江苏省自然科学基金(BK2009433)
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
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- 禽流感病毒H5N1亚型NS1蛋白的真核表达及其在细胞中的分布
- 2011年
- 为构建禽流感病毒(AIV)H5N1亚型非结构蛋白NS1的真核表达载体,并鉴定其在哺乳动物细胞中的表达与分布,本研究采用RT-PCR技术,从甲型流感病毒的总RNA中扩增NS1全长基因,并将其克隆于pXJ40中,构建真核表达载体pXJ40-HA-NS1。将该重组质粒转染293T细胞,通过western blot方法鉴定表达的NS1蛋白;并以免疫荧光技术观察NS1在H1299细胞中的分布与定位。Western blot结果显示NS1基因编码蛋白获得表达,免疫荧光检测显示NS1蛋白主要存在于细胞核中。本研究为NS1蛋白功能和H5N1亚型AIV致病机制的研究奠定了基础。
- 卞倩张文帅迟莹李燕焦永军
- 关键词：H5N1亚型禽流感病毒NS1真核表达
- 甲型H1N1流感病毒非结构蛋白NS1真核表达载体的构建与表达被引量：2
- 2011年
- 目的:构建甲型H1N1流感病毒非结构蛋白NS1真核表达载体并表达其编码蛋白(转染293T细胞)。方法:从江苏首例甲型H1N1流感病毒毒株(A/Nan jing/1/2009(H1N1))提取病毒RNA,采用RT-PCR技术扩增NS1全长基因,将其克隆至pMD18-T Vector中构建pMD18-T-NS1质粒,双酶切pMD18-T-NS1与PXJ40-HA后,构建真核表达载体PXJ40-HA-NS1,经酶切及测序鉴定后将质粒转染到293T细胞中,通过Western blot鉴定NS1蛋白的表达。结果:经双酶切、测序鉴定证实NS1基因的真核表达载体构建成功。West-ern blot法可见NS1基因编码蛋白的成功表达。结论:成功克隆NS1全长基因,并构建了其真核表达载体,该表达载体的构建为后期建立稳定表达NS1蛋白的细胞模型和NS1蛋白功能研究提供了材料。
- 张文帅卞倩温恬迟莹李燕焦永军
- 关键词：甲型H1N1流感病毒NS1真核表达免疫印迹
- H3N2流感病毒非结构蛋白-1真核表达载体的构建与表达及其对293T细胞增殖的影响
- 2012年
- 目的:构建甲型H3N2流感病毒非结构蛋白-1(nonstructal-1,NS1)真核表达载体并表达其编码蛋白;探讨NS1对细胞增殖的影响。方法 :从江苏省甲型H3N2流感病毒毒株提取病毒RNA,采用RT-PCR技术扩增NS1全长基因,将其克隆至pMD18-T Simple Vector中构建pMD18-T/NS1质粒,双酶切pMD18-T/NS1与pXJ40-HA后,构建真核表达载体pXJ40-HA-NS1,经酶切及测序鉴定后将质粒转染到293T细胞中,通过免疫印迹法鉴定NS1蛋白的表达。3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐[3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide,MTT]法检测NS1转染细胞后对细胞增殖的影响。结果:经双酶切、测序鉴定证实NS1基因的真核表达载体构建成功;免疫印迹法证实NS1蛋白的表达。MTT法证实转染NS1质粒后对细胞增殖有抑制作用。结论:成功克隆了NS1全长基因,构建了其真核表达载体,并初步验证了NS1蛋白过表达后能抑制细胞的增殖,该表达载体的构建为后期建立稳定表达NS1的细胞模型和NS1蛋白对细胞增殖和凋亡作用机制的进一步研究提供了基础。
- 迟莹卞倩李燕张文帅温恬焦永军
- 关键词：克隆真核表达细胞增殖
- A型流行性感冒病毒非结构蛋白1与宿主细胞凋亡信号转导关系的研究进展
- 2011年
- 流行性感冒（流感）病毒基因组的非结构（NS）蛋白基因是其基因组中最小的基因节段，它转录成的线性mRNA共编码两种蛋白质，即NSl和NS2蛋白。早期研究表明，这两种蛋白质仅存在于被流感病毒感染的细胞中，而在病毒粒子内则无，所以被称为NS蛋白。
- 温恬卞倩
- 关键词：非结构蛋白宿主细胞凋亡信号转导流感病毒感染病毒基因组蛋白基因
