吉林医药学院检验学院 作品数:387 被引量:1,000 H指数:11 相关作者: 董媛 高红旺 韩玉坤 李文平 吴介恒 更多>> 相关机构: 北华大学医学技术学院 北华大学药学院 延边大学医学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 吉林省教育厅“十二五”科学技术研究项目 吉林省教育厅科研项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 文化科学 生物学 农业科学 更多>>
高浓度LPS损伤巨噬RAW264.7线粒体功能的研究 被引量:2 2015年 目的研究不同浓度LPS对巨噬细胞线粒体功能的影响。方法体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,不同浓度LPS(0、1、2、4、8和16μg/m L)诱导24 h后,采用流式细胞术检测线粒体功能,并分析细胞凋亡和细胞内活性氧水平。结果低浓度的LPS促进细胞内活性氧产生,对线粒体功能无影响或具有略增强的效应;高LPS诱导下,活性氧水平较低浓度组下降,而线粒体功能受损伤、坏死和凋亡细胞比例增加。结论高浓度LPS对RAW264.7线粒体功能有损伤作用。 周露露 牛佳丽 陈陶陶 张宸豪 李妍关键词:脂多糖 线粒体 免疫调节 基于CaCC的P2ry2调节剂细胞筛选模型的建立及应用 2020年 目的:构建基于钙激活氯离子通道(CaCC)的高通量P2Y2嘌呤受体(P2ry2)调节剂细胞筛选模型。方法:采用RT-PCR方法验证Fischer大鼠甲状腺滤泡上皮细胞(FRT细胞)中P2ry2的mRNA表达水平,切胶回收PCR扩增产物并进行序列测序和比对,进一步应用Western blot检测FRT细胞的P2ry2蛋白表达水平。构建钙激活氯离子通道ANO1和对卤族元素敏感的黄色荧光蛋白双突变体YFP-H148Q/I152L真核表达载体,应用脂质体转染、抗生素筛选和有限稀释,获取共表达ANO1和YFP-H148Q/I152L的FRT细胞。采用倒置荧光显微镜观察共表达ANO1和YFP-H148Q/I152L细胞的情况,并应用荧光淬灭动力学实验验证模型的有效性;荧光淬灭动力学实验验证细胞模型是否可筛选P2ry2调节剂,并应用Fura-2/AM荧光探针法检测细胞内游离钙的变化,探究胞内Ca2+浓度与P2ry2调节剂的剂量依赖关系;用Z'因子评价本模型的稳定性和可重复性。结果:FRT细胞内源性表达P2ry2;倒置荧光显微镜中观察到ANO1在细胞膜上表达绿色荧光,YFP-H148Q/I152L在胞浆中表达绿色荧光,成功构建了共表达ANO1和YFP-H148Q/I152L的细胞模型;荧光淬灭动力学实验证实该细胞模型可筛选P2ry2调节剂,应用Fura-2表明该细胞模型可敏感地检测胞浆内钙离子浓度的变化且Ca2+浓度与P2ry2调节剂及相对荧光强度呈剂量依赖关系;Z'因子为0.75,说明该细胞模型可以高通量筛选P2ry2的调节剂且有良好的稳定性与可重复性。结论:成功构建了一种经济简便快捷高效的P2ry2调节剂细胞筛选模型,适用于P2ry2调节剂的发现与评价。 郭佳琦 肖云萍 丁旭 解宇浩 张嘉琪 郝峰关键词:高通量筛选 HSV-2 gD重组腺病毒疫苗的构建及免疫原性分析 被引量:2 2016年 Ⅱ型单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus 2,HSV-2)是引起生殖器疱疹(Genital herpes,GH)的主要病原体,研制有效的HSV-2疫苗是控制病毒传播的有效途径,本研究通过穿梭载体pDC316将糖蛋白D2(Glucoprotein D2,gD2)基因连接到腺病毒载体上,制备HSV-2重组腺病毒rAd-gD2,经PCR和Western blot的方法在基因和蛋白水平上鉴定正确后,分别于第0、2、4周免疫小鼠,以PBS和空白腺病毒载体(AdV)为对照,第7周取血,通过检测小鼠血清中gD2特应性IgG和中和抗体评价体液免疫应答,检测Th1/Th2型细胞因子评价细胞免疫应答。结果显示经过3次免疫,小鼠产生了高水平的gD2特应性IgG和较高水平的中和抗体,Th1型细胞因子IFN-γ和IL-2明显高于对照组,Th2型细胞因子IL-4、IL-5和IL-10均高于对照组,P<0.01,具有显著的统计学意义。