因子单克隆抗体bevacizumab对实验性脉络膜黑色素瘤生长的影响被引量：2
- 2011年
- 目的 观察并探讨抗血管内皮生长因子（VEGF）单克隆抗体bevacizumab对人眼脉络膜黑色素瘤（CM）细胞系OCM-1细胞裸鼠移植瘤生长的影响及其机制.方法 OCM-1细胞植入18只雌性裸鼠腋周皮下,建立移植肿瘤模型后随机分成空白对照组（A组）、阴性对照组（B组）、注药治疗组（C组）.A组未作处理;B组腹腔注射生理盐水0.2 ml;C组以5 mg/kg剂量腹腔注射生理盐水稀释的bevacizumab溶液0.2 ml.连续用药14 d,期间观察肿瘤生长情况.14 d后处死裸鼠,称量肿瘤重量并计算抑瘤率;免疫组织化学染色检测各组肿瘤组织增生细胞相关核抗原（ki67）、凋亡抑制因子（survivin）表达情况;逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）分析各组VEGF和survivin mRNA水平的表达.结果 C组肿瘤体积、重量分别为（598.86±321.81）mm3、（0.66±0.15）g,A、B组肿瘤体积、重量分别为（1 715.15±278.16）mm3、（1.54±0.39）g和（1 750.23±206.36）mm3、（1.54±0.31）g,C组与A、B组肿瘤体积、重量比较,差异均有统计学意义（F=34.53,8.69;P=0.00,0.01）;C组抑瘤率为57.14%,A、B组抑瘤率分别为5.31%、6.25%.A、B、C组,ki67增生指数分别为（51.85±1.32）%、（46.30±1.39）%、（27.90±0.90）%,C组与A、B组比较,ki67增生指数差异有统计学意义（H=15.17,P=0.00）.C组survivin mRNA表达为0.49±0.02,A、B组survivin mRNA表达分别为（0.82±0.05）、（0.61±0.05）,C组与A、B组比较,survivin mRNA表达差异有统计学意义（F=15.17,P＜0.05）.C组VEGF mRNA表达为（0.32±0.08）,A、B组VEGF mRNA表达分别为（0.73±0.07）、（0.80±0.04）,C组与A、B组比较,VEGF mRNA表达差异有统计学意义（F=12.05,P＜0.05）.结论 Bevacizumab能够抑制OCM-1裸鼠移植瘤的生长,其机制可能与抑制VEGF活性,下调survivin表达,抑制细胞增生有关.
- 李敏陈浩秦岭骆新瑞李文生
- 关键词：脉络膜肿瘤血管内皮生长因子类
- 吲哚美辛对脉络膜黑色素瘤细胞增生活性的影响及作用机制被引量：1
- 2011年
- 目的 观察环氧化酶抑制剂吲哚美辛（IN）对脉络膜黑色素瘤细胞OCM-1增生活性的影响并探讨其作用机制.方法 体外培养OCM-1细胞,采用25、50、100、200、400μmol/L IN对OCM-1细胞进行干预,应用四氮唑化合物（MTT）法检测不同浓度IN对OCM-1细胞增生活性的影响;侵袭实验检测IN对OCM-1细胞侵袭力的影响;逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测IN对OCM-1细胞内血管内皮生长因子（VEGF）及凋亡抑制因子（survivin）mRNA表达的调节作用;免疫荧光化学检测OCM-1细胞内VEGF、survivin蛋白的定位及表达,酶联免疫吸附测定（ELISA）及蛋白免疫印迹法（Western blot）检测IN对OCM-1细胞内VEGF、survivin蛋白表达的影响.结果 不同浓度IN对OCM-1细胞的增生及侵袭均有明显的抑制作用,其抑制率呈浓度-时间依赖性（MTT：24 h：F=19.642,P＜0.01;48 h：F=136.597,P＜0.01;72 h：F=582.543,P＜0.01;侵袭实验：F=54.225,P＜0.01）.免疫荧光化学检测结果 显示：VEGF、survivin 2种因子在OCM-1细胞内均呈阳性表达且多数表达于细胞胞浆内;RT-PCR检测结果 显示：100、200、400μmol/L IN可抑制OCM-1细胞内survivin mRNA的表达（F=16.679,P＜0.01）,但对细胞内VEGF mRNA的表达无抑制作用.ELISA法测出未用药组、100、400 μmol/L IN作用OCM-1细胞24 h后,细胞内survivin的浓度分别为（787.33±47.37）、（257.00±26.21）、（123.33±8.02）pg/ml;Western blot进一步验证了IN可抑制OCM-1细胞内survivin蛋白的表达,但对VEGF的表达无抑制作用.结论 IN能够抑制OCM-1细胞的增生及侵袭,其机制可能与其下调OCM-1细胞内survivin因子的表达有关.
- 秦岭郑钦象陈浩李文生马奥博申焕君
- 关键词：脉络膜肿瘤吲哚美辛