本研究制备的rAd-gD2既可以刺激小鼠产生体液免疫应答,也可以产生细胞免疫应答,与预期设想一致,为未来HSV-2疫苗的研发提供了数据基础。 刘微 赵东海 王紫琰 李艳 王皓 王会岩关键词:生殖器疱疹 LRRC8A细胞模型的构建及其生理特性研究 2019年 本文旨在构建容积调控性阴离子通道主要成分LRRC8A的细胞模型,并应用该模型研究LRRC8A的生理特性。构建LRRC8A和YFP-H148Q/I152L真核表达载体,应用脂质体转染、抗生素筛选和有限稀释,获取共表达LRRC8A和YFP-H148Q/I152L的Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮(Fischer rat thyroid, FRT)细胞。倒置荧光显微镜观察目的基因表达情况,荧光淬灭动力学实验检测LRRC8A和YFP-H148Q/I152L的功能。获得用于研究LRRC8A容积调控性阴离子通道的细胞模型,并应用该细胞模型研究LRRC8A的生理特性,包括阴离子转运特性、渗透压对LRRC8A的开放、阴离子转运速度的影响以及氯离子通道抑制剂对LRRC8A的作用。结果显示:(1)成功获得共表达LRRC8A和YFP-H148Q/I152L的FRT细胞,该细胞模型可用于LRRC8A容积调控性氯离子通道生理特性的研究。(2)在低渗状态下,LRRC8A容积调控性阴离子通道激活,可转运阴离子,如:碘离子和氯离子等;YFP-H148Q/I152L可用于研究阴离子的转运速度;渗透压是LRRC8A容积调控性阴离子通道开放的调控因素,其开放与渗透压呈负相关;氯离子通道抑制剂对LRRC8A通道的转运功能具有抑制作用,并呈剂量依赖关系。上述结果提示,本研究成功构建LRRC8A细胞模型,且应用该模型研究显示LRRC8A具有经典的容积调控性阴离子通道的特性。 周雁红 郑锴 夏忠雪 姜晓明 狄文慧 徐连秀 应超 郝峰关键词:渗透压 医学检验专业本科分子诊断学课程教学探讨 被引量:6 2014年 分子诊断学是医学检验专业主干课程之一,分子诊断学在疾病诊断和个体化治疗中发挥越来越重要的作用。为了适应新形势的发展,本文根据学科发展并结合教学实践,对医学检验本科专业分子诊断学课程的教学内容、教学模式和实验教学安排提出几点思考,为提高分子诊断学教学质量提供参考。 郝峰 郭素红 王皓 许会静 李艳关键词:分子诊断学 教学改革 姜黄素对DSS诱导血管内皮细胞损伤的保护作用研究 被引量:2 2017年 为了研究姜黄素对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用,试验采用DSS建立血管内皮细胞损伤模型,采用流式细胞术分析线粒体膜电位(MMP)和细胞凋亡情况;MTT法检测细胞增殖抑制率。结果表明:随DSS浓度的增加,细胞增殖受到抑制,MMP下降,细胞凋亡增加;姜黄素提高了细胞MMP,降低了细胞凋亡百分率和增殖抑制率。说明姜黄素通过抑制MMP的下降而减轻了DSS诱导血管内皮细胞的凋亡。 张宸豪 李瑶 李正祎 李妍关键词:姜黄素 血管内皮细胞 线粒体膜电位 微孔腹腔镜无异物胆囊切除术治疗胆囊结石的疗效及对生活质量的影响研究 2024年 目的探讨微孔腹腔镜无异物胆囊切除术治疗胆囊结石的疗效及对生活质量的影响。方法40例胆囊结石患者,随机分为观察组和对照组,各20例。观察组采取微孔腹腔镜无异物胆囊切除术治疗,对照组采取常规腹腔镜胆囊切除术治疗。比较两组手术时间、术中出血量、术后下床活动时间、术后排气时间、住院时间、住院费用、术后并发症发生情况、疼痛评分、切口美观满意度评分、生活质量评分。结果两组手术时间、术中出血量、住院时间比较,差异无统计学意义(P>0.05);观察组术后下床活动时间(7.95±1.54)h、术后排气时间(12.75±2.10)h短于对照组的(11.20±4.36)、(16.80±4.75)h,住院费用(1.42±0.13)万元少于对照组的(1.80±0.80)万元,差异具有统计学意义(P<0.05)。观察组视觉模拟评分法(VAS)评分(2.45±0.51)分、切口美观满意度评分(1.00±0.00)分低于对照组的(4.75±0.97)、(1.60±0.50)分,差异具有统计学意义(P<0.05)。观察组治疗后躯体、心理、角色以及社会评分分别为(94.60±1.82)、(94.80±1.91)、(93.10±2.40)、(93.30±3.34)分,高于对照组的(87.60±3.14)、(86.45±3.74)、(86.05±3.00)、(84.70±4.08)分,差异具有统计学意义(P<0.05)。两组术后均无胆漏、出血、切口感染等并发症发生。结论微孔腹腔镜无异物胆囊切除术治疗胆囊结石的美容效果良好,体内不残留异物,术后康复时间短,费用低廉,对患者生活质量的改善有积极作用,适合临床推广应用。 蒋林哲 王月华 吕鹏 孟宪颖关键词:胆囊结石 应用实时荧光定量PCR检测多亚型EV71的研究 被引量:3 2017年 目的建立SYBR Green实时荧光定量PCR方法,以期用于EV71亚型检测。方法根据中国大陆手足口病病原,设计多亚型EV71VP1基因特异性引物,PCR扩增VP1基因片段,并与pEASY-T1载体连接,构建pEASY-T1-VP1重组质粒,以此为标准品进行实时荧光定量PCR,绘制标准曲线,评价方法的敏感性、特异性和稳定性,并利用该方法检测门诊初诊手足口病患者的咽喉拭子标本。结果建立的实时荧光定量PCR标准曲线线性关系良好(R2=0.993),扩增效率为107.1%;方法的检测下限为(8.48×100)^(8.48×101)拷贝/μl之间,变异系数<1%;非手足口病病原体无扩增信号,手足口病患者咽喉拭子阳性率为52.3%(45/86)。阳性样品测序后与NCBI比对,符合率为100%。结论建立的SYBR Green实时荧光定量PCR敏感、特异,可用于多亚型EV71感染的检测。 刘微 罗晓华 赵文静 侯婷 韩亚如 谢文静关键词:肠道病毒71 实时荧光定量PCR 活性氧参与脂多糖诱导小鼠巨噬细胞RAW 264.7活化诱导凋亡 被引量:1 2014年 研究活性氧(ROS)与脂多糖(LPS)诱导后巨噬细胞活化诱导凋亡的关系。体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,采用不同浓度LPS诱导细胞,添加100μmol/L H2O2增加细胞内ROS,或用姜黄素(7.5μmol/L)降低细胞内ROS;流式细胞术分析细胞凋亡、线粒体膜电位(MMP)和ROS。结果显示,RAW264.7细胞凋亡和细胞内ROS水平均随LPS浓度增加而增加,高浓度的LPS导致MMP下降;与LPS(8μg/m L)单独作用组比,H2O2增加ROS,并导致凋亡细胞百分率增加;姜黄素降低LPS诱导的细胞凋亡,同时减少细胞内ROS。表明活性氧参与LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7活化诱导凋亡。 张宸豪 王月华 王长文 周露露 李妍关键词:巨噬细胞 脂多糖 活性氧 pET3c-FGF2^(K18S/S69C)突变体的构建及表达条件优化 被引量:1 2021年 构建和表达人FGF2^(K18S/S69C)突变体,并筛选最佳的表达条件。对GenBank数据库FGF2序列进行分析后,发现了位于第18位和第69位的氨基酸定向突变之后,能够增加FGF2稳定性。基因合成FGF2^(K18S/S69C)突变体,与载体pET3c连接后转化至大肠杆菌BL21中,用乳糖诱导,以蛋白质表达量为指标,考察诱导剂浓度、装液体积、诱导时机、时间和温度对表达量的影响。成功构建pET3c-FGF2^(K18S/S69C)突变体重组质粒,经菌落PCR、双酶切法和测序法证实质粒构建正确,目的片段长度约447 bp。在BL21中成功表达,FGF2^(K18S/S69C)最佳发酵工艺为:装液量30 mL/250 mL锥形瓶,A600为0.8,乳糖浓度0.5 g/L,37℃、180 r/min诱导4 h。Western blot分析该表达产物表明,该蛋白质可以和人FGF2抗体特异性结合。通过构建pET3c-FGF2突变体基因工程菌,并优化其表达条件,为后续研究FGF2^(K18S/S69C)突变体提供了基础。 董媛 张家琦 唐一鑫 董雪 马巍 侯寒进 辛本凯 刘彦 王会岩关键词:成纤维细胞生长因子2 突变体 乳糖诱导